原生质体融合技术及其在微生物遗传育种上的应用

原生质体融合技术是微生物遗传育种上一项重要技术,它具有遗传信息传递量大,不受亲缘关系的影响,可有目的地选择亲株以选育理想的融合株,便于操作等优点,在遗传育种中具有广阔的应用前景。本文从原生质体的制备及其影响因子、原生质体融合的促融方法、原生质体融合子的筛选以及融合技术在微生物菌种选育中的应用等方面进行了综述。

4种药用植物内生放线菌的分离与初步研究

目的分离并研究具有抑菌活性的药用植物内生放线菌。方法使用高氏一号培养基定向筛选药用植物内生放线菌,采用滤纸扩散法评价分离菌株的抑菌活性,进而通过形态学、生理生化等特征的分析对其进行鉴定。结果共分离得到63株内生放线菌。对金黄色葡萄菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等表现出选择性抑菌作用的菌株有17株,其中Y6菌株抗菌谱较广、抑菌作用较强。初步鉴定结果表明Y6菌株是链霉菌属的一个成员。结论 Y6对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好。

养殖蟹类病害的研究进展

随着蟹类养殖业的迅猛发展,做好蟹类的健康养殖工作,减少养殖过程中各种病害侵扰,提高养成率,保持经济效益稳定增长,已刻不容缓地提到蟹类养殖的日程上来。引起养殖蟹类病害的主要原因有环境因素、病原微生物以及养殖技术,现就蟹类病害的研究进展作一阐述,以期对蟹类病害的诊治与防控提供参考。

含酚废水处理技术现状及进展

酚类物质对人的毒害作用大,对含酚废水的处理研究成为当前的热点。阐述了物理法、化学法、生物法等方法在治理含酚废水中的研究进展,并对将来处理含酚废水的发展方向进行了展望。

浅谈如何提高病原微生物与免疫学教学效果

病原微生物学与免疫学是一门重要的医学基础课程,针对内容繁多琐碎、抽象难懂的特点,本文从优化教学内容、激发学生学习兴趣、重视学生实践能力培养及考核方式多样化四个方面进行了探索,取得了良好的教学效果。

1株颉颃放线菌的分离及抑菌活性的初步研究

从土壤中分离筛选到1株对多种病原性细菌具有抑菌作用的颉颃放线菌T12,并综合形态学特征、生理生化特征对其进行初步鉴定,测定其发酵液的稳定性。结果表明,T12对革兰氏阳性球菌的抑菌效果较好;在70℃以上,随着温度升高,发酵液抑菌活性略微减弱,但在100℃时仍表现出一定的抑菌活性,发酵液对温度的稳定性较强;在pH值小于6的条件下,随着pH值的降低发酵液抑菌活性减弱,但其对碱的稳定性较强。

近四年我校学生肠道感染情况调查

目的:了解我校学生常见肠道寄生虫感染情况。方法:采用生理盐水直接涂片法和饱和盐水浮聚法对604名学生粪便检查,以查到虫卵记为阳性,分析学生肠道寄生虫感染率。结果:共调查604人,总感染率为6.13%,其中23人感染蛔虫,感染率为3.80%;3人感染钩虫,感染率为0.50%;8人感染鞭虫,感染率为1.32%;2人感染蛲虫,感染率为0.33%;1人感染姜片吸虫,感染率为0.17%。结论:我校学生肠道寄生虫感染率低于全国平均水平。今后在进一步预防寄生虫病方面应采取加强对学生进行卫生宣传教育,提高全校学生的防病意识,改善不良的饮食习惯,粪便无害化处理,依法取缔无证摊贩等综合性防治措施。

养殖锯缘青蟹呼肠孤样病毒粒子的电镜观察

经过对患病青蟹Scylla serrata的组织进行了超薄切片电镜观察,在病蟹的鳃上皮细胞、心肌细胞、胃和肠道上皮细胞中发现了大量的呼肠孤样病毒粒子。该病毒粒子的大小为60 nm左右,二十面体对称,无囊膜,在感染组织细胞浆中呈晶格状排列。根据病毒的形态特征和组织分布形态,初步认为该病毒为水生呼肠孤病毒,暂将其命名为青蟹呼肠孤病毒(Scylla serratareo-like virus,Ss-REO)。

基于FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)和破伤风毒素轻链(TLc)分别对目的蛋白进行酶切反应。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件进行优化。酶动力学参数分别测定TLc和BLc切割底物荧光标记底物的Km和Kcat值。结果设计并成功构建荧光标记底物的重组表达质粒。表达并纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白,命名为CYVAMP。利用ALc、BLc和TLc分别对CYVAMP进行酶切,CYVAMP能被BLc和TLc识别切割而不能被ALc切割。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件优化得到:CYVAMP较适宜的范围为0.2~32μmol/L,酶标仪滤光片灵敏度设定的较合适的设置范围在65~110;(对于96孔板)动态实时检测间隔时间2 min较为合适,检测持续时间从30 min到120 min较合适。CYVAMP在内肽酶BLc作用下随反应时间变化与荧光值528与485比值作图最大时在1.5左右,最小在0.5左右。酶动力学参数测定得到BLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(17.6±2.6)μmol/L和(4.16±0.28)s-1。TLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(40.8±3.5)μmol/L和(2.65±0.32)s-1。结论成功构建基于FRET技术的分析法能满足对破伤风毒素和B型肉毒毒素的检测及抑制剂的高通量体外筛选所需。

