梅毒螺旋体TpN47基因分析及实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的确定不同梅毒螺旋体TpN47基因序列的差异性及其跨膜结构,建立基于TpN47基因检测梅毒螺旋体的荧光定量PCR方法。方法通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v.2.0等网络资源分析梅毒螺旋体TpN47基因编码蛋白的保守功能结构域和跨膜区域。根据参考序列设计引物,采用PCR技术从梅毒螺旋体基因组DNA中扩增TpN47基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用DNASTAR软件比较不同梅毒螺旋体菌株TpN47基因的核苷酸序列。根据梅毒螺旋体TpN47基因保守区域设计引物,建立基于该目的基因的荧光定量分析PCR检测方法并分析其灵敏度、特异性和稳定性。同时,采用基于TpN47基因的荧光定量PCR对梅毒螺旋体感染患者血液样本进行检测。结果研究表明,梅毒螺旋体TpN47基因为梅毒螺旋体外膜蛋白编码基因,其产物定位于外膜表面。不同梅毒螺旋体菌株中TpN47基因的核苷酸序列保守,相似度达99%以上。基于TpN47基因的荧光定量PCR方法可有效地检测梅毒螺旋体感染患者血清及泌尿道分泌物样本中的梅毒螺旋体。结论 TpN47基因为梅毒螺旋体外膜蛋白编码基因,建立的基于TpN47基因的荧光定量PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于梅毒螺旋体临床实验室诊断。