降钙素基因相关肽对缺氧时大鼠海马培养神经元c—fos表达的影响

采用免疫组化（ABC）方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及降钙素基因相关肽（CGRP）的影响。结果显示，缺氧后海马神经元中Fos-免疫反应（Fos—IR）阳性胞核百分率随缺氧时间的延长而逐渐增多，图像分析的结果显示，缺氧后Fos—IR阳性胞核的平均失密度亦随缺氧时间的延长而逐渐增强。经CGRP孵育的海马神经元缺氧后Fos-IR阳性胞核的百分率和Fos-IR阳性胞核的平均光密度均明显低于非CGRP孵育组。本结果表明，缺氧能诱导体外培养海马神经元。c-fos的表达，神经肽CGRP能抑制缺氧海马神经元c-fos的表达。提示CGRP对海马神经元缺氧损伤可能具有一定保护作用。

腺苷对体外培养的海马缺糖缺氧神经元的保护作用

目的 :观察缺糖缺氧对大鼠海马培养神经元的影响及腺苷的保护作用。方法 :取培养 12d的海马神经元 ,分为对照组和腺苷组 ,同时于缺糖缺氧环境中培养 0 .5 - 4h后取出 ,立即更换原神经元培养液在常氧下继续培养 2 4h。于不同时间取出 ,收集培养液 ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量 ,用图像分析仪测定神经元胞体面积 ,并用 4 %台盼蓝染色 ,计算神经元存活百分率。同时用原位末端标记 (TUNEL)法检测神经元凋亡。结果 :缺糖缺氧后海马神经元胞体肿胀 ,体积变大 ,LDH渗出含量增多 ,神经元存活率减少。恢复糖和氧供应后 2 4h ,海马神经元LDH渗出含量进一步增多 ,细胞存活率进一步减少 ,凋亡神经元百分率明显增多。经腺苷预处理的海马神经元缺糖缺氧后 ,神经元LDH渗出明显少于对照组 ,神经元胞体面积增大程度轻于对照组 ,神经元存活率明显高于对照组。缺糖缺氧 0 .5 - 3h再恢复氧和糖供应后 2 4h ,腺苷组凋亡神经元百分率亦明显低于对照组。结论 :缺糖缺氧可引起海马神经元严重损伤 ,神经元损伤程度与神经元存活率、LDH渗出含量的改变呈对应变化。腺苷能减少缺糖缺氧后神经元的损伤 ,减少缺糖缺氧后神经元凋亡 ,提示腺苷对缺糖缺氧海马神经元具有一定的保护作用。

重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素 6 (recombinanthumaninterleukin 6 ,rhIL 6 )对缺氧 复氧后Bcl 2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养 12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL 6组 ,同时于缺氧环境 (90 %N2 +10 %CO2 )中培养 2、4h后 ,再于常氧培养箱内复氧培养 2 4和 72h。于不同时间取出 ,分别用抗Bcl 2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察缺氧 复氧后大鼠海马培养神经元Bcl 2和Bax的表达 ,并用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧 复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见 ,与缺氧前相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,海马神经元Bcl 2表达明显减弱 ,Bax表达明显增强 ,凋亡神经元明显增多。经rhIL 6预处理的海马神经元与对照组相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,Bcl 2表达明显增强 ,Bax表达明显减弱 ,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示 ,rhIL 6对海马神经元缺氧

低氧预适应可减少缺氧—复氧后大鼠海马培养神经元凋亡

用原位末端标记 ( TUNEL )法观察低氧预适应对大鼠海马培养神经元缺氧 -复氧后神经元凋亡的影响。结果显示 ,经低氧预适应的海马神经元缺氧 -复氧后凋亡神经元百分率明显低于对照组。本结果表明 ,低氧预适应可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和热休克蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法 ,观察低氧预处理对大鼠海马培养神经元缺氧耐受性和热休克蛋白(Hsp70 )表达的影响。结果显示 ,低氧预处理能诱导海马神经元对Hsp70的表达。经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Hsp70表达较对照组明显增强 ,神经元损伤程度减轻 ,神经元存活数明显高于对照组。本结果表明 ,低氧预处理可诱导海马培养神经元对Hsp70的表达 ,并使海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧

