瞬时感受器电位离子通道香草素受体4下游信号分子的确定及其对大鼠背根神经节慢性压迫后痛觉过敏的作用

目的:探讨大鼠背根神经节慢性压迫CCD后瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)下游信号分子及其在痛觉过敏中的机制。方法:鞘内分别注射TRPV4拮抗剂钌红(RR)、TRPV4反义寡脱氧核苷酸(ASODN)和一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAME,检测CCD大鼠背根神经节DRG内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(nitrite)含量变化,并观测热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)的变化。结果:鞘内分别注射RR、TRPV4 AS ODN和L-NAME后,均能够显著降低CCD大鼠DRG内亚硝酸盐含量(P<0.05),CCD大鼠的热痛敏行为也能够显著改善(P<0.05)。结论:TRPV4及其下游信号分子NO参与介导CCD大鼠的热痛觉过敏。

TRPV4在介导大鼠背根神经节持续受压后机械和热痛敏中的作用

目的:观察持续机械压迫(CCD)对瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)基因、蛋白表达及功能的影响,明确TRPV4是否参与CCD导致的机械和热痛敏。方法:建立CCD模型后,分别于手术前及手术后第7天、第14天及第28天取材前测量运动功能、机械刺激缩爪反应阈值和热辐射刺激缩爪反应潜伏期。为了测量TRPV4反义核苷酸干扰对机械和热痛阈值的影响,在蛛网膜下腔内注入TRPV4寡脱氧核苷酸(ODN)40μg/d,每天1次,第7天后测量大鼠行为学变化。使用实时定量RT-PCR检测TRPV4基因表达的变化,Western blot检测TRPV4蛋白质表达量的变化,激光共聚焦检测低渗溶液和佛波醇(4α-PDD)刺激背根神经节(DRG)神经元后细胞内钙离子浓度的变化。结果:所有动物在损伤前后步态均正常,持续压迫明显降低大鼠的机械和热痛阈,TRPV4干扰可部分逆转该痛敏。持续机械压迫可以明显增加TRPV4基因和蛋白的表达,手术后第7天,第14天和第28天,TRPV4mRNA的表达分别为假手术组大鼠的4.29倍、2.95倍和2.48倍,蛋白表达量分别为假手术组大鼠的4.34倍,3.88倍和2.47倍。持续机械压迫后,对低渗溶液和4α-PDD产生反应的DRG神经元的比例数增加,细胞内钙的峰值增高。这种反应被TRPV4反义ODN所抑制。结论:CCD可以上调TRPV4的基因、蛋白表达,敏化通道的功能;TRPV4参与介导CCD导致的机械和热痛敏。

缺血压迫减轻肌筋膜激痛点痛觉增敏与自发性肌电活动的机制研究

目的:研究大直径有髓鞘肌肉传入纤维是否参与了肌筋膜激痛点(MTrP)的痛觉增敏和自发性肌电活动。方法:20名青年志愿者均可在肱桡肌上找到潜在的MTrP,参与本项目两部分的实验。用7cm宽的袖带对一侧肱桡肌进行施加压力20min以引起缺血压迫阻滞(ICB)大直径有髓鞘的肌肉传入纤维。第一部分研究受试者肱二头肌受压至缺血前,压迫阻滞20min后及解除压迫10min后,肱桡肌MTrP局部疼痛、牵涉痛及自发性电活动的改变;第二部分在1周后,研究受试者肱二头肌受压至缺血前,压迫阻滞20min后及解除压迫10min后,肱桡肌MTrP与对侧肱桡肌相应部位non-MTrP(非激痛点)的压力疼痛阈值(PPT)与牵涉痛阈值(PTRP)的改变。结果:ICB后MTrP的局部疼痛、牵涉痛及自发性电位活动的波幅及频率均明显降低,解除压迫后恢复至未压迫前水平;MTrP的PPT和PTRP均在ICB后明显升高,解除压迫后又降低;ICB后,MTrP的PPT仍然低于非MTrP区。结论:大直径的有髓鞘的肌肉传入纤维参与了MTrP的机械性痛觉增敏和自发性电活动。

