鸡NLRX1受体基因的原核表达及抗体制备

NLRX1(NLR family member X1)是一种调控天然免疫应答的重要模式识别受体。首先应用PCR方法分别对鸡NLRX1基因的编码区和N端1~492 bp截短序列进行PCR扩增并克隆到原核表达载体p ET-32a(+),以IPTG诱导重组菌表达,获得了重组NLRX1蛋白和N端截短表达蛋白(r NLRX1-part)。其次将纯化的截短重组蛋白r NLRX1-part免疫新西兰兔,以间接酶联免疫吸附实验(ELISA)检测制备的抗体效价为1∶512 000。应用Western blot方法分析显示,该抗体不仅可特异性结合原核表达NLRX1蛋白也可有效识别鸡DF-^1细胞中过表达NLRX1蛋白。

鸡贫血病毒安徽分离株感染性克隆的构建及其感染特性

鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)是诱导雏鸡发生免疫抑制的重要病原之一。应用PCR方法从安徽某鸡场送检病鸡肝组织中检测并鉴定CAV,扩增病毒全基因组序列插入pc DNA3.1(+)载体,并引入含Kpn I(GGTACCCAG)酶切位点的9bp外源性标签,获得顺次连接的双拷贝CAV基因组的重组质粒,通过脂质体介导转染鸡MDCC-MSB1淋巴细胞并拯救出CAV感染性克隆毒株。经动物试验,感染性克隆毒株在接种1日龄健康雏鸡后15d,对胸腺等免疫器官指数影响较小,胸腺病变不明显,表明其感染能力减弱,为进一步分析CAV致病机制和筛选疫苗候选株奠定基础。

鸡NLRX1表达的细胞定位及其siRNA干扰效果的研究

NLRX1 (NLR family member X1)是细胞内模式识别受体NLRs家族中重要成员之一,在炎症反应和抗病毒等天然免疫中主要发挥负调控作用。为了解鸡NLRX1 (chNLRX1)分子的特征及其生物学功能,本研究采用cDNA末端快速克隆(RACE)技术,从鸡肺脏组织中克隆了chNLRX1基因的cDNA序列,其最长开放阅读框(ORF)为2 970 bp,编码989个氨基酸,含有较为保守的结构域,分子构象分析显示chNLRX1在空间结构上更接近于鱼类NLRX1;将chNLRX1真核表达质粒转染HEK293T细胞和鸡DF-1细胞,显示chNLRX1主要定位于细胞质内的线粒体区;以腺病毒介导RNAi干扰chNLRX1表达,采用荧光显微镜观察和western blot方法筛选出干扰效率相对较高的si RNA (sh-NLRX1-2)。上述结果为进一步研究chNLRX1的生物学功能奠定基础。