MRI联合血清Periostin、SDF-1对前列腺癌的诊断价值研究

目的探讨磁共振成像(MRI)联合血清骨膜素(Periostin)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)对前列腺癌(PCa)的诊断价值。方法选取2019年2月—2021年2月宁夏医科大学总医院收治的144例疑似PCa患者,均行手术病理证实。其中PCa患者76例作为PCa组,前列腺良性疾病(BPH)患者68例作为BPH组。酶联免疫吸附试验测定血清Periostin、SDF-1表达水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Periostin、SDF-1水平诊断PCa的价值;Kappa检验分析MRI、血清Periostin、SDF-1单独及联合诊断PCa与手术病理结果的一致性。结果两组患者时间-信号强度曲线类型比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PCa组Tmax低于BPH组,最大增强斜率及信号增强率均高于BPH组(P<0.05)。PCa组SDF-1、Periostin水平高于BPH组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清SDF-1水平诊断PCa的最佳截断值为5.91 pg/mL,AUC为0.783(95%CI:0.731,0.873),敏感性、特异性分别为59.21%(95%CI:0.473,0.704)、91.18%(95%CI:0.818,0.967),血清Periostin水平诊断PCa的最佳截断值为37.38 ng/mL,AUC为0.802(95%CI:0.692,0.844),敏感性、特异性分别为64.47%(95%CI:0.527,0.751)、86.76%(95%CI:0.764,0.938)。MRI、SDF-1、Periostin水平与金标准的一致性比较,差异均有统计学意义(P<0.05),与手术病理金标准结果一致较好。MRI联合血清SDF-1、Periostin水平与金标准的一致性比较,差异有统计学意义(P<0.05),与手术病理金标准结果一致性好。MRI、血清SDF-1、Periostin水平联合诊断PCa的准确性、敏感性和阴性预测值最高,分别为90.28%和94.73%(95%CI:0.856,0.984)和93.55%。SDF-1单独诊断PCa的特异性最高,为91.18%(95%CI:0.818,0.967)。MRI、SDF-1单独诊断PCa的阳性预测值最高,均为88.24%。结论MRI联合血清SDF-1、Periostin在PCa的准确诊断方面具有一定的临床应用价值,可用于PCa的鉴别并避免过度诊断,为前列腺疾病的准确诊断提供参考。

一种改进的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法

目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D-Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消化并分离细胞,以1×10~5/ml的密度接种于预铺0.015%多聚赖氨酸的细胞瓶中培养。细胞纯化采用"差速贴壁法"、"梯度血清法"和"十字手摇法",以获取高纯度星形胶质细胞。通过星形胶质细胞特异性表达蛋白即胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)行免疫细胞荧光染色来鉴定细胞纯度。结果:星形胶质细胞纯度大于98%,可多次传代,细胞增殖快,且生长良好。结论:改进的原代星形胶质细胞培养方法,操作简单,细胞纯度高,能满足各种神经科学研究中对高纯度星形胶质细胞培养的实验要求,适宜推广。

电针夹脊穴联合重复经颅磁刺激对伴情绪障碍带状疱疹后神经痛的疗效研究

目的:综合评价电针夹脊穴联合重复经颅磁刺激对伴有情绪障碍的带状疱疹后神经痛的改善作用,观察改善疼痛、情绪障碍的临床疗效。方法:随机将100例伴情绪障碍的带状疱疹后神经痛患者分为观察组、对照组,各50例。两组均采用口服营养神经药及针刺治疗,对照组加用电针阿是穴配合rTMS假刺激;观察组加用电针夹脊穴联合高低频rTMS,分别于治疗前及治疗第4、8周后采用视觉疼痛模拟评分(VAS)评定疼痛改善,汉密尔顿抑郁量表-24(HAMD-24)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评定情绪改善,并评价临床疗效,治疗结束后第3个月随访疼痛情况。结果:观察组综合有效率(82.98%,39/47)优于对照组(62.5%,30/48),差异具有统计学意义;将治疗前以及治疗后的各个时间节点的改善情况进行对比,两组的VAS、HAMD-24和HAMA评分有着明显的改善(P<0.05),且对于观察组的治疗后各时间点的VAS、HAMD-24和HAMA评分情况均要优于对照组(P<0.05);疗程结束后第3个月进行回访,两组无疼痛加重。结论:电针夹脊穴联合重复经颅磁刺激,可以有效改善疼痛和情绪症状,且未来长时间内的治疗效果是稳定可靠的。

X射线辐照引起GC1小鼠精原细胞凋亡诱导因子核转位并诱导其凋亡

目的研究X射线辐照后GC1小鼠精原细胞凋亡诱导因子(AIF)细胞定位的变化。方法 GC1细胞分别给予0、3、6、9 Gy X射线辐照,溴脱氧尿苷(Brd U)掺入实验检测辐照对细胞增殖速率的影响;辐照后48 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核凝集情况,免疫荧光细胞化学染色检测胞质及胞核中AIF蛋白定位的变化,Western blot法分析细胞总蛋白、胞质蛋白及核提取物中AIF蛋白的水平。结果随着辐照剂量的增加,GC1细胞增殖速率显著减慢,细胞活性降低。6 Gy X射线辐照后全细胞提取物中AIF蛋白总量变化不大,但细胞核提取物中AIF显著增多,即AIF出现核转位的现象。结论 X射线辐照能够诱导小鼠精原细胞发生凋亡,该过程中伴有AIF入核的现象。