姜黄素对大鼠三叉神经痛的镇痛作用

目的评价姜黄素对大鼠三叉神经痛的镇痛作用。方法健康成年雄性SD大鼠30只，体重200～250 g，7～8周龄，采用随机数字表法，将大鼠分为3组（n＝10）：假手术组（S组）、三叉神经痛组（TN组）和三叉神经痛＋姜黄素组（Cur组）。采用眶下神经鞘处注射蛇毒的方法制备三叉神经痛模型。于造模后15 d开始灌胃，Cur组给予姜黄素45 mg/kg，2次/d，连续28 d，TN组给予等容量花生油。分别于造模前（基础状态）和造模后4、7、14、21、28、35、42 d时测定机械痛阈，并观察自由行为学，记录面部修饰行为的时间及次数和探索行为的时间及次数。自由行为学观察结束后，取患侧眶下神经和延髓，透射电镜下观察超微结构。结果与S组比较，TN组造模后4～42 d时机械痛阈降低，面部修饰行为时间延长，面部修饰行为次数增多，探索行为时间缩短，探索行为次数减少（P〈0.05或0.01）；与TN组比较，Cur组造模后28～42 d时机械痛阈升高，面部修饰行为时间缩短，造模后21～42 d时面部修饰行为次数减少，探索行为时间延长，探索行为次数增多（P〈0.05或0.01）。Cur组眶下神经和延髓脱髓鞘改变明显轻于TN组。结论姜黄素45 mg/kg灌胃（2次/d，连续28 d）可减轻大鼠三叉神经痛，其机制与减轻眶下神经和延髓的脱髓鞘改变有关。

海马CREB／BDNF信号通路与慢性病理性痛大鼠认知功能障碍的关系

目的评价海马环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）／脑源性神经营养因子（BDNF）信号通路与慢性病理性痛大鼠认知功能障碍的关系。方法健康成年雄性SD大鼠32只，体重200～250g，采用随机数字表法，将其分为3组：对照组（C组，n=8）、假手术组（S组，n=8）和慢性病理性痛组（CP组，n=16）。采用于眶下神经注射眼镜蛇毒0．4mg（4μl）的方法建立慢性病理性痛模型。于模型制备前3d和制备后4d、1、2、3、4和8周时测定痛阈。于模型制备后5和9周行Morris水迷宫实验；CP组于模型制备后5和9周水迷宫测试结束后处死8只大鼠，C组和s组于模型制备后9周水迷宫测试结束后处死，取海马组织，采用Westernblot法测定海马磷酸化CREB（p-CREB）和BDNF的表达。结果与c组比较，CP组模型制备后各时点机械痛阈降低，模型制备后5和9周逃避潜伏期延长，模型制备后9周目标象限停留时间比率降低，穿越原平台次数减少，海马p-CREB和BDNF表达下调（P〈0．05），S组上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论慢性病理性痛大鼠认知功能障碍的机制可能与抑制海马CREB／BDNF信号通路激活有关。

大鼠肌紧张带重复低频电刺激后的生物力学及病理学改变

目的研究大鼠肌紧张带（TB）重复低频电刺激疲劳试验后的生物力学及病理学改变。 方法符合实验标准的28只Wistar大鼠，按随机数字表法分为对照组、强度疲劳实验组和频率疲劳实验组，分别进行对照、强度疲劳实验和频率疲劳实验研究。记录和分析TB和非肌紧张带（non-TB）在每一刺激循环中的最大收缩力和最大收缩力低刺激强度和高刺激强度，以及频率疲劳实验中的最大收缩力、强直收缩力和频率。光镜下观察其病理变化。 结果①强度疲劳实验中，TB的最大收缩力在第15次循环（1.42±0.28）g和第20次循环（0.93±0.54）g中明显比其第1次循环（1.99±0.31）g和第5次循环（1.97±0.27）g降低；最大收缩力高刺激强度在第15次循环（3.76±0.71）V和第20次循环（3.44±0.97）V中明显比其第1次循环（4.04±0.64）V降低。在第10、15和20次强度刺激循环中，TB的最大收缩力和最大收缩力高刺激强度明显比non-TB低。②频率疲劳实验中，TB最大收缩力频率（9.60±2.12）Hz和强直频率（25.45±2.65）Hz明显小于non-TB，最大收缩力（1.67±0.16）g和强直收缩力（2.02±0.21）g明显大于non-TB。③病理切片显微镜观察显示强度和频率疲劳实验后，TB肌纤维染色明显不均，肌纤维排列紊乱，出现明显的水肿、细胞退变和断裂。 结论TB耐受不同电刺激强度和频率的能力降低，肌纤维易受损伤，肌肉抗疲劳能力下降；TB或许参与肌筋膜疼痛综合征患者的肌无力和易疲劳性。

姜黄素对三叉神经痛大鼠认知功能障碍的影响

目的评价姜黄素对三叉神经痛大鼠认知功能障碍的影响。方法健康成年雄性sD大鼠30只，体重200～250g，采用随机数字表法分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）、三叉神经痛组（TN组）和三叉神经痛＋姜黄素组（TN＋Cur组）。TN组和TN＋Cur组于眶下神经鞘处注射蛇毒溶液4μl制备三叉神经痛模型；于造模后15d开始，TN组用花生油1．5m1灌胃，TN＋Cur组用45mg／kg姜黄素（溶于1．5ml花生油中）灌胃，早晚各1次，持续28d。于治疗结束后，采用Morris水迷宫实验检测认知功能，记录逃避潜伏期、游泳速度、目标象限停留时间比率和穿越平台次数，电镜下观察海马CA1区病理学结果，透射电镜下观察海马CA1区神经元、细胞器和突触的超微结构。结果3组间游泳速度比较差异无统计学意义（P〉0．05）；与Sham组比较，TN组第1～4天逃避潜伏期延长，目标象限停留时间比率降低，穿越平台次数减少，TN＋Cur组第3和4天逃避潜伏期延长（P〈0．01）；与TN组比较，TN＋Cur组第2～4天逃避潜伏期缩短，目标象限停留时间比率升高，穿越平台次数增加（P〈O．01），海马组织病理学损伤减轻。结论姜黄素可改善三叉神经痛大鼠认知功能障碍。