人重组白细胞介素-6对缺氧后海马培养神经细胞Fos表达的影响

用免疫组化方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经细胞Fos表达及人重组白细胞介素-6（rhIL－6）的影响。结果显示，经rhIL－6孵育的海马神经细胞缺氧后Fos免疫反应阳性胞核的百分率和Fos免疫反应阳性胞核的平均光密度均明显低于对照组，表明缺氧能诱导体外培养海马神经细胞Fos的表达，rhIL－6能抑制缺氧神经细胞Fos的表达。提示rhIL-6可能参与脑缺氧损伤的调控。

缺氧对大鼠海马脑片诱发电位的影响

在脑缺氧损伤的研究中,离体海马切片既可排除血脑屏障,又保持原有神经环路,所得实验结果接近在体实验,是研究脑缺氧的理想模型。近几年来国外已有人报道了缺氧时海马脑片诱发电位的变化;但同时用两个脑片比较不同程度的低氧对脑片诱发电位的影响,却少有报道。本实验采用自行设计的双孔脑片电生理实验系统,用不同浓度的低氧混合气造成不同程度的缺氧环境,以探明不同缺氧程度影响脑片电反应的时间曲线,寻求海马脑片缺氧损伤的特征性反应与不可逆损伤发生的临界值。

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

目的 :观察低氧预处理对缺氧 复氧后大鼠海马神经元Jun表达的影响。方法 :取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 .90L LN2 +0 .10L LCO2 )中培养 4h后取出 ,置含 0 .10L LCO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4h和 72h ,于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,并用抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察Jun表达阳性和阴性神经元数目 ,计算Jun表达神经元所占百分率。结果 :经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Jun表达阳性神经元百分率较对照组明显减少 ,神经元存活数明显高于对照组。结论 :低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元Jun的表达。

rhIL-1β、rhIL-2和rhIL-6对体外培养海马神经胶质细胞c-fos表达的影响

采用免疫组织化学方法观察了重组人白细胞介素-1β、重组人白细胞介素-2和重组人白细胞介素-6对体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos表达的影响。结果证明，培养12d的海马神经胶质细胞与重组人白细胞介素-1β（100U／ml）、重组人白细胞介素-2（200U／ml）和重组人白细胞介素-（200U／ml）一起孵育2h后出现FOS-免疫反应阳性的细胞核，随着所给剂量的逐渐加大，FOS反应阳性胞核数量也逐渐增多．图象分析的结果显示，FOS反应阳性胞核的平均光密度亦随剂量的逐渐加大而逐渐增加．本研究的结果提示：重组人白细胞介素-1β、-2及-6均能诱导体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos的表达。说明三者对体外培养的海马神经胶质细胞具有生物学作用。推测c－fos表达可能是这些细胞因子发挥生物效应的重要中间途径。

新生大鼠海马神经元在无血清培养液中的生长特性

用无血清培养新生大鼠海马细胞,观察神经元的生长分化,并与血清培养进行比较。结果表明:海马神经元在5％血清培养液中培养日龄较长,可达2个月,但非神经细胞增殖速度快,易影响神经元的生长分化。与血清组相比,无血清培养使非神经细胞生长缓慢,神经细胞突起分化早、伸展快,神经元可持续培养1个月。无血清培养易控制因素,有利于神经细胞生长,并具有促进分化的效应,是神经细胞分化发育研究以及单因子分析的理想实验模型。

