胶质源性神经营养因子体外诱导小鼠胚胎中脑神经干细胞分化的研究

目的:探索胶质源性神经营养因子(GDNF)在体外诱导小鼠胚胎中脑神经干细胞(M-NSCs)分化成多巴胺能神经元的培养方法,为M-NSCs移植治疗帕金森病(PD)提供实验依据。方法:在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以GDNF作诱导分化。TH免疫细胞化学鉴定,流式细胞术检测TH-ir阳性神经元的百分率。结果:M-NSCs向多巴胺能神经元分化的阳性率经流式细胞术检测结果,两组TH-ir阳性细胞比率A组(实验组,6只)为13.53%±1.53%;B组(对照组,6只)3.46%±0.77%,两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:GDNF可促进M-NSCs分化成多巴胺能神经元。

白细胞介素1β体外诱导鼠胚胎中脑神经干细胞的分化

目的:在神经干细胞移植治疗帕金森病过程中,有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的大量定向诱导分化尤为关键。以白细胞介素1β为诱导剂,观察鼠胚胎中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化。方法:实验于2005-04/12在武汉大学医学院实验中心结构生物学实验室完成。①动物:清洁级孕12d昆明鼠胚胎,由武汉大学医学院实验动物中心提供,动物质量合格证号为昆字2005,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:分离胎鼠脑膜,取中脑组织,胰蛋白酶消化,离心过滤后机械法传代。取传代培养5～7d的神经球,按(20～30)个/cm2接种,白细胞介素1β组加入含200ng/L白细胞介素1β、体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基进行诱导分化,空白对照组单纯加入体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基予以自然分化。③实验评估:诱导10～12d,待80%细胞从神经球迁移出来并分化为单细胞时行免疫细胞化学鉴定,流式细胞术检测酪氨酸羟化酶阳性细胞率。结果:①免疫细胞化学鉴定:神经球细胞表达巢蛋白抗原,能分化为神经元特异性烯醇化酶、胶原纤维酸性蛋白阳性细胞。白细胞介素1β组可见酪氨酸羟化酶阳性细胞,胞体较大,圆形和椭圆形居多,酪氨酸羟化酶位于胞质及突起中,胞核无表达,突起呈酪氨酸羟化酶阳性神经元典型的串珠样形态。空白对照组酪氨酸羟化酶阳性神经元在数量、细胞成熟形态上均未达到白细胞介素1β组水平。②中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化的阳性率:白细胞介素1β组酪氨酸羟化酶阳性细胞率明显高于空白对照组(P<0.01)。结论:白细胞介素1β可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元。

胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β体外诱导中脑神经干细胞的分化

背景：在神经干细胞移植治疗帕金森病中,移植细胞的数量及多巴胺能神经元的分化比率是必须解决的问题,而有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的大量定向诱导分化是解决问题的关键所在。目的：探讨胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β体外诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化。方法：分离妊娠12d小鼠胚胎腹侧中脑,经胰酶消化和机械吹打制成单细胞悬液,离心过滤后机械方法传代培养5~7d的神经球,分组进行诱导分化10~12d,待80%细胞从神经球迁移出来,分化为单细胞时,进行免疫细胞化学鉴定及流式细胞术检测酪氨酸羟化酶阳性细胞率。结果与结论：神经球细胞表达巢蛋白抗原,能分化为神经元特异性烯醇化酶和胶原纤维酸性蛋白阳性细胞。胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β在体外能明显提高中脑神经干细胞分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元的比例,胶质源性神经营养因子诱导组、白细胞介素1β诱导组和两者联合应用均较空白对照组比例高,尤其是两者联合应用作用更显著,说明胶质源性神经营养因子、白细胞介素1β可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元。

大鼠尺神经一级传入纤维在脊髓胶状质定位投射的定量分析－FRAP法

本实验按照跨神经节溃变的原理，用抗氟化物酸性磷酸酶（ＦＲＡＰ）法和显微测量，对大鼠尺神经一级传入纤维在脊髓胶状质（ＳＧ）的定位投射进行了定量分析。大鼠尺神经向ＳＧ的纵向投射主要为Ｃ６～Ｔ１，少数实验动物投向Ｔ２上、中段。Ｃ６～Ｔ２各节段ＳＧ水平向“眉毛状反应带”长所测均值（ｍｍ）分别为０．９９６、０．９９６、０．９１８、０．７８３、０．６４２，而尺神经向Ｃ６～Ｔ２各节段ＳＧ水平向投射所测均值（ｍｍ）分别在０．３５４～０．５３６、０．３３３～０．５４２、０．２１４～０．５１５、０．１４４～０．３１９、０～０．２２３的范围，显示了反应带从ＳＧ的中间区逐渐移至内侧区。

