用pB1uescript SK(+)质粒自制T-A载体对DD RT-PCR产物进行克隆

ｍＲＮＡ差异显示技术可以显示ｍＲｗａ表达水平的差异。为了对用ｍｎｗＡ差异显示技术得到的差异条带进行研究，该文用改良碱裂解法抽提ｐＢＳ质粒，用ＥＣＯＲＶ将ｐＢＳ切成平头，利用ＴａｑＤＮａ聚合酶的非模板依赖性，在ｄｒｙＰ存在的条件下，用切成平头的ＰＢＳ质粒自制了Ｔ—Ａ克隆载体，对用ｍＲＮＡ差异显示方法得到的差异条带进行了重组，结果表明：用自制Ｔ一Ａ克隆载体对ＰＣＲ产物进行克隆的连接率较高，自制Ｔ一Ａ载体进行ＰＣＲ产物克隆是一简便可行的方法。

自发性高血压大鼠胸腺中胰岛素-I基因的表达降低

目的为了研究自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）胸腺功能异常的分子机制，我们用ｃＤＮＡ代表性差异分析ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎ－ｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ（ＲＤＡ）技术比较了ＳＨＲ与其正常血压对照（ＷＫＹ）大鼠二者胸腺基因表达的差异。方法用ｃＤＮＡ代表性差异分析技术比较了ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠胸腺基因表达的差异。差异表达的ｃＤＮＡ接入Ｔ—载体进一步进行差异筛选。挑选阳性克隆进行测序并用ＢＬＡＳＴ软件进行同源性分析。最后用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析验证差异筛选的结果。结果挑选了４个差异筛选的阳性克隆进行测序，序列同源性分析表明它们均与胰岛素－Ｉ基因序列高度一致。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果证实了胰岛素－Ｉ基因在ＳＨＲ胸腺中表达降低。结论运用ｃＤＮＡ代表性差异分析技术，结合差异筛选方法，本文观察到ＳＨＲ胸腺中胰岛素－Ｉ基因表达降低，提示局部微环境中的胰岛素缺乏在ＳＨＲ胸腺细胞的发育异常中可能起一定的作用。