脂氧素A4对椎间盘突出所致大鼠根性神经痛的影响

目的观察脂氧素A4对椎间盘突出所致大鼠根性神经痛的影响。方法选取雄性SD大鼠48只，建立非压迫性椎间盘突出模型，按照随机数字表法将其分为假手术组（假手术＋10μl生理盐水）、对照组（模型＋10μl生理盐水）、脂氧素A。10ng组（模型＋10ng脂氧素A4）、脂氧素A4 100ng组（模型＋100ng脂氧素A4），每组12只。手术当天及术后连续3d鞘内注射脂氧素A4或生理盐水，观察大鼠的行为学变化，并测定50％缩足阈值（50％PWT）。术后7d取大鼠术侧腰段脊髓背角，用Westernblot法测定c—Jun氨基末端激酶（JNK）、细胞外信号调节激酶（ERK）的蛋白表达量，并用ELISA技术测定肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白细胞介素1β（IL-1β）和转化生长因子-β1（TGF—β1）的含量。结果假手术组50％PWT在手术前后无显著变化（P〉0．05）。与组内术前比较，对照组和脂氧素A4 10ng组术后各时间点的50％PWT降低（P〈0．05）。与假手术组术后同时间点比较，对照组和脂氧素A4 10ng组术后各时间点的50％PWT较低（P〈0．05）。与对照组比较，脂氧素A4 10ng组术后3d[（8．90±2．76）g]、5d[（8．56±2．77）g]的50％PWT较高（P〈0．05）。脂氧素A4 100ng组术后2d、3d、4d、5d、6d、7d的50％PWT显著较高（P〈0．05）。与假手术组比较，对照组、脂氧素A4 10ng组和脂氧素A4 100ng组p-JNK、p-ERK水平明显升高（P〈0．05）。与对照组比较，脂氧素A4 10ng组和脂氧素A。100ng组p-JNK、p-ERK水平明显降低（P〈0．05），且脂氧素A4 100ng组下降更明显（P〈0．05），呈剂量依赖性。各组t-JNK和t-ERK蛋白含量之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。与假手术组比较，对照组、脂氧素A4 10ng组和脂氧素A4 100ng组TNF-α、IL-1β的表达水平明显升高，TGF-β1的表达水平明显降低（P〈0．05）。与对照组比较，脂氧素A4 10ng组和脂氧素A4 100ng组TNF—α、IL-1β的表达水平明显降低（P〈0．05），TGF—β1的表达水平明显升高（P〈0．05），且脂氧素A4 100ng组的变化更明显，呈剂量依赖性。结论脂氧素A4 能够减轻非压迫性椎间盘突出大鼠的根性神经痛，其机制可能与抑制ERK和JNK活性、下调促炎因子表达水平、上调抗炎因子表达水平有关。

大鼠背根神经节持续受压后膜联蛋白A2表达及分布的变化

目的探讨大鼠背根神经节(DRG)持续受压(CCD)后DRG中膜联蛋白A2(ANXA2)的表达及分布规律。方法成年雄性Wistar大鼠102只按随机数字表法分为对照组(24只)、CCD模型后7 d组(30只)、CCD模型后14 d组(24只)及CCD模型后28 d组(24只)。后3组大鼠采用"U"形棒制备CCD模型。采用机械痛刺激仪和热痛刺激仪测量各组大鼠的机械缩足反射阈值(MWT)和热辐射缩爪反应潜伏期(TWL)。采用Western blotting和免疫荧光染色检测各组大鼠DRG中ANXA2蛋白的表达。采用免疫荧光双标染色检测CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2和神经元标志物微管蛋白β3(TUBB3)的表达。结果与对照组比较,CCD模型后7 d组、CCD模型后14 d组大鼠的MWT与TWL均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测显示,与对照组比较,CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2蛋白的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色检测显示CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2的免疫反应性较对照组增强。免疫荧光双标染色检测显示CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2主要表达于神经元的细胞膜中。结论CCD模型大鼠的机械痛阈与热痛阈下降,受压侧DRG内ANXA2蛋白表达上调及免疫反应性增强,ANXA2可能参与CCD后神经病理性疼痛的发生发展。