尿激酶型纤溶酶原激活物受体基因对中性粒细胞活化及凋亡的影响

目的在类中性粒细胞模型中,探讨尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR)基因对中性粒细胞活化及凋亡的影响。方法采用体外培养的人急性髓系粒细胞白血病细胞株HL60作为研究对象,全反式维甲酸(ATRA)诱导HL60细胞分化为类中性粒细胞。构建干扰人PLAUR基因的慢病毒载体,转染入类中性粒细胞(siRNA组),并设置磷酸盐缓冲液(PBS)组(未转染)和空白对照(NC组,转染空白质粒)作为对照(n=3)。饥饿培养、加入白细胞介素-17干预后,流式细胞术检测细胞膜CD11b表达,以及酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清中髓过氧化物(MPO)、中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)水平,了解类中性粒细胞活化情况。Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,并用Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2表达。结果流式细胞术检测siRNA组HL60细胞细胞膜CD11b表达(32.37±8.17)较另两组下降(PBS组46.27±1.54,NC组53.07±8.14)(P<0.05)。siRNA组细胞培养液上清中MPO和NETs水平(33.37±1.11、57.69±3.03)也均较PBS组(41.64±2.20、77.60±4.33)和NC组(40.84±5.11、76.15±2.10)下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测siRNA组凋亡率(20.42%±2.45%)较PBS组(11.91%±2.23%)和NC组(11.13%±2.56%)升高(P<0.05)。siRNA组caspase-3和bax蛋白表达(0.84±0.05、0.83±0.04)较PBS组(0.68±0.02、0.63±0.08)和NC组(0.71±0.01、0.66±0.10)高,差异有统计学意义(P<0.05);抗凋亡蛋白bcl-2表达量减少(siRNA组:0.38±0.02,PBS组:0.73±0.05,NC组:0.69±0.06)(P<0.05)。结论PLAUR可促进类中性粒细胞活化,抑制其凋亡。