N-乙酰半胱氨酸对哮喘小鼠模型气道炎症和氧化应激的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对哮喘模型小鼠气道炎症和氧化应激反应的影响及可能的机制。方法:选择18只SPF级BALB/c雌性小鼠,随机均分为对照组、哮喘组、N-乙酰半胱氨酸组,每组6只。哮喘组、N-乙酰半胱氨酸组雾化激发构建小鼠哮喘模型,N-乙酰半胱氨酸组每次雾化开始前30 min灌胃给药N-乙酰半胱氨酸(300 mg/kg),对照组予等量PBS处理,末次激发后24 h内取检测标本。收集支气管肺泡灌洗液行炎症细胞计数;ELISA法检测血清中细胞因子IL-5、IL-13和IFN-γ含量;取小鼠肺组织行HE染色观察病理变化并行炎症评分;比色法测定肺组织中丙二醛和谷胱甘肽含量;实时荧光定量PCR测肺组织核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA表达水平。结果:与对照组相比,哮喘组肺组织大量炎性细胞浸润、肺泡结构破坏明显,炎症细胞数、IL-5、IL-13含量、炎症评分、丙二醛含量均明显升高(P均<0.05),IFN-γ和谷胱甘肽含量均明显降低(P均<0.05),Nrf2和HO-1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与哮喘组相比,N-乙酰半胱氨酸组肺组织炎症细胞浸润减少、肺泡结构破坏减轻,炎症细胞数、IL-5和IL-13含量、炎症评分、丙二醛含量均明显降低(P均<0.05),IFN-γ、谷胱甘肽含量和Nrf2、HO-1 mRNA表达均明显升高(P均<0.05)。结论:NAC可减轻哮喘小鼠气道炎症及氧化应激反应,可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路发挥保护作用。

circ_0007762通过miR-18a-5p调节肺成纤维细胞自噬的机制研究

目的探索circ_0007762和miR-18a-5p的相互作用及在肺成纤维细胞中的作用。方法利用生物信息学分析circ_0007762在特发性肺纤维化(IPF)患者的表达并筛选其miRNA靶标,在转化生长因子(TGF)-β1干预的肺成纤维细胞HFL1中验证其表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-18a-5p mimics与报告基因载体共转染后的荧光素酶活性。CCK-8法检测circ_0007762、miR-18a-5p敲低及TGF-β1、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预后的细胞活力。Western blot检测circ_0007762、miR-18a-5p敲低及TGF-β1、3-MA干预后的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、P62及微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)水平。结果HFL1细胞中,TGF-β1组较Control组circ_0007762表达水平上调,miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在circ_0007762野生型载体中,过表达miR-18a-5p抑制了荧光素酶活性(P<0.05)。circ_0007762敲低后细胞增殖活力下降,并由miR-18a-5p的抑制而恢复,同时3-MA可逆转TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖(P<0.05)。TGF-β1促进α-SMA、collagenⅠ及LC3BⅡ/Ⅰ表达,而抑制P62水平(P<0.05)。相较于TGF-β1+si-NC组,TGF-β1+si-circ_0007762组P62表达上调,其余蛋白下调,并能由miR-18a-5p的抑制而逆转(P<0.05)。此外,3-MA增强了P62的表达而降低了α-SMA、collagenⅠ的表达及LC3BⅡ/Ⅰ水平(P<0.05)。结论circ_0007762可与miR-18a-5p相互作用,通过激活自噬促进肺成纤维细胞增殖,诱导纤维化相关表型。

细胞焦亡与间质性肺疾病研究进展

细胞焦亡又称细胞炎症性坏死,表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂释放细胞内容物及促炎因子如IL-1β、IL-18,从而引起激烈的炎症反应,是一种程序性细胞死亡方式。细胞焦亡主要由半胱天冬氨酸酶(caspase)介导,下游多种细胞焦亡蛋白(gasdermin)家族成员发生剪切和多聚化,导致细胞穿孔进而引起细胞死亡。越来越多的研究表明,细胞焦亡参与了间质性肺疾病的发生、发展过程。本文主要就细胞焦亡的发展历程、信号通路、与其他程序性细胞死亡方式的对比及其与间质性肺疾病之间关系的相关研究进行综述,为研究间质性肺疾病的发病机制、诊断及治疗提供参考。

柴胡皂甙d对特发性肺纤维化肺泡上皮细胞自噬作用机制研究

目的研究柴胡皂甙d(SSd)对特发性肺纤维化(IPF)中Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)自噬的调控作用及其对纤维化程度的干预作用。方法转化生长因子β1(TGF-β1,5 ng/mL)诱导A549细胞48 h建立肺纤维化细胞模型,分别联合SSd低、中、高浓度(2.5、5、10μg/mL)、雷帕霉素(100 ng/mL)处理细胞。CCK8法检测各组细胞存活率,Western Blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/LC3B-Ⅰ、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活化蛋白表达水平,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测细胞内自噬泡形成。结果与正常组比较,模型组细胞存活率下降(P<0.05),E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平亦降低(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62、mTOR通路活性蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),胞质内荧光标记的自噬泡较少。与模型组比较,SSd高浓度组细胞存活率升高(P<0.05),SSd组及雷帕霉素组E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组p-mTOR/mTOR、p-AKT1/AKT1、p-S6K1/S6K1表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组细胞质内荧光标记的自噬泡增多。与SSd低、中低浓度组比较,SSd高浓度组及雷帕霉素组Ecadherin、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd可改善TGF-β1诱导的ATⅡ纤维化改变,可能通过抑制mTOR通路激活诱导细胞自噬发挥作用。