太鼠坐骨神经、胫神经、腓总神经在脊髓胶状质定位投射的定量分析—FRAP 法

本实验按照跨神经节溃变的原理,用抗氟化物酸性磷酸酶(FRAP)法和显微测量,对大鼠坐骨神经,胫神经和腓总神经感觉纤维在脊髓胶状质的定位投射进行了定量分析。大鼠坐骨神经和胫神经向胶状质的纵向投射为 L_(2～3);腓总神经为 L_(2.6)及 S_1的上中部。水平向投射,坐骨神经:L_(2～3)主要为胶状质的最内侧和中间区的部分区域,L_4～S_1,主要为内侧,中间和部分外侧区的全部胶状质,但未见向胶状质最外侧区投射;胫神经:L_2～S_1主要为内侧区,中间及部分外侧区仅部分实验动物有投射;腓总神经:仅向 L_2～S_1的中间和部分外侧区一处投射。

辣椒素对大鼠面部皮肤CGRP免疫反应性神经影响的实验研究

目的:研究辣椒素(CAP)对大鼠面部皮肤降钙素基因相关肽(CGRP)免疫反应性神经纤维(IRF)的影响,探讨CAP治疗三叉神经的镇痛机制。方法:把CAP配成30mM浓度溶液备用,按用量分成四组(A组20μl、B组30μl、C组50μl和D组100μl),分别皮下注射大鼠三叉神经眶下支,24h取材,切片,免疫组化染色,镜检,计算机图像分析。结果:经方差分析,除CGRP平均光度的对照组和A组,无显著性差异外(P>0.05),其它各组之间,有非常显著性差异(P<0.01)。并且随着用药量的增加其差值也更大。结论:CAP对大鼠面部皮肤CGRP免疫反应性神经有明显的影响,CGRP参与口面部的痛与镇痛。

大鼠正中神经一级传入纤维在脊髓胶状质定位投射的定量分析——FRAP法

本文用抗氟化物酸性磷酸酶(FRAP)法和显微测量,对大鼠正中神经一级传入纤维在脊髓胶状质(SG)的定位投射进行了定量分析.大鼠正中神经向SG的纵向投射主要为C_5～T_1.C_5～T_1各节段SG水平向眉毛状反应带所测均值(mm)分别为0.888、0.935、0.957、0.905和 0.776,而正中神经向C_5～T_1各节段SG水平向投射所测均值(mm)分别在0～0.204、0～0.303、0～0.409、0～0.432和0～0.336的范围,这显示了正中神经投射区均位于SG的内侧带和部分中间带.

低氧环境下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑神经干细胞的分化

背景：有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的定向诱导分化是神经干细胞移植治疗帕金森病的关键所在.目的：观察低氧条件下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑源性神经干细胞向多巴胺能神经元的分化.方法：体外分离培养孕12 d胚鼠腹侧中脑组织,制成单细胞悬液,在含碱性成纤维细胞生长因子和B27的无血清培养基中培养并传代,分别置于常氧（体积分数21%O2）或低氧（体积分数3%O2）环境下增殖5~7 d后,接种于含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,或含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12＋1 μg/L胶质源性神经营养因子.结果与结论：低氧环境下分化10~12 d,中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化均高于常氧组,在胶质源性神经营养因子诱导下向多巴胺能神经元分化比例更高,表型更成熟.说明低氧环境下胶质源性神经营养因子可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元.

