温度诱导模式对重组大肠杆菌质粒拷贝数的影响

对于大肠杆菌温度表达系统,温度的选择和变化对外源基因的表达至关重要,最直接的因素表现在对质粒拷贝数的影响上。本文通过重组大肠杆菌DH 5α表达载脂蛋白A I-M ilano来分析不同温度诱导模式对质粒拷贝数的影响,确立了二次升温诱导(30°C→42°C→37°C→42°C)有利于菌体质粒拷贝数的增加,从而提高目的蛋白的表达量,结果表明:二次升温诱导比一次升温诱导蛋白表达量增加80%。

啤酒酵母泥回收利用研究动态

啤酒酵母泥中含有丰富的营养成分 ,可用来生产饲料酵母、酵母抽提物。

利用大肠杆菌高效表达人载脂蛋白AI及其性质分析

载脂蛋白AI(apolipoproteinAI,apoAI)是高密度脂蛋白HDL的主要组成成分 ,流行病学研究表明apoAI的含量决定血浆中HDL的高低 ,而HDL具有胆固醇逆向转运的功能 ,起到降低冠心病发生概率的作用。通过大肠杆菌表达系统来生产apoAI的蛋白原proapoAI,蛋白的表达形式为包涵体 ,通过疏水柱进行柱上复性。同时在proapoAI和apoAI之间设计一个酸水解位点 ,通过将蛋白原proapoAI进行酸水解来得到成熟蛋白apoAI。最终得到的成熟蛋白apoAI在结构分析和脂结合特性上都与天然的apoAI相似 ,从而为该蛋白的工业生产上提供了一个良好的基础。

重组人载脂蛋白AI_(米兰变体)在大肠杆菌中的高效表达

通过大肠杆菌表达系统来生产重组人载脂蛋白AIM(proapolipoprote in AIM,proapoAIM)。整个proapo AIM基因被分成两个片断,通过RT-PCR的方法合成。在对该基因的上游部分进行改造后,插入到表达载体pBV220中进行表达。蛋白的表达量达到45%左右,蛋白的表达形式为包涵体。包涵体通过疏水柱进行柱上复性,复性后的蛋白具有良好的生物活性。

食用营养酵母菌种的选育

通过对面包酵母、假丝酵母、啤酒酵母和奶酒酵母等四种酵母的核黄素、自溶浸出物比率进行研究,选定了核黄素及自溶浸出物比率较高的奶酒酵母(MY-1)作为出发菌株。经连续3次EMS诱变,依次选育富含核黄素的腺嘌吟营养缺陷型菌株(M1-3)和腺嘌吟缺陷型的回复突变株(M2-8)。对所得的菌株进一步进行抗铵突变株的选育,最终得到富含核黄素的营养酵母突变株(M3-20),其核黄素含量与出发菌株相比提高了约215％。

两次诱导实现重组大肠杆菌高密度、高表达研究

通过不同温度诱导模式对大肠杆菌高密度,高表达的研究,确定两次升温诱导模式实现大肠杆菌高密度、高表达重组人载脂蛋白的目的。实验证实两次诱导成功的避免了乙酸对高密度、高表达的影响,最终发酵的细胞密度OD600达150,蛋白表达量4.8g·L-1,证明两次升温诱导的发酵方法在高密度、高表达外源蛋白上是成功的,从而为基因工程菌规模化生产奠定了基础。

重组人载脂蛋白ApoA-I表达条件的优化

对大肠杆菌DH5α发酵培养表达人载脂蛋白ApoA I的发酵条件进行了优化研究。结果表明 :将重组质粒pBV2 2 0 ApoA I转化不同的大肠杆菌宿主菌 ,筛选得高表达水平的E coliDH5α pBV2 2 0 ApoA I表达系统 ,摇瓶发酵表达率为 2 2 2 % ,BL2 1 (DE3)的表达水平与其相当 ,而TG1的表达率只有 1 1 %。在FMG 5L发酵罐进行发酵条件优化 ,认为细胞生长培养的最适pH为 7 0 ,重组ApoA I表达时的最适pH为 7 4。分批发酵的初始糖浓度为 3 0g·L 1,且碳氮源的最佳比例为 2∶1 ,使重组ApoA I表达率达总蛋白的 40 % ,浓度达 2 86g·L 1。

酵母菌耐性与海藻糖积累的初步研究

对 11株酵母菌进行了渗透压、乙酸、冷冻、乙醇耐性实验及海藻糖积累的比较。实验表明 ,渗透压耐性和乙酸耐性较好的菌株 ,其积累海藻糖的能力较强 ;而抗冷冻和乙醇耐性与海藻糖的积累能力无明显的相关性。

重组人载脂蛋白A-I_((米兰变体))的复性及纯化

目的 从大肠杆菌中获得载脂蛋白A I(米兰变体 ) 的包涵体 ,对包涵体进行复性、纯化 ,最终获得具有生物活性的载脂蛋白A I(米兰变体 ) 。方法 包涵体以尿素溶解后 ,以疏水层析法复性重组蛋白 ;以离子交换层析对其进一步纯化 ,并对所得的蛋白进行生物活性分析。结果 经复性纯化的蛋白纯度达 95 % ,体外生物活性检测显示其具有生物活性。结论 本法能快速有效地对目的蛋白进行复性、纯化 。

基于质量风险管理的生物制药工艺验证策略

目的 :根据美国、欧盟等药品监管部门以及ICH提出的基于生命周期的工艺验证方法,将风险管理运用到整个工艺验证的生命周期。方法 :本文采用风险管理的方法对工艺设计阶段、工艺确认阶段以及持续工艺验证阶段进行了探讨。结果 :证明基于风险的工艺开发和验证合并将产生更可靠、更持续可行的工艺,从而确保持续稳定地生产出符合预定用途和注册要求的药品。结论 :通过符合更好的工艺实践,生物制药将进一步推动制药行业的发展。

注射用水中可见异物的分析及处理措施

为确认白色可见异物的来源,并制定相应的处理措施。对样品中收集到的可见异物进行红外检测,结果发现白色可见异物来源于老化的硅胶垫。因此,应避免频繁使用酸碱处理硅胶垫,定期对注射用水系统连接处使用的硅胶垫进行检查更换,或者使用性能更好的氟橡胶垫片。

基于风险评估的技术转移及其管理

制药企业的药品生产和质量管理中已经广泛运用了风险管理,GMP对于风险管理也有较为明确的要求。但是在产品技术转移项目中尚未普及风险管理的理念。本文将对技术转移项目中各个阶段如何制定风险管理计划、确定风险管理策略、运用风险管理工具给出建议。将风险分析全面纳入到技术转移项目中去可以有效确保转移后的产品安全可靠。

制药行业基于风险管理的变更控制

随着中国GMP2010版的实施,风险管理已广泛运用于制药行业,而变更控制作为制药质量体系要素之一,如何将质量风险管理有效运用到变更控制中,是众多企业面临的主要问题。本文根据质量风险管理的理念和工具,将变更控制的评估分为初步的风险评估和详细的风险评估,同时介绍了基于风险管理的变更控制方法以及如何将质量风险管理集成到现有的变更控制系统,使变更控制评估更加充分、有效,从而确保变更带来的风险得到有效的控制,保证产品质量和患者安全。