2017—2022年江苏省常州市孕产妇死亡原因及影响因素分析

目的分析江苏省常州市孕产妇死亡原因及影响因素,探索有效降低孕产妇死亡的方法措施,为政府提供决策依据。方法收集2017—2022年江苏省常州市孕产妇死亡监测相关数据、死亡个案和评审资料,并进行回顾性研究,统计分析孕产妇死亡率、死亡原因、死亡地点、影响因素及变化趋势。结果2017—2022年江苏省常州市孕产妇死亡19例,6年来死亡率分别为10.00/10万、9.48/10万、17.14/10万、9.30/10万、9.77/10万和0/10万,平均死亡率为9.54%,高于全省平均水平和市十三五规划要求。其中,可避免死亡居多,死亡原因以直接产科因素为主,死亡地点以妇幼专科医院和三级综合医院为主。造成死亡的“3个延误”主要为医疗处理延误(84.61%)、决定就诊延误(46.15%)和交通延误(7.69%)。导致死亡的影响因素主要是市级医疗机构人员的知识技能问题(84.61%)和个人、家庭的知识技能问题(69.23%)。结论2017—2022年江苏省常州市孕产妇死亡率总体呈下降趋势,但形势不容乐观。应加强对妇幼保健专科医院及三级综合医院的产科能力和多学科协作建设,提高医疗保健人员的知识技能水平、高危识别能力、快速反应和救治能力,并进行分级诊疗,以降低孕产妇死亡率。

婴幼儿对地鼠肾细胞培养乙型脑炎灭活疫苗的中和抗体应答

应用蚀斑减少中和试验法，测定乙脑流行区婴幼儿对地鼠肾细胞培养乙型脑炎灭活疫苗的中和抗体应答，4～17个月龄婴幼儿在免疫前中和抗体阳性率为2．4％，两针基础免疫后阳性率为57.23％；1年后加强注射1针阳性率为95－95％；1岁基础免疫两针，2、4岁分别加强1针，6岁时抗体阳性率为70．59％，再加强注射1针为94．12％；1岁基础免疫两针，2、4和6岁分别加强注射1针·到10岁时抗体阳性率为96·67％，再加强注射1针上升为100％。作者认为乙脑灭活疫苗基础免疫应注射3针，2～3岁和6岁时再分别加强注射1针，小学阶段可不再加强注射。

蔗糖垫超速离心法提纯乙型脑炎疫苗

经Vero细胞培养的P3株乙脑灭活病毒，以超滤浓缩和硫酸色精蛋白处理后，40％蔗糖垫层在27500r／min离心6小时，收集沉淀制成提纯乙脑疫苗。其蛋白含量在0．012～0.035mg／ml，稀释8倍后其疫苗效价仍能超过日本提纯鼠脑乙脑疫苗参考标准和我国乙脑疫苗参考标准。Vero细胞残余DNA＜100pg／0．5ml，残余牛血清＜1μg／ml。

流行性腮腺炎减毒活疫苗生产工艺的改进

通过试验研究和生产实践 ,将腮腺炎减毒活疫苗生产工艺中细胞长成单层后接种病毒 ,改为细胞和病毒同时接种 ;收获病毒前置 4℃冷释放改为不释放 ,直接收获病毒 ;一批细胞收获一次病毒改为多次收获病毒 ;克氏瓶静置培养改为 15L瓶旋转培养等 ,使疫苗生产周期由 8d缩短为 6d ;生产工序由 6道减少为 4道 ,从而降低了染菌率和生产成本 ,稳定了质量 。

用硫酸鱼精蛋白去除Vero细胞乙型脑炎疫苗中残余DNA

通过试验研究建立一种去除Vero细胞乙脑疫苗中残余细胞DNA的方法，即疫苗经超滤浓缩后加入0.8～1.0mg／ml的硫酸色精蛋白，于4℃静置2h，8000r／min离心5min。DNA与鱼精蛋白共同沉于管底。用该法处理的疫苗不仅使残余DNA达到规程要求（＜100pg／剂量），而且抗原活性无明显丢失。