大鼠腋神经一级传入纤维在脊髓胶状质定位投射的定量分析——FRAP法

用抗氟化物酸性磷酸酶（ＦＲＡＰ）法和显微测量，对大鼠腋神经一级传入纤维在脊髓胶状质（ＳＧ）的定位投射进行了定量分析。大鼠腋神经向ＳＧ的纵向投射主要在Ｃ５～Ｃ７，Ｃ５～Ｃ７各节段ＳＧ水平向“眉毛状反应带”宽所测均值（ｍｍ）分别为０．８７２、０．９２０、０．９６０，而腋神经向Ｃ５～Ｃ７各节段水平向投射所测均值（ｍｍ）分别在０．３９０～０．５０８、０．４３２～０．６０５、０．４９７～０．

辣椒素对大鼠三叉神经降钙素基因相关肽免疫反应性神经元的影响

目的:研究辣椒素对大鼠三叉神经节降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)免疫反应性神经元的影响,探讨辣椒素治疗三叉神经的镇痛机制。方法:把辣椒素配成浓度为30mmoL/L溶液备用,20只Wister大鼠按辣椒素用量分成4组(A组20μL,B组30μL,C组50μL和D组100μL),大鼠左侧面区为对照侧,右侧面为实验侧,分别皮下注射处理大鼠三叉神经眶下支,24h取材,切片,免疫组化染色,镜检,计算机图像分析。结果:经方差分析,对照侧,A,B,C,D组实验侧CGRP平均吸光度均值分别为2.526,2.499,2.199,1.812,1.549,组间比较差异有显著性意义(F=170.645,P<0.01)。并且随着用药量的增加其差值也更大。结论:辣椒素对大鼠三叉神经节CGRP免疫反应性神经元有明显的影响,CGRP参与口面部的痛与镇痛。

中脑神经干细胞转基因治疗帕金森病:可能与可行?

背景:中脑源性神经干细胞因具有向多巴胺能神经元分化的潜能,在低氧并转基因条件下体外培养易获得足够量的形态及功能成熟的多巴胺能神经元,已成为近几年来兴起并得到快速发展的干细胞移植治疗帕金森病的理想种子细胞。目的:就中脑神经干细胞转基因治疗帕金森病的研究进展进行综述。方法:应用计算机检索PubMed数据库(1992-01/2006-12),检索词为"Neural Stem Cell(NSC),Mesencephalic neural Stem Cell(M-NSC),neural Stem cell transplant,Parkinson's Disease(PD)"。同时应用计算机检索中国期刊网全文数据库(2003-01/2008-12),检索词为"神经干细胞、中脑神经干细胞、干细胞移植、帕金森病"。结果与结论:选择有关神经干细胞、中脑神经干细胞的基础研究及中脑神经干细胞移植治疗帕金森病的相关文献,计算机初检得到83篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关的14篇,内容重复性的研究16篇,Meta分析53篇,共保留47篇文献进行综述。帕金森病的主要病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元变性坏死,用转基因的中脑源性神经干细胞治疗帕金森病是目前公认的最有前景的治疗方案。在低氧条件下并转基因培养的中脑源性神经干细胞,能高效地诱导分化为多巴胺能神经元,为体外获得足够量的多巴胺能神经元用于移植治疗帕金森病提供了实验依据。中脑神经干细胞的基础研究已取得了一定的成果,但中脑神经干细胞移植治疗帕金森病的临床实验还停留在实验室阶段,中脑神经干细胞生物学特性、分离培养、扩增和定向分化诱导等还有待进一步分析。同时中脑神经干细胞应用于人体治疗的生物安全性问题也逐渐引起人们的重视,如在体外多次传代的神经干细胞是否会发生转化,是否会带来一定的副作用,甚至致瘤性等均在进一步探索中。

白细胞介素-1β体外诱导小鼠中脑神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)体外诱导中脑神经干细胞(M-NSCs)向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化情况,为帕金森病的转基因移植治疗在体外获得足够的多巴胺能神经元提供实验依据。方法:在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以IL-1β作诱导分化。酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学鉴定,流式细胞术检测TH阳性神经元的百分率。结果:实验组促进M-NSCs分化为TH阳性神经元的比例为9.54%,而对照组仅3.46%,差异有统计学意义。结论:IL-1β可明显促进中脑神经干细胞分化成多巴胺能神经元。

辣椒素急性脱敏治疗三叉神经痛的实验研究

目的依据辣椒素 (CAP)镇痛机理 ,研究CAP急性脱敏效应治疗三叉神经痛。方法把CAP配成 30mM浓度溶液备用 ,按用药量分成四组 (A组 2 0 μl、B组 30 μl、C组 50 μl和D组 1 0 0 μl) ,分别皮下注射处理大鼠三叉神经的眶下支作脱敏实验。采用“热痛测试仪”测量不同用药量在不同时间的痛阈变化 ,并观察大鼠行为变化。结果A组达到急性脱敏时间为 72 -1 2 0小时、B组 1 2 -2 4小时、C组 8-1 2小时、D组 2 -4小时。脱敏后各组维持用药间隔时间分别为 2 4、4 8、72、96小时。达到用药总量 ( 50mg/Kg)后 ,各组痛阈恢复速率无显著性差异。 结论辣椒素皮下注射处理大鼠三叉神经的眶下支 。

