不同有机废弃物作为假单胞菌YT3吸附载体的研究

以草炭为对照,研究了发酵鸡粪、蚯蚓粪和菇渣作为假单胞菌(Pseudomonas)YT3吸附载体的可行性。结果表明:鸡粪吸水率最低,有效菌体释放效率为93.08%;菇渣的吸水性最高,但其菌体释放效率仅为67.59%;菌体释放效率与载体的阳离子代换量呈极显著负相关。用浸提液培养苜蓿种子36h后,鸡粪、蚯蚓粪和草炭处理的种子发芽指数均在80%以上,初步认定肥料浸提液对植物无毒。随着Pseudomonas YT3接种时间的增加,鸡粪、蚯蚓粪和草炭处理中的活菌数均有一个明显的增加过程;在接种后第30d时,3种有机物料中的最大活菌数分别为8.9×108、7.5×108、5.9×108CFU·g-1,分别为初始接种量的560%、326%和187%;在第180d时,有效活菌数开始小于初始接种值。随着接种时间的延长,菇渣处理的有效活菌数呈一直下降趋势。鸡粪和蚯蚓粪,尤其是鸡粪是适宜的Pseudomonas YT3吸附载体。

樱桃根际促生细菌YT3的培养基及发酵条件优化

植物根际促生细菌(PGPR)YT3菌株为假单胞菌(Pseudomonas sp.),可产多种细胞分裂素,对植物根系生长、干物质积累和养分吸收具有较好的促进作用。采用单因素试验和正交试验对YT3菌株液体发酵条件进行了优化。结果表明:YT3的生长曲线符合Logistic生长回归模型,培养3～12 h为菌株对数期,YT3的适宜种龄为12 h;在培养至第7小时,菌株数量增长最快。通过单因素和正交试验对YT3液体发酵条件进行了优化,结果认为影响YT3生长的因素顺序由强到弱为蛋白胨、乳糖、MgSO4、K2HPO4,优化后的培养基配方为(W/V)乳糖2.00%,蛋白胨2.00%,K2HPO40.15%,MgSO4.7H2O 0.02%,CaCl20.01%。在此条件下,YT3菌株的最高活菌数可达51.5×108CFU/mL。进一步的单因子试验确定了YT3摇瓶培养的最佳条件为培养基温度34℃,初始pH值6.5,摇床转速180 r/min,接种量9%。

假单胞菌YT3的绿色荧光蛋白标记及定殖规律

采用绿色荧光蛋白基因标记技术，研究了假单胞茵（Pseudomonassp．）YT3的标记茵YT3-gfP在土壤中的定殖能力。结果表明，gfP基因可以在YT3中稳定表达，且质粒在无选择压力的情况下可以随YT3稳定遗传。YT3主要定殖于樱桃根际土壤中，根际土壤中YT3的数量是非根际土壤中的8．75~28．77倍。YT3在樱桃根际土壤中经历一个快速下降的过程后（0~20d），在第20~40d数量有所上升，第40～80d数量保持平稳，第80～120d缓慢下降。以上分析认为，YT3能够成功进行绿色荧光蛋白标记，主要是定殖在樱桃的根际土壤中，且能长期稳定的定殖。