Bmal1可能介导了丁酸钠对帕金森病小鼠的神经保护作用

目的探究肠道微生物代谢产物丁酸钠(NaB)通过肠-脑轴对帕金森病(PD)小鼠发挥神经保护作用及其潜在机制。方法39只7周龄雄性C57BL/6J小鼠随机均分为对照组(NC)、模型组(PD)和NaB治疗组(NaB),13只/组。除NC组小鼠注射等体积生理盐水外,其余各组连续5 d腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶[MPTP,30 mg/(kg·d)]建立亚急性PD模型。造模完成后NaB组连续灌胃NaB[300 mg/(kg·d)]治疗14 d,其余两组小鼠灌胃等体积的生理盐水。治疗结束后进行行为学实验检测小鼠的运动功能。Western blot分别检测小鼠纹状体中酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-syn)的表达和结肠中促炎因子核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)以及紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin的表达。通过HE染色观察小鼠结肠的炎性浸润。RNA测序分析筛选出小鼠结肠组织的差异基因。结果行为学实验结果显示,NaB治疗可提高PD小鼠的运动速度(P<0.01)以及四肢拉力(P<0.05)。Western blot结果显示,NaB上调PD小鼠纹状体中TH(P<0.01)和下调α-syn(P<0.05)的表达,NaB上调PD小鼠结肠组织中的Occludin和Claudin的表达(P<0.05),下调了NF-κB、TNF-α和IL-6的表达(P<0.05)。HE染色结果显示,NaB改善PD小鼠结肠的炎性浸润。结肠RNA测序结果显示,节律基因Bmal1可能介导了NaB对PD小鼠的神经保护作用(P<0.05)。总结NaB改善PD小鼠的运动障碍,减少纹状体的多巴胺能神经元的丢失,并改善PD小鼠的结肠炎症,其机制可能与Bmal1有关。

预研式入组方略培养医学生创新能力的探索与实践

重庆医科大学聚焦新医科和创新能力培养需求,探索新医科战略下医学生创新能力培养体系。自2008年开展本科生创新实验项目以来,努力探索通过创新实验项目提高医学生创新能力的具体策略。文章在调查分析十余年来本科生创新实验实施现状和发展趋势的基础上,总结当前通过医学生创新实验培养创新能力过程中存在的问题,探索预研式入组方略在推进医学生创新能力培养中的效果与实践。教师比较分析实施三年来的情况,结果表明预研式入组方略契合医学生在校教育的培养规律,在医学创新人才培养方面具有明显优势,可以较好助力新医科背景下医学创新人才培养。

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。

人hIL-24Δ103重组腺病毒感染诱导A549细胞凋亡

白细胞介素24(interleukin24,IL-24)是近年来新发现的1个IL-10家族细胞因子,具有明显的抗肿瘤活性.为了研究开发高活性、低分子量的IL-24,并探讨其用于肿瘤靶向治疗的可能性,本研究在前期基础上,进一步构建并制备了缺失N端103个氨基酸残基的IL-24(hIL-24Δ103)重组腺病毒,并观察了其对A549细胞生长增殖和凋亡的影响.首先,采用PCR技术扩增IL-24第104位至第206位氨基酸区域的编码序列,制备hIL-24Δ103重组腺病毒.用Ad-hIL-24Δ103重组腺病毒感染肺癌A549细胞.MTT分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染显著抑制了A549细胞的生长.Hoechst 33258染色和流式细胞仪分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致细胞凋亡.Western印迹分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致了PKR和eIF-2α蛋白的表达上调与磷酸化激活,提示PKR和eIF-2α参与了hIL-24Δ103导致的细胞生长抑制和细胞凋亡过程的调节.

pIRES-IL-24-PTEN双表达载体的构建及鉴定

目的构建携带人IL-24和10号染色体缺失的磷酸脂酶与PTEN双基因的真核表达载体,为研究其表达产物的抑癌机制提供基础。方法通过PCR方法获得PTEN、IL-24基因片段,进行T-A克隆,再酶切亚克隆到pIRES载体,酶切、测序鉴定正确后命名为pIRES-IL-24-PTEN载体。脂质体转染A549细胞,提取细胞的总蛋白,Western blot检测IL-24和PTEN蛋白的表达。结果酶切、测序显示pIRES-IL-24-PTEN载体序列正确,Western blot检测到IL-24和PTEN蛋白表达。结论成功构建pIRES-IL-24-PTEN载体,为后续研究奠定基础。

人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达

目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达。结论IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白。

利用球孢链霉菌发酵液消化双歧杆菌细胞壁提取质粒的研究

目的寻找一种经济适用的提取双歧杆菌质粒的方法。方法利用球孢链霉菌发酵产生的变溶菌素来消化双歧杆菌细胞壁,提取质粒,并与商业化溶菌酶法比较。结果球孢链霉菌发酵液与溶菌酶均成功提取到质粒。结论利用球孢链霉菌发酵液提取质粒经济简便。

人白介素24腺病毒载体构建及其生物学活性分析

目的:克隆人白介素24基因,构建其腺病毒载体,获取病毒重组子,并研究其生物学活性。方法:用密执毒素(Mezerein)诱导HeLa细胞表达IL-24,通过RT-PCR获取IL-24 cDNA,将其亚克隆至pAdTrack-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy-1在BJ5183菌中同源重组,HEK293细胞包装扩增,PCR、Western blot鉴定。AdIL-24处理宫颈癌CaSki细胞,通过MTT细胞存活实验检测其活性;Hoechst33342染色、流式细胞仪检测凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、p53蛋白的表达。结果:获取人IL-24的cDNA,序列与GeneBank公布序列完全一致,成功构建腺病毒载体,AdIL-24对CaSki细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用,并上调Bax、p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论:成功构建人IL-24的重组腺病毒载体,其病毒重组子具有生物活性。