辣椒素对大鼠面部皮肤降钙素基因相关肽和一氧化氮合酶阳性神经纤维的影响(英文)

背景:辣椒素外敷治疗浅表性疼痛已为人们接受,但能否直接作用于皮下或深层组织中的神经末梢或神经治疗三叉神经痛?目的:观察皮下注射辣椒素对大鼠面部皮肤降钙素基因相关肽、一氧化氮合酶阳性神经纤维的影响。设计:随机对照实验。单位:咸宁学院医学院解剖学教研室,华中科技大学同济医学院神经生物学研究室。材料:实验于2003-10/12于华中科技大学同济医学院神经生物学研究室完成。健康Wistar大鼠20只,雌雄不拘,体质量120～170g。方法:辣椒素皮下注射处理大鼠三叉神经眶下支,大鼠左侧面区为对照侧,右侧面区为实验侧,按用量将动物分为辣椒素20μL组,辣椒素30μL组,辣椒素50μL组,辣椒素100μL组4组,每组5只。24h取材后切片镜检,降钙素基因相关肽和一氧化氮合酶免疫组化染色。主要观察指标:①镜检实验侧各组染色标本中降钙素基因相关肽和一氧化氮合酶阳性神经纤维的变化;图像分析降钙素基因相关肽和一氧化氮合酶的平均吸光度。②大鼠的特征性行为和体征改变。结果:20只大鼠均进入结果分析。①行为变化:皮下注射辣椒素溶液数分钟后,大鼠出现一系列特征性的行为和体征改变,但随着用药次数的增加,则逐渐减轻或消失。②镜检结果:实验侧各组标本中降钙素基因相关肽和一氧化氮合酶阳性神经纤维有明显差别。③图像分析各组大鼠面部皮肤降钙素基因相关肽平均吸光度:对照侧为0.984±0.056,辣椒素20μL组为0.947±0.025,辣椒素30μL组为0.852±0.042,辣椒素50μL组为0.756±0.028,辣椒素100μL组为0.730±0.016;各组大鼠面部皮肤一氧化氮合酶平均吸光度:对照侧为0.151±0.009,辣椒素20μL组为0.148±0.007,辣椒素30μL组为0.132±0.012,辣椒素50μL组为0.111±0.067,辣椒素100μL组为0.107±0.006。方差分析组间差异有显著性意义(P<0.01)。结论:降钙素基因相关肽、一氧化氮合酶参与了伤害性信息处理和调控痛与镇痛的过程,辣椒素通过耗竭大量的神经递质而发挥镇痛作用。

脊髓源神经干细胞转基因治疗脊髓损伤

目的:为脊髓源神经干细胞转基因治疗脊髓损伤的基础与临床实验研究提供综合性研究资料。资料来源:通过计算机检索中国期刊网全文数据库1990-01/2005-12有关脊髓源神经干细胞的相关文献,检索词为“神经干细胞,脊髓损伤”。同时检索PubMed数据库中1990-01/2006-07期间的相关文章,检索词为“neural stem cell(NSC),spinal cord injury(SCI)”。资料选择:选择有关脊髓神经干细胞的基础研究及脊髓神经干细胞移植治疗脊髓损伤相关文章。资料提炼:共收集53篇文献,删除了内容有不同程度重复的文献22篇,对其他31篇文献进行整理,其中29篇选作参考文献。资料综合:脊髓源神经干细胞的基础研究取得了一定的成果,但还是停留在实验室阶段。脊髓源神经干细胞的分离培养、扩增和定向分化诱导还有待进一步研究,同时神经干细胞应用于人体治疗的生物安全性也逐渐引起人们的重视,如在体外多次传代的神经干细胞是否会发生转化,体外扩增并植入体内的神经干细胞是否会带来一定的副作用,甚至致瘤性等均在进一步探索中。另外移植方法、途径、适应证等问题的存在,使临床实际应用还有很长的路要走。相对于脑神经干细胞,脊髓源神经干细胞的生物学特性更有待进一步研究。结论:采用神经营养因子修饰脊髓源神经干细胞移植治疗脊髓损伤已被公认为最新、最有前途的治疗方法之一。但脊髓源神经干细胞的基础研究和临床应用研究还刚刚起步,许多问题尚待研究。

