ELISA法检测猬迭宫绦虫抗体的研究

目的 探讨研制猬迭宫绦虫特异性诊断方法。 方法 将已克隆的编码猬迭宫绦虫幼虫半胱氨酸酶的基因重组到表达载体内 ,制备高纯度的基因工程抗原 ,以此基因工程抗原制成酶联免疫吸附试剂盒 ,检测 6例裂头蚴病患者血清。 结果与结论 基因工程抗原能与裂头蚴病患者血清发生很强的特异性反应 ,而不能与囊虫病患者血清发生反应。此方法的建立为裂头蚴病的特异性诊断奠定了基础。

超声波提取连翘叶总黄酮与总酚酸的实验研究

目的确定实验室超声波提取连翘叶总黄酮、总酚酸的最佳处理条件。方法采用正交设计法对甲醇浓度(A)、超声时间(B)、提取次数(C)和提取温度(D)4个因素进行考察,确定最优超声提取条件。结果因素D和C对测定指标均有显著性影响,因素A、B为不显著因素。结论以60%甲醇,超声时间10 m in/次,提取3次,提取温度45℃为最佳超声提取条件。

溴氰菊酯对小鼠免疫系统的损伤作用

目的探讨溴氰菊酯 (deltamethrin)对小鼠的免疫损伤作用。方法取幼龄小鼠 ,分别给予溴氰菊酯0 .0 2 8、0 .2 81、0 .5 6 2mg/kg以及环磷酰胺 (cyclophosphamide) 2 5mg/kg灌胃染毒 ,连续 10天 ,然后分别测定小鼠免疫器官脏器系数、巨噬细胞吞噬功能、外周血T淋巴细胞酸性α 醋酸萘酯酶 (acid α naphthaleneacetateesterase,ANAE)阳性率。结果溴氰菊酯染毒后 ,各实验组小鼠胸腺系数、脾脏系数均呈下降趋势 ,0 .5 6 2mg/kg组脾脏系数有明显降低 (P <0 .0 5 ) ,其他各实验组与阴性对照组均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,阳性对照组各指标均较阴性对照组有显著降低 (P <0 .0 1) ;0 .2 81和 0 .5 6 2mg/kg组巨噬细胞吞噬率有显著降低 (P <0 .0 5、P <0 .0 1) ,0 .5 6 2mg/kg组巨噬细胞吞噬指数亦有显著降低 (P <0 .0 5 ) ,阳性对照组上述两指标均较阴性对照组有显著降低 (P <0 .0 1) ;各实验组外周血T淋巴细胞ANAE阳性率呈下降趋势 ,但与阴性对照组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论高于0 .2

上颌无牙颌种植固定修复中种植体位置对应力分布的影响

目的:在8颗种植体支持的上颌无牙牙合固定义齿修复设计中,通过对有限元模型的应力分布分析,选择最佳种植位点设计。方法:在牙列缺失上颌建立8颗种植体支持的6种固定义齿三维有限元模型。以国际牙科联盟的FDI牙位表示法命名,模型Ⅰ:11,13,15,17,21,23,25,27;模型Ⅱ:13,14,15,17,23,24,25,27;模型Ⅲ:11,14,16,17,21,24,26,27;模型Ⅳ:14,15,16,17,24,25,26,27;双侧不对称模型Ⅴ:11,14,15,17,21,24,25,26;模型Ⅵ:11,13,15,16,21,23,25,26。300N的应力垂直加载于固定义齿右侧第一、二磨牙近中舌尖颊斜面(与水平面呈30°角)。利用ABAQUS软件进行力学分析。结果:越靠近应力加载位置,种植体承担的应力越大,应力主要集中在磨牙区,且在末端种植体颊侧颈部显著集中,单端悬臂应力较双端悬臂应力更为集中。末端种植体应力由小到大依次为模型Ⅰ<模型Ⅵ<模型Ⅲ<模型Ⅳ<模型Ⅱ<模型Ⅴ,模型Ⅴ是模型Ⅰ的1.8倍。同一模型中,末端种植体承担应力是中间种植体的7倍。结论:种植体的位置排列影响应力分布,种植体分布越分散,越能有效分散咬合力,应力分配更为合理。

mRNA差异显示技术分离猬迭宫绦虫幼虫特异表达基因

目的 查找猬迭宫绦虫幼虫裂头蚴阶段特异性表达基因。 方法 裂头蚴和成虫组织用异硫氢酸胍一步法提取总 RNA,用 DNA酶去除总 RNA中污染的 DNA。使用 T1 2 MA、T1 2 MC、T1 2 MG和 T1 2 MT4种锚定引物反转录合成 c DNA,再用 1种随机引物与上述 4种锚定引物在含同位素的反应液中进行 PCR反应。将 PCR产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,经放射自显影后 ,从凝胶上选出裂头蚴与成虫不同的差异带 ,PCR扩增后经杂交试验鉴定出不同种类的基因片段 ;以筛选出的差异带作探针 ,分别与裂头蚴和成虫 RNA进行 Northern杂交证实裂头蚴阶段表达基因 ;将差异带测序后与 Gen Bank中的序列进行同源性比较。 结果 从凝胶中共选出 11条差异带。将回收的 11条带再经PCR扩增和杂交试验 ,从中选出 3种不同的基因片段。经 Northern杂交证实片段 1和片段 2为裂头蚴特异表达基因 ,而片段 3为裂头蚴和成虫共同表达的基因。3个基因片段测序后与 Gen Bank中的基因进行同源性分析 ,基因片断 1和 2无同源序列 ;基因片段 3与多种生物的 2 8S r RNA同源。 结论 通过 m RNA差异显示技术查找出