1,25-二羟基维生素D_3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制

目的分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D372 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。

人白介素24基因克隆表达、纯化及活性检测

目的克隆人IL-24基因,构建原核表达载体,表达纯化GST-IL-24融合蛋白,检测其活性。方法用密执毒素诱导HeLa细胞表达IL-24 mRNA,通过RT-PCR获取IL-24cDNA,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,IPTG诱导表达,经GSTrap TMF Fcolumn亲合纯化,SDS-PAGE和Westernblot检测融合蛋白的表达,MTT法检测GST-IL-24对宫颈癌CaSKi细胞的抑制作用。结果克隆得到人IL-24的cDNA,序列与GenBank公布序列完全一致,SDS-PAGE电泳可见50kD大小的融合蛋白表达。GST-IL-24以剂量依赖的方式抑制宫颈癌CasKi细胞的生长。结论成功构建人IL-24基因原核表达载体,表达纯化得到GST-IL-24,该融合蛋白对宫颈癌CasKi细胞具有抑制作用。

学生自选课题型基础医学创新实验的组织过程探讨

学生自选课题型创新实验是指学生根据实验中心确定的选题领域,自由选择实验研究课题,在教师的指导下,学生通过查阅文献、选择实验方法、拟定技术路线,在开放实验室中完成实验工作、分析处理数据、撰写论文或总结报告。学生自选课题型创新实验是培养学生创新精神和创新能力的较好途经。本科生创新性实验需要实验中心进行规范化的组织和管理,以确保创新性实验的效果。

柳氮磺胺吡啶对胶原诱导关节炎Th17/Treg细胞的影响

目的:评价柳氮磺胺吡啶对胶原诱导性小鼠关节炎的治疗作用,并探讨其对Th17/Treg细胞的调控作用.方法:构建胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,II型胶原免疫小鼠,21d后将关节炎小鼠分为对照组和柳氮磺胺吡啶组,记录关节炎临床评分,观察病理切片,比较关节炎发病严重程度;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞Th17及Treg细胞的比例.结果:柳氮磺胺吡啶能显著降低CIA小鼠关节炎的临床评分(p<0.05),脾脏Th17细胞水平(p<0.05)在一定程度上促进Treg细胞的表达.结论:柳氮磺胺吡啶调控Th17细胞与Treg细胞平衡,可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一.

亚低温对大鼠颅脑损伤后不同时段线粒体DNA缺失和酶活性变化的影响

目的研究亚低温对颅脑损伤后不同时间神经细胞线粒体DNA(mtDNA)缺失及缺失DNA所编码的酶活性变化的影响,并探讨最佳治疗时程。方法建立重型颅脑损伤及亚低温治疗重型颅脑损伤动物模型并进行区组随机化分组。分为正常组,损伤6、12、24、48、72、96、120h组,降温6、12、24、48、72、96、120h组,共15组,每组15只大鼠。检测mtDNA的缺失,线粒体Na+-K+-ATP酶及细胞色素氧化酶的活性。结果损伤及降温各组的缺失/总mtDNA的比值较正常组均明显升高(P<0.05)。损伤6、12、24、48h组及降温6、12、24、48h组的缺失/总mtDNA的比值均呈逐渐上升趋势。损伤及降温各组细胞色素氧化酶活性较正常组均明显下降(P<0.05)。损伤6、12、24、48h组及降温6、12、24、48h组的细胞色素氧化酶活性均呈逐渐下降趋势。损伤及降温各组Na+-K+-ATP酶活性较正常组均明显下降(P<0.05)。损伤6,12,24,48h组及降温6,12,24,48h组的Na+-K+-ATP酶活性均呈逐渐下降趋势。损伤72、96、120h组及降温72、96、120h组中缺失/总mtDNA的比值、细胞色素氧化酶活性和Na+-K+-ATP酶活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论亚低温治疗在一定的时间范围内对大鼠颅脑损伤后的脑线粒体能量代谢障碍和mtDNA缺失有保护作用。

3种微孢子虫在我国西南部分地区腹泻患者中的流行情况调查

目的调查毕氏肠道微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)、肠炎微孢子虫(Encephalitozoon intestinalis)和兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)在我国西南地区的流行情况。方法收集了124份西南地区腹泻患者的粪便,通过显微镜镜检、PCR检测等手段,进行微孢子虫的分离与鉴定。结果毕氏肠道微孢子虫和肠炎微孢子虫的检出率较高,分别为7.26%(9/124)和3.23%(4/124),兔脑炎微孢子虫的检出率为0。结论西南地区腹泻患者有感染微孢子虫的情况,感染类型多为毕氏肠道微孢子虫和肠炎微孢子虫。

改革医学实验教学以培养学生创新能力

高校是培养高科技创新人才和实现科技创新的重要基地。在管理机制方面，重庆医科大学成立隶属于学校的二级教学单位——实验教学管理中心，有效整合教学资源。结合实验教学大纲，开展分层次的实验教学课程改革；积极开展开放性和创新性实验等医学实践活动．形成系统完善的创新性实验项目实施流程。以调动学生参与项目的积极性，并深入探索医学创新人才的培养途径。