SARS动物模型的研究

利用分离的SARS CoV毒株BJ 0 1,经滴鼻等途径感染大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等 5个种属的动物 ,筛选对SARS易感的小动物。在此基础上 ,选择食蟹猴和恒河猴进行SARS的人工感染实验 ,评价其作为SARS动物模型的可能性。结果表明 ,大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等动物对SARS均不易感 ,感染后未观察到任何的临床及病理学改变 ,不过从感染 2周后的大鼠和豚鼠的肺和咽等组织样本中检测到了的特异的核酸 ,提示SARS CoV能够在这两种动物的体内复制。从感染猴子的分泌物和脏器中分离出了病毒 ,证明SARS CoV也能够在猴子体内复制。临床和病理组织学检查结果显示 ,SARS病毒接种食蟹猴和恒河猴后 ,可以引起所有实验猴发生间质性肺炎 ,其病理学改变与人类感染SARS病毒后肺部病变近似 ,但病变的严重程度比较人类的轻得多 ,除此之外无任何其它的明显的临床表现及组织病理学改变 ,按照动物模型的指标判断食蟹猴和恒河猴并不是SARS的理想动物模型 ,不过在目前尚没有更理想的动物模型情况下 ,以间质性肺炎为病理学检查指标 。

应用区带离心法纯化地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上。经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99％以上。结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗。

应用光敏生物素探针检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA

用国产光敏生物素,标记Veto细胞全DNA,通过与疫苗中同源DNA的狭缝杂交,检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA含量。检测灵敏度可达1pg。探针稳定长达一年。杂交反应特:异性高,结果重复性好。与同位素探针相比,生物素标记探针简便、经济、快速、稳定。由本法测得,Vero细胞乙脑粗制疫苗中,含DNA为200～400pg/0.5ml;超滤浓缩苗为4×10~4～6×10~6pg/0.5ml;通过柱层析和沉淀法提纯的疫苗则分别低于60pg/0.5ml和1pg/0.5ml。本法同样适用于传代细胞制备的其它生物制品中细胞残余DNA的检测。

应用微载体Vero细胞制备流行性乙型脑炎灭活疫苗最适条件的研究

应用微载体培养Vero细胞研究制备流行性乙型脑炎(简称乙脑)灭活疫苗的最适条件,包括微载体的选择和细胞培养以及细胞日龄、细胞密度、毒种浓度、病毒维持液pH、种毒方式等。并按初步选择的最适条件试生产疫苗,其病毒滴度达log7.33～8.09pfu/ml,其效力(ID_(50))为0.000017～0.000063毫升,均高于现行地鼠肾细胞培养疫苗的水平。

酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白

目的 建立定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白 (hostcellprotein ,HCP)的方法 ,并用该方法检测Vero细胞乙脑疫苗中HCP含量。方法 模拟Vero细胞疫苗生产工艺 ,制备Vero细胞HCP及其免疫血清 ,经过DEAEProteinASepharoseCL -4B亲和层析 ,制备纯化的抗Vero细胞HCPIgG。通过对检测条件的优化 ,确立了酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白的方法 ,并用该方法对Vero细胞乙脑疫苗的收获物、中间产品及纯化样品收样前杂蛋白中HCP进行定量分析。结果 该方法可以检测Vero细胞疫苗加入保护剂前任何阶段产品中HCP含量。结论 ELISA法可以相对定量检测Vero细胞HCP的含量。

乙型脑炎灭活疫苗Vero细胞适应毒种的研究

将乙脑P3株鼠脑毒种在Vero细胞中适应性传代，当传至10代时，毒种的CPE和感染性虽无明显变化，但其免疫原性却明显减弱，因此，用在Vero细胞中传递1至2代的几株建立毒种库（P3V1和P3V2），其涵度分别为7．71和78210gpfu／ml。在毒种中加入以山梨醇为主要成分的稳定剂后，4～S℃保存30天，－30℃1年，－60℃2年，滴度降低约0．51ogpfu／ml，在生产中使用效果良好。