缺氧-复氧对大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

目的 观察缺氧-复氧对体外培养海马神经元Bcl-2和Bax表达和神经元凋亡的影响。方法 取培养12d的海马神经元,置于恒温(36℃)密闭容器内,连续充以无氧气体[90％(体积分数)N2、10％(体积分数)CO2],在缺氧条件下继续培养4 h后,再于常氧培养箱内复氧培养24 h和72 h。于不同时间观察神经元存活数,并分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色,观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax表达。并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果缺氧-复氧后24～72 h,海马神经元对Bcl-2的表达逐渐减弱,对Bax的表达逐渐增强,Bax/Bcl-2比值逐渐增大,凋亡神经元百分率逐渐增多。结论 缺氧-复氧后24～72 h神经元凋亡的发生与神经元Bcl-2表达逐渐减弱,Bax表达逐渐增强,Bax/Bcl-2比值逐渐增大有关。

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-1β表达的影响

目的 :观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和白细胞介素 1β(IL 1β)表达的影响。 方法 :取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )培养神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 .9L/LN2 ,0 .1L/LCO2 )中培养 2、4、8和 12h。分别观察它们的形态变化和神经元存活数 ,并用抗rhIL 1β单克隆抗体进行免疫组织化学染色 ,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL 1β表达的影响。 结果 :经低氧预处理的海马神经元缺氧后IL 1β表达较对照组减弱 ,神经元损伤程度减轻 ,神经元存活数明显高于对照组。结论 :低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,其中IL

缺糖缺氧对体外培养海马神经元的影响

目的 :观察缺糖缺氧诱导的培养海马神经元损伤。方法 :取培养 12d的海马神经元 ,在缺糖缺氧条件下分别培养 0 .5～ 4h后取出 ,换原神经元培养液在常氧条件下继续培养 2 4h。用 0 .4%台盼蓝染色 ,检测神经元坏死 ,并用TUNEL法检测神经元凋亡 ,计算存活、坏死和凋亡神经元所占百分率。同时用图像分析仪测定存活、坏死和凋亡神经元的胞体面积、周长和等园直径。结果 :培养的海马神经元急性缺糖缺氧后 0 .5～ 4h ,随缺糖缺氧时间的延长 ,坏死神经元逐渐增多 ,缺糖缺氧后 0 .5～ 2h再恢复糖和氧供应后 2 4h ,凋亡神经元明显增多。图像分析的结果表明 ,坏死神经元的胞体面积、周长和等园直径均明显大于凋亡神经元。结论 :缺糖缺氧可引起海马神经元严重损伤 ,在急性缺糖缺氧后 0 .5～ 4h引起的神经元死亡以坏死为多见 ,但在缺糖缺氧后 0 .5～ 2h再恢复糖和氧供应后2 4。

体外培养大鼠海马细胞白细胞介素－1的表达及缺氧的影响

采用免疫组化方法，观察了体外培养大鼠海马细胞对人重组白细胞介素１β（ｒｈＩＬ－１β）抗血清的免疫反应以及缺氧的影响。结果可见，体外培养的大鼠海马神经元和神经胶质细胞对抗ｒｈＩＬ－１β抗血清均呈弱阳性免疫染色反应，缺氧后免疫染色反应明显增强。经图像分析表明，缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度均较缺氧前增加，尤以缺氧２ｈ时增加最明显，继续缺氧４─１２ｈ，神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱。以上结果表明，大鼠海马脑区存在抗ｒｈＩＬ－１β抗血清的免疫反应细胞；缺氧使对抗ｒｈＩＬ－１β抗血清的免疫染色反应增强，提示ＩＬ－１β与脑缺氧损伤的调控有关。

低氧对少突胶质前体细胞增殖的影响

目的：观察低氧／复氧和间歇性低氧时少突胶质前体细胞（O2A）增殖的影响。方法：取混合培养4d的胶质细胞。按实验分为低氧／复氧、间歇性低氧和常氧3组，低氧／复氧组细胞置低氧环境（3％O2）中分别培养1h、2h、3h、4h、8h、12h、24h、48h和72h后取出，恢复常氧培养至9d。间歇性低氧组每天上午定时将细胞置于低氧环境中分别培养1h、2h、3h、4h后取出。恢复常氧培养。每天一次，分别重复1～4次后。常氧培养至9d。然后同时取出各组细胞，进行O2A细胞的分离纯化和细胞计数。结果：低氧／复氧1h、2h、3h组和间歇性低氧1h、2h、3h组，O2A细胞数均较常氧组明显增多。结论：低氧／复氧和间歇性低氧都可促进体外培养的O2A细胞明显增殖。其机制尚有待于进一步研究。