猪囊尾蚴cDNA文库的构建

从猪囊尾蚴内提取 m RNA经反转录合成 c DNA,应用定向克隆的方法 ,将合成的 c DNA片段重组到噬菌体载体 Uni- ZAP XR的 Eco R 和 Xho 双酶切位点之间。5 μg poly(A) + RNA所构建的表达文库容量为 0 .98×10 6重组子。经含有 IPTG和 X- gal的颜色选择平皿测定 ,提示重组率达 86 %。随机取 6个噬菌斑做 PCR,检查插入片断的长度在 10 0～ 2 0 2 0

2,3-二巯基乙二酸自组装膜电极对多巴胺和尿酸的同时测定及其应用

利用电化学方法研究了2，3-2-N,基乙二酸（DMSA）自组装膜的电化学行为，发现DMSA自组装膜对于多巴胺和尿酸的氧化能够起到明显的电催化作用．在优化条件下，多巴胺与尿酸的氧化峰电流分别与其浓度在1．0×10^-4～1．0×10^-3和8．0×10^-4～9．0×10^-3mol／L内呈良好的线性关系，检出限分别为3．0×10^-5和8．0×10^-5mol／L．该电极用于实际样品的测定，结果满意．

流动注射化学发光法测定多巴胺

目的：建立硫酸环境中流动注射化学发光法测定多巴胺的新方法。方法：在硫酸环境下，利用高锰酸钾氧化多巴胺产生化学发光的体系，考察了酸的种类及酸度、高锰酸钾的浓度及副泵转速、时间对该体系的影响。结果：在硫酸环境中，高锰酸钾可以氧化多巴胺产生化学发光。该体系的发光强度与多巴胺的浓度在1．25—25．0mg／L的线性范围内呈良好的线性关系，方法的检出限为1．00mg／L。结论：本法可用于针剂中多巴胺的测定，结果令人满意。

苯酚与DNA相互作用的光谱研究

目的用荧光光谱法研究苯酚和小牛胸腺DNA(calf thymus DNA,ct-DNA)之间的相互作用。方法采用荧光光谱的变化、离子强度的影响、温度的影响等实验研究苯酚与小牛胸腺DNA间的相互作用模式,并根据Stern-Vol mer方程进行数据处理。结果在pH7.0的磷酸盐缓冲溶液中,苯酚的荧光激发峰和发射峰分别位于273nm和299nm处。ct-DNA的加入对苯酚的荧光存在着猝灭作用,室温条件下测定ct-DNA对苯酚的动态猝灭常数为7.062×103L/mol。结论苯酚与ct-DNA之间属于动态猝灭过程,未形成络合物。

肿瘤抗原致敏的树突状细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究肿瘤细胞裂解物体外致敏的树突状细胞的抗肿瘤效应。方法 经粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)和白细胞介素 4(IL -4 )协同诱导小鼠骨髓树突状细胞 (DC)前体为DC :反复冻融制备肿瘤细胞可溶性抗原 ,将肿瘤细胞可溶性抗原与DC共育 ,获得肿瘤抗原致敏的DC ,将其直接作为瘤苗对荷瘤小鼠进行免疫治疗实验。结果 从每只小鼠股骨中分离的DC前体细胞经GM -CSF和IL -4协同诱导 ,可获得 ( 3～ 5 )× 10 6个树突状细胞 ;用肿瘤细胞可溶性抗原致敏的DC瘤苗治疗的荷瘤小鼠 ,其脾淋巴细胞转化率明显高于其它实验组及对照组 ,其瘤体生长减缓 ,生存时间明显延长。结论 肿瘤抗原体外致敏的DC对荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用 ,可望成为肿瘤免疫治疗的新途径。

荧光素及聚乙二醇增敏流动注射化学发光法测定甲磺酸酚妥拉明

目的建立流动注射化学发光测定甲磺酸酚妥拉明的新方法。方法利用荧光素及聚乙二醇-200增敏高锰酸钾氧化甲磺酸酚妥拉明化学发光新体系,考察酸的种类及酸度、高锰酸钾、荧光素及聚乙二醇的浓度对该体系的影响。结果荧光素及聚乙二醇-200对该体系的化学发光强度分别增加了11%和14%。该体系的发光强度与甲磺酸酚妥拉明浓度在0.08-10.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,方法的检出限为8.0μg/L。结论本法可用于针剂中甲磺酸酚妥拉明的测定,结果令人满意。