Iduna在Aβ诱导大鼠星型胶质细胞损伤中的作用

目的:脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病重要的病理特征。传统认为Aβ沉积能够诱导神经元凋亡。最近发现Aβ沉积同样能够诱导星型胶质细胞凋亡。Iduna是新近发现的内源性神经保护基因。本文的研究目的是探索Iduna在Aβ所致星型胶质细胞损伤机制中的作用。方法:采用大鼠神经胶质瘤细胞株C6进行细胞培养,细胞密度达到80%时传代培养。细胞随机分为对照组和Aβ组,经MTT法、比色法、Western Blot等实验方法,检测Aβ所致C6细胞损伤时细胞培养上清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和C6细胞中聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP1)通路内的Iduna蛋白的表达。结果:与对照组比较,Aβ组中Aβ能够增加C6细胞培养上清液中MDA含量,降低SOD活性;同时,Aβ可下调C6细胞中PARP1通路内的Iduna蛋白的表达。结论:Aβ引起星型胶质细胞损伤可能与神经保护因子Iduna下调从而引起PARP1死亡通路激活有关。

新制癌菌素诱导小鼠海马神经元细胞DNA损伤的作用研究

为了探索化学诱导物新制癌菌素(NCS)对小鼠海马神经元细胞株HT22 DNA损伤的影响,研究以9Gy X射线辐照为阳性对照组,通过CCK8试剂盒法检测绘制NCS作用下HT22细胞生长曲线以明确NCS处理细胞的最佳浓度,经Hoechst染色和TUNEL染色观察该剂量NCS对细胞DNA损伤及凋亡的影响,用免疫荧光染色结合Western blot分析HT22细胞核中DNA损伤反应酶PARP1的表达变化.结果显示,NCS作用的终质量浓度为1 000 ng/m L时,从48 h起对HT22细胞增殖表现出显著的抑制作用;Hoechst染色可见NCS作用下HT22细胞DNA损伤加剧,TUNEL染色提示NCS能够诱导细胞凋亡;免疫荧光染色和Western-blot实验显示NCS能够促进细胞核内PARP1的表达.说明化学诱导剂NCS能够引起HT22细胞DNA损伤及凋亡以及上调DNA损伤反应酶PARP1的表达,可以用于模拟大剂量射线对细胞的辐射损伤效应.

锌指蛋白146(RNF146)对吡柔比星引起的小鼠睾丸精原细胞DNA损伤的保护作用

目的评价锌指蛋白146(RNF146)对化疗药吡柔比星引起的GC-1小鼠睾丸精原细胞DNA损伤的保护作用。方法采用1.0μg/m L吡柔比星处理的方法复制DNA损伤的小鼠GC-1精原细胞模型。构建小鼠rnf146慢病毒过表达载体p CDHrnf146并包装rnf146过表达慢病毒,感染GC-1细胞上调rnf146的表达,Western blot验证过表达效率。评价RNF146对吡柔比星引起的GC-1细胞增殖抑制、凋亡增多及DNA损伤的保护作用。结果成功构建了p CDH-rnf146重组质粒并包装具有良好感染效率的RNF146过表达慢病毒。溴脱氧尿苷(Brd U)掺入标记显示RNF146能够减轻吡柔比星引起的GC-1增殖抑制。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)提示RNF146能够抑制吡柔比星诱导的GC-1细胞凋亡。彗星实验显示RNF146过表达能够有效保护吡柔比星作用下GC-1细胞DNA的完整性。结论 RNF146对化疗药吡柔比星引起的小鼠睾丸精原细胞损伤具有保护作用。

精子特异性锌指蛋白146条件性敲除小鼠的构建及鉴定

目的探讨构建精子特异性RNF146敲除小鼠及其鉴定方法。方法从NCBI网站上检索小鼠RNF146的基因序列,分析外显子与各剪接体的关系以及起始密码子和终止密码子所在区域,选择条件性基因敲除片段。构建基于Cre/Lox P系统的RNF146条件性敲除杂合子(RNF146^(flox/+))小鼠(F1代)。取F1代RNF146^(flox/)+杂合子小鼠自交,PCR鉴定其后代基因型,挑选RNF146纯合子敲除(RNF146^(flox/flox))雌鼠与精子特异性Cre转基因雄鼠AQP2-Cre进行杂交。PCR检测其后代基因型,选取AQP2-Cre阳性的RNF146杂合子雄鼠(AQP2-Cre;RNF146^(flox/+))与RNF146纯合子(RNF146^(flox/flox))雌鼠回交后筛选AQP2-Cre阳性的RNF146纯合子小鼠(AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox))即为精子特异性RNF146敲除小鼠。选取9~10周龄(体成熟)的精子特异性RNF146敲除小鼠,从附睾和输精管中分离精子,以AQP2-Cre;RNF146^(flox/+)小鼠为对照,Real-time PCR及Western blot分析精子中RNF146表达水平确认敲减效率。结果RNF146基因四号外显子被选为敲除区域来构建基于Cre/Lox P系统的条件性敲除小鼠。F1代杂合子(RNF146^(flox/+))小鼠自交后代中约1/4个体为RNF146^(flox/flox);AQP2-Cre转基因工具鼠与纯合子(RNF146^(flox/flox))雌鼠交配后代中具有AQP2-Cre;RNF146^(flox/+)基因型的小鼠约占1/2;AQP2-Cre;RNF146^(flox/+)雄鼠和RNF146^(flox/flox)雌鼠交配后代中近1/4为AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox)小鼠。成年AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox)小鼠精子中RNF146 m RNA(Real-time PCR)和蛋白表达水平(Western blot)分别降低77.3%(P<0.001)和89.2%(P<0.001)。结论成功构建精子特异性RNF146条件性敲除小鼠AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox)。