低氧预处理对缺氧-复氧后体外培养大鼠海马神经元Fos、Jun表达和神经元凋亡的影响

目的 观察低氧预处理对体外培养大鼠海马神经元缺氧 复氧后Fos、Jun表达和神经元凋亡的变化。方法 取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )神经元 ,同时置于缺氧环境 (0 90l LN2 、0 10l LCO2 )中培养 4h后取出 ,置含 0 10l LCO2 和空气的培养箱内复氧培养 2 4和 72h。于不同时间取出 ,观察神经元存活数 ,并分别用抗Fos和Jun抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察Fos、Jun表达阳性和阴性神经元数目 ,计数Fos和Jun表达神经元所占百分率。并用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧 复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。 结果 缺氧 复氧后大鼠海马培养神经元中Fos、Jun表达阳性神经元百分率和凋亡神经元百分率均较缺氧前显著增加。经低氧预处理的海马神经元缺氧 复氧后Fos、Jun表达神经元和凋亡神经元百分率均较对照组明显减少。神经元损伤程度减轻 ,神经元存活数明显高于对照组。 结论 低氧预处理可使培养中海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 复氧后神经元Fos和Jun表达 ,减少缺氧 复氧后神经元凋亡。

缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响

采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响。结果显示,缺氧2h时Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度较缺氧前明显增强,但缺氧4h和重新恢复供氧后24—72h时,Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度又逐渐减弱。缺氧后Bcl-2免疫反应阳性神经元数和阳性率亦随神经元存活数的下降而逐渐减少。本结果提示,缺氧早期Bcl-2免疫染色阳性神经元的免疫反应增强可能是脑细胞在缺氧条件下的自我保护机制,Bcl-2可能对海马神经元缺氧损伤具有一定调控作用。

人重组白细胞介素-6对缺氧时大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响

目的和方法 :采用免疫组化方法 ,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl 2表达及人重组白细胞介素 6(rhIL 6)的影响。结果 :经rhIL 6孵育的海马神经元缺氧后神经元活存数、Bcl 2表达阳性神经元数和Bcl 2表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论 :rhIL 6能增强缺氧神经元Bcl 2的表达 ,抑制缺氧后神经元的死亡 ,提示rhIL 6参与脑缺氧损伤的调控。

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响

目的 观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL 6免疫反应的影响。方法 取培养 12d的两组 (对照组和低氧预处理组 )培养神经元 ,同时置于缺氧环境 ( 0 .9L LN2 、0 .1L LCO2 )中培养 2、4、8和 12h。分别观察它们的形态变化和神经元存活数 ,并用抗rhIL 6单克隆抗体进行免疫组化染色 ,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL 6免疫反应的影响。结果 低氧预处理可增强海马神经元对rhIL 6的免疫反应 ,经低氧预处理的海马神经元缺氧后神经元存活数和对rhIL 6的免疫反应均明显高于对照组。结论 低氧预处理可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受 ,其中rhIL 6的免疫反应增加可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化 ,提示IL 6可能参与脑缺氧耐受性的形成 ,并在海马神经元缺氧损伤的调控中起重要作用。

缺氧对新生大鼠海马培养细胞的影响

脑缺氧的研究,通常使用整体动物模型,为了排除麻醉、温度、酸中毒等因素的影响,有人用脑片方法,但不易鉴别神经细胞和非神经细胞发生变化的差别。体外培养的细胞易于进行形态观察分析,近年来已开始应用于缺氧的研究。本实验选用对缺氧较为敏感的海马脑区进行体外分散培养,探讨了缺氧对海马神经元的损害。