猬迭宫绦虫幼虫含重复序列的cDNA的分子克隆

目的 从分子水平研究猬迭宫绦虫幼虫——裂头蚴的某些蛋白抗原的基因结构。方法 用鼠抗裂头蚴多克隆抗体筛选裂头蚴 c DNA文库 ,筛选出的阳性克隆 ,经亚克隆 ,测序后 ,分析其一级结构特点。以克隆出的 c DNA作探针进行 Northern杂交实验 ,检测 m RNA的长度。结果 从c DNA文库中筛选出两个克隆 (长度分别是 36 6 bp和 45 8bp)。两个克隆的 5’端都没有起始密码 ;3’端都没有 poly(A) ,但是其中一个克隆有 poly(A)信号。两个克隆都有一个由 12 3个核苷酸组成的重复单位 ,其中只有一个核苷酸不同。重复单位编码的 41个氨基酸内有一个糖基位点 ,中性氨基酸占 41.46 %。 Northern杂交结果显示 ,裂头蚴从 1.5 kb到 4kb处有多个很强的杂交带 ,而成虫没有杂交带。结论 裂头蚴体内含有丰富的由重复单位组成的分子量大小不同的抗原。

河北正定农村甲型肝炎的流行病学研究

目的 了解河北农村甲型肝炎 (甲肝 )在非流行期与流行期的流行强度、流行规律。方法 在正定的A乡 ,于 1990～ 1992年连续 3次普查 1985～ 1989年间出生的儿童甲型肝炎病毒 (HAV)的流行率 ,以及各年龄组HAV易感者的新感染率 (非流行期 ) ;对正定的B乡 ,于 1992年末对 1987～ 1991年出生的儿童普查HAV感染率。 3个月后 ,该乡发生甲肝流行 ,对流行期甲肝的流行特点进行了调查。结果 正定农村 1～ 8岁儿童HAV感染率从约 4%随年龄上升到约 90 % ;非流行期各年龄儿童易感者的HAV感染率为 7 3 %～ 33 3% ,年度间有波动。流行期HAV新感染率极高 ,除 1～岁组为 36 8%稍低外 ,其余均在 5 8 9%～ 81 1%之间 ,且无组间差异。儿童感染HAV以隐性过程为主 ,年龄较大者 ,呈现显性过程者所占比例亦高。结论 甲型肝炎在正定农村呈地方性流行 ,甲肝流行无须外来传染源的介入。流行期HAV在一定范围内迅速广泛传播。所以 ,我国北方农村儿童需要甲肝疫苗的保护。安全有效的甲肝疫苗会使我们比较容易地控制农村HAV的流行。

甲型肝炎减毒活疫苗加强免疫的效果

目的 观察国产甲肝减毒活疫苗不同免疫程序的加强免疫效果 ,以探求适宜的甲肝减毒活疫苗加强免疫程序。方法 在河北省正定县对 1～ 7岁的儿童采血检测抗 -HAV ,筛选甲肝易感者 ,按出生月份的单双数随机分为疫苗组和对照组 ,疫苗组接种 1针 ,观察免疫效果。在 1针法的基础上 ,随机抽取部分观察对象 ,分别按0、12月和 0、2、6月程序进行加强免疫 ,并于免疫后 1、2、3、6、7、12、13和 2 4个月采血清 ,观察免疫后的抗体动态。结果 接种 1针疫苗后 2～ 3个月抗体阳转率和几何平均效价均达高峰 ,分别为 92 .2 %～ 94 .9%和 12 6 .2～ 131.3mIU/ml,以后开始下降 ,12个月时降至 79.8%和 79.6mIU/ml。加强免疫后 ,抗体阳转率均达 10 0 % ,抗体水平成倍上升 ,其中以 0、12月程序免疫后抗体几何均值最高 ,为 32 94 .5mIU/ml。结论 甲型肝炎减毒疫苗具有良好的免疫记忆反应 ,采用 0。

固相胶体金法检测乙型肝炎表面抗原

本文报道了用固相胶体金法检测血清中表面抗原(HBsAg)。氯金酸经枸椽酸钠还原制成17nm左右的胶体金颗粒,与抗-HRs结合后,经双抗体夹心法检测HBsAg,最后用硝酸银溶液显影观察结果。检测78份病人血清并与酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行了比较,其特异性、敏感性、重复性相当于ELISA,但胶体金与抗体结合要比酶与抗体结合简单得多,而且结果可长期保存。

槐实的诱变活性试验

本文介绍了诱变活性(Ames)试验的原理和方法。为了解槐实的致畸性,并以此试验对其进行了诱变活性的鉴定,同时对细菌学试验中的一些问题进行讨论。槐实含有各种水溶性维生素、还原糖、蛋白质和芦丁等成分,具有降低血管阻力、改善冠状动脉循环、降低血清转氨酶和消炎的作用,故该品有保肝和治疗痔疮的效果。试验证明槐实无诱变活性,表明其安全可靠。