辣椒素对大鼠三叉神经节一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的研究辣椒素(CAP)对大鼠三叉神经节内一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的影响,探讨CAP治疗三叉神经痛的机制。方法把CAP配成 30mmoL浓度溶液备用,按用量分成 4组 (A组 20μl、B组 30μl、C组50μl和D组 100μl),分别皮下注射处理大鼠三叉神经眶下支, 24h后取材,切片,免疫组化染色,镜检,计算机图像分析。结果经方差分析, 各组之间P< 0. 01,有显著性差异,并且随着用药量的增加其差异愈显著。结论CAP对大鼠三叉神经节内NOS阳性神经元有明显的影响,NOS参与口面部的痛与镇痛。

辣椒素对大鼠面部皮肤一氧化氮合酶阳性神经的影响

目的:研究辣椒素(CAP)对大鼠面部皮肤一氧化氮合酶(NOS)阳性神经的影响,探讨CAP治疗三叉神经的镇痛机制。方法:把CAP配成30mM浓度溶液备用,按用量分成4组(A组20μl、B组30μl、C组50μl和D组100μl),分别皮下注射处理大鼠三叉神经眶下支,24h取材,切片,免疫组化染色,镜检,计算机图像分析。结果:经方差分析,各组之间比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:CAP对大鼠面部皮肤NOS有明显的影响,NOS参与口面部的痛与镇痛。

辣椒素对大鼠三叉神经节一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的:研究辣椒素对大鼠三叉神经节内一氧化氮合酶(nitricoxidesyn-thase,NOS)阳性神经元的影响,探讨辣椒素治疗三叉神经痛的镇痛机制。方法:把辣椒素配成浓度为30mmol/L溶液备用,按用量分成4组(20,30,50和100μL组),各5只。分别皮下注射处理大鼠三叉神经眶下支,24h后取材,切片,免疫组化染色,镜检,计算机图像分析。结果:正常侧半月节内NOS阳性神经元染色、分布、形态均正常,各组随辣椒素用量增多,着色神经元及神经纤维较浠散而浅淡,真至未见或仅见极少着色的神经元及神经纤维。各组大鼠三叉神经节NOS平均吸光度比较经方差分析,差异有非常显著性意义(F=149.136,P<0.01),并且随着用药量的增加其差值也更大。结论:辣椒素对大鼠三叉神经节内NOS阳性神经元有明显的影响,NOS参与口面部的痛与镇痛。

低氧环境下白细胞介素1β诱导中脑源性神经干细胞的分化

背景:在体外某些外来信号的调控和诱导下,神经干细胞可定向诱导分化成与受体部位细胞类型与构成相似的细胞群体,使其更容易掺入靶组织,并可满足移植所需的细胞数量,提高移植细胞的存活率。目的:验证白细胞介素1β在低氧环境下体外诱导中脑源性神经干细胞的分化。方法:分离孕12d胎鼠中脑组织,培养神经干细胞、传代并鉴定。将鉴定后传代培养的中脑源性神经干细胞按分组接种于含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12+白细胞介素1β培养基;分别置于常氧(体积分数21%O2)和低氧(体积分数3%O2)环境下诱导分化,诱导分化9-11d后行小鼠抗大鼠酪氨酸羟化酶免疫细胞化学染色,检测酪氨酸羟化酶及神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率。结果与结论:与常氧组比较,低氧组尤其是低氧+白细胞介素1β组中酪氨酸羟化酶阳性神经元的突起数目更多,且长度更为延长。孕12d胚鼠腹侧中脑组织可以在体外培养传代、并能诱导分化成多巴胺能神经元;在低氧环境或低氧+白细胞介素1β诱导下,分化率均高于常氧组,其表型更成熟。说明在低氧或低氧和白细胞介素1β诱导下,可明显促进中脑源性干细胞分化为形态及功能成熟的多巴胺能神经元。

国人胫骨的测量

本文对四川地区成人干燥胫骨240例进行了测量,经统计学处理结果如下:胫骨各项测值侧别比较,均无显著性差异,但存在着明显的性别差异。按胫骨指数分级,男性多属中胫型和宽胫型,女性多属宽胫型;按胫骨指数分型,男女多属短胫型。