大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗

本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后，用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ，速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上，补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０μｇ／ｍＬ，牛血清含量降至０．５μｇ／ｍＬ以下，细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗，其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。

SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察

观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果 ,为进一步的临床研究奠定基础 .将BJ0 1株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清 ,经 β 丙内酯灭活和超滤浓缩 ,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗 .经HPLC分析其纯度为 97.6 % ,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒 .蛋白质印迹 (westernblotting)分析表明 ,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应 .纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准 .用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体 ,可阻止SARS病毒在猴体内增殖 ,且对SARS病毒攻击具有保护作用 .在低中和抗体情况下 ,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象 .猴体免疫SARS灭活疫苗后 ,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫 ,均未发现局部和全身副反应 。

流行性乙型脑炎病毒在Vero细胞上传代适应的研究

通过乙脑病毒Ｐ＿３株以不同方式在鼠脑和Ｖｃｒｏ细胞间传代适应的研究，培育出适于工业化大生产制备乙脑疫苗的生产毒种。其毒力可达７．０±０．５ｌｇＬＤ５０／０．０４ｍｌ，空斑滴度为７．５±０．５ＰＦＵ／ｍｌ，免疫原性ＩＤ５０值为０．００００１６－０．００００２３ｍｌ；在含有适量人白蛋白的１９９营养液内，该毒种于－３０℃至少可稳定一年；与鼠脑组织毒种相比，传代细胞毒种的毒力、免疫原性及稳定性均与其相当。然而，后者不含脑组织，至少降低了一种过敏的危险。另外，细胞毒种的制备无需手工解剖鼠脑，易于控制外源因子污染，易于标准化。对于大规模生产疫苗、提高疫苗产量和质量，传代细胞毒种比鼠脑组织悬液毒种具有明显的优点。

Vero细胞蛋白过敏原性研究

目的 研究Vero细胞蛋白的过敏原性。方法 取不同剂量Vero细胞宿主细胞蛋白和裂解蛋白致敏豚鼠 ,隔日 1次 ,共 3次 ,每组 3只 ,以牛血清及生理盐水分别为阳性及阴性对照 ,末次致敏后 2 1d攻击 ,并观察攻击后的反应。结果 攻击后 30min ,10 0ng 只以上剂量组均出现过敏反应 ,且反应强度与剂量呈正相关。 2 4h各剂量组过敏反应的恢复情况各不相同。结论 Vero细胞宿主细胞蛋白及裂解蛋白均可以引起过敏反应 ,裂解蛋白的反应强度高于宿主细胞蛋白。

Vero细胞疫苗生产过程中宿主细胞蛋白含量分析

目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化。方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein ASepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCPIgG,通过SDS-PAGE和Western blot分析Vero细胞乙型脑炎疫苗及Vero细胞SARS疫苗各中间产品的蛋白、HCP及病毒抗原成分的含量变化。结果Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗中间产品中均存在一定量HCP,不同的纯化工艺均可以去除大部分HCP,随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP。结论Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗均存在一定量HCP。

应用柱层析法纯化Vero细胞乙型脑炎疫苗

浓缩Vero细胞乙脑疫苗经SepharoseCL－6B柱层析可去除大部分杂蛋白，再经SphacrylS－500HR层析可进一步去除比病毒大的杂质及残余小分子量杂蛋白。经两步凝胶过滤层析纯化后，疫苗总蛋白含量减少约99％，抗原比活性提高87～165倍，抗原回收率达30％～50％，残余牛血清和残余细胞DNA均符合WHO有关规程要求，提纯疫苗的效力达到或超过中国地鼠肾灭活乙脑疫苗和日本提纯鼠脑拔苗的参考苗。

善用已有经验,构建英语词汇教学目标链

著名教育家陶行知先生曾说：＂我们要用自己的经验做根,以这经验发生的知识做枝,然后别人的知识才能接得上去,别人的知识方才成为我们知识的一个有机组成部分。＂经过小学几年的英语学习积累,初中学生在开启一段新的学习之旅前必定具备了许多零碎的知识、技能和生活经验,那么如何充分关注并适时地利用学生的已有经验来进行中学英语词汇教学呢？

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