牛瑟氏泰勒虫双拷贝p23表面蛋白基因真核表达

为构建牛瑟氏泰勒虫双拷贝p23表面蛋白基因真核表达质粒,根据GenBank牛瑟氏泰勒虫p23表面蛋白基因序列(D84447),分别设计2对特异性引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫基因组DNA,采用SOE-PCR技术构建双拷贝p23基因,克隆到pMD-18一T载体上,经过PCR、酶切鉴定及测序后,亚克隆到pVAX-I真核表达载体上,经过鉴定后采用脂质体法将重组质粒pVA XI-2p23转染到BHK-21细胞,用IFA和RT-PCR来鉴定目的基因的表达情况.结果表明,成功构建了牛瑟氏泰勒虫双拷贝p23表面蛋白基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中获得表达.

干旱胁迫对菊花‘千纱’光合生理特性影响

【目的】研究持续干旱胁迫对菊花‘千纱’(Chrysanthemum morifolium Ramat.‘Chispa’)光合特性和生理特性的影响,为其引种栽培及应用提供理论依据。【方法】采用盆栽控水法进行试验研究,研究不同干旱胁迫程度下光合生理参数的变化。【结果】随着干旱胁迫的加剧,菊花‘千纱’叶片的Pn与Tr、Ci、Gs均呈下降趋势;由相关性分析可知,菊花‘千纱’的Pn与Tr、Ci、Gs均呈显著正相关(P<0.01);Chl含量、RWC均呈下降趋势,Pn与Chl、RWC呈正相关(P<0.01)。随着干旱胁迫时间延长,菊花‘千纱’的Pro含量持续上升,SS、SP含量及SOD、CAT、POD活性呈先上升后下降。【结论】菊花‘千纱’有较强的抗旱能力,维持其正常生长耐旱时间可达21d。

牛瑟氏泰勒虫二温式PCR快速检测技术的建立及初步应用

为建立一种牛瑟氏泰勒虫快速检测技术,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列(D84447)设计1对特异性引物,扩增出大小为244 bp的基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫二温式PCR能检测出的最高敏感度为171 fg/μL,与牛新孢子虫、弓形虫和卵形巴贝斯虫不产生交叉反应,对48份临床血液样本进行检测,阳性检出率为66.67%。用同一对引物对28份临床血液样本分别进行二温式PCR和三温式PCR检测,阳性符合率为95%,总符合率为96.43%。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于牛瑟氏泰勒虫病的快速临床诊断及流行病学调查。

猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立

根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELISA节约近2h,最低能检出0.36pg的猪附红细胞体DNA,敏感性比常规PCR高10倍,且与猪链球菌、猪肺炎霉形体、大肠杆菌等无交叉反应。用该方法对64份猪血液中提取的DNA样品进行检测,结果阳性检出率为35.9%,明显高于常规PCR的28.1%。结果表明,建立的猪附红细胞体PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的特点。

基于聚醚胺一步还原和共价接枝的氧化石墨烯制备阻燃环氧树脂纳米复合物

通过环氧氨解反应,将聚醚胺(Huntsman Jeffamine M-2005)共价接枝到氧化石墨烯表面,同时实现氧化石墨烯的还原.通过红外光谱(IR)、X射线光电子能谱(XPS)、拉曼光谱、X射线衍射分析(XRD)、以及透射电镜(TEM)对聚醚胺接枝的还原石墨烯材料进行了表征.结果表明,聚醚胺不仅成功地接枝到了还原氧化石墨烯表面,而且还一定程度上还原了氧化石墨烯.进一步地,将聚醚胺接枝的还原氧化石墨烯添加到环氧树脂中,制备了功能化石墨烯/环氧树脂纳米复合物.热重分析(TGA)和极限氧指数(LOI)测试显示当聚醚胺接枝的还原石墨烯添加量为10 wt%时,复合物的残碳率(700℃)和LOI分别提高了137%和30%,表明聚醚胺接枝的还原石墨烯显著提高了环氧树脂的阻燃性能,是一种优良的具有潜在应用价值的阻燃剂.

犬附红细胞体PCR检测方法的建立及应用

通过将GenBank上报道的犬附红细胞体16S rRNA基因序列与其他物种同源序列进行比对,取其种间特异性和种内保守性较高区域设计1对引物,以吉林省延边地区犬附红细胞体基因组DNA为模板进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验验证,建立犬附红细胞体PCR诊断方法,应用于临床检测。结果表明:该方法可成功扩增出大小为529 bp的犬附红细胞体片段,与GenBank中German no.1(AY150973.1)序列同源性为98.5%。其最低DNA检测量为25 fg/μL,不与犬巴贝斯虫、犬弓形虫及猪附红细胞体等病原体基因组产生交叉反应。同时通过对57份犬血液样本的检测结果说明,该方法检出率明显高于姬姆萨染色镜检法,且避免了假阳性。本试验所建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,为犬附红细胞体病的诊断提供了一种可靠的方法。