钩端螺旋体外膜蛋白的研究概况

钩端螺旋体外膜蛋白是钩端螺旋体外膜的重要组成成分,也是钩体一种重要的抗原分子。既有免疫原性又有免疫保护作用。大量的研究表明,钩体外膜蛋白是钩体重要疫苗分子之一。现就钩端螺旋体外膜蛋白的研究情况作一综述。

研究钩端螺旋体外膜脂蛋白Loa22的免疫原性

目的研究钩端螺旋体外膜脂蛋白Loa22的免疫原性。方法取健康豚鼠12只,分蛋白免疫组和PBS(磷酸盐缓冲液)对照组,每组6只。蛋白免疫组以Loa22重组蛋白50μg加等量完全弗氏佐剂乳化一免,Loa22重组蛋白配以不完全弗氏佐剂乳化二免和三免;对照组注射PBS与佐剂混合物。分别检测血清中抗体和T淋巴细胞增殖水平。结果在末次免疫后2周时血清抗体效价和T淋巴细胞增殖与对照组相比,均显著升高(P<0.05)。结论 Loa22重组蛋白有较好的免疫原性。

钩端螺旋体外膜蛋白Loa22免疫血清与不同血清型钩端螺旋体的交叉免疫反应

目的探讨钩端螺旋体(钩体)外膜蛋白Loa22免疫血清与不同血清型钩体间的交叉免疫反应作用,为筛选钩体候选疫苗分子提供依据。方法制备钩体重组Loa22蛋白、LipL32蛋白豚鼠免疫血清,以LipL32免疫血清为阳性对照,未免疫豚鼠为阴性对照,ELISA测定与我国常见的各血清型钩体株的交叉反应的Loa22蛋白免疫血清效价。结果与钩体犬群犬型56603株、致热群致热型56605株、澳洲群澳洲型56607株、波摩那群波摩那型56608株、流感伤寒群临海型56609株、七日群七日热型56610株及明尼群明尼型56655株反应的钩体Loa22蛋白免疫血清效价分别为1∶81 920、1∶20 480、1∶40 960、1∶40 960、1∶40 960、1∶10 240和1∶10 240。结论Loa22蛋白免疫血清与不同血清型钩体有良好的交叉免疫反应性。

钩端螺旋体外膜蛋白Loa22交叉免疫保护作用研究

研究钩端螺旋体外膜蛋白Loa22免疫血清对不同血清型钩端螺旋体的交叉免疫保护作用。表达纯化钩端螺旋体外膜蛋白Loa22。分别在0、2、4周用纯化蛋白Loa22、LipL32蛋白和PBS经豚鼠皮下多点进行免疫。以LipL32蛋白免疫组为阳性对照,PBS免疫组为阴性对照。末次免疫后2周,用培养7天的不同血清型钩体从腹腔注射攻击豚鼠。连续观察15天,观察各组豚鼠发病情况,并取各组豚鼠的肺、肝、肾作病理切片。分析钩端螺旋体外膜蛋白Loa22对豚鼠的交叉免疫保护作用。蛋白Loa22免疫组的豚鼠用不同血清型钩端螺旋体攻击,无发病现象。豚鼠健康情况良好。而PBS对照组豚鼠出现了厌食、懒动等现象,病理切片有明显的变化。钩端螺旋体外膜蛋白Loa22免疫血清对豚鼠具有交叉免疫保护作用,可以抵抗不同血清型钩体的攻击。

苯酚降解菌的分离、驯化与固定化研究

对采自贵阳市乌当区某造纸厂的污泥进行富集、驯化、筛选,最终得到2株能以苯酚为惟一碳源生长的菌株(3#和5#),混合菌株可耐受1.3 g/L左右的苯酚,单一菌株可耐受1.0 g/L的苯酚。经生理生化及形态学鉴定,初步确定为醋杆菌属和假单胞菌属,通过不同pH值,苯酚浓度、温度以及外加碳源、氮源、盐度对菌株降酚能力的影响研究,确定了5#菌株的最佳生长和降酚条件。

钩端螺旋体Loa22外膜蛋白对钩体黏附Raw264.7细胞的阻断作用研究

目的研究钩端螺旋体Loa22蛋白血清阻断钩体黏附Raw264．7细胞的情况。方法钩体外膜蛋白Loa22、PBS免疫豚鼠后取血清，PBS为对照，使用镀银染色法检测各免疫血清阻止钩体黏附Raw264．7细胞且测定黏附率。结果稀释度为1：200--1：1600的Loa22蛋白血清均显著抑制钩体黏附，粘附率≤0．01％。而相应稀释度的对照组血清不影响钩体黏附。结论Loa22蛋白可以阻断钩体黏附细胞，对细胞起到保护作用。