李属坏死环斑病毒扬州分离物CP基因的原核表达及抗血清制备

李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)严重危害蔷薇科植物,在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法,依据PNRSV CP基因序列设计引物,并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段,将双酶切产物插入原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-CP^(PNRSV),转化大肠埃希菌Rosetta菌株,IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE电泳检测显示,在分子量约25 ku处有蛋白质条带,符合预期大小。镍柱亲和纯化PNRSV CP蛋白,以其纯化蛋白质免疫健康新西兰白兔,制备多克隆抗血清。Western blot、ELISA、Dot blot检测结果显示,制备的抗血清能检测到PNRSV CP基因在感病植物叶片中表达,而在健康植株中未检测到;制备的抗血清滴度稀释至1∶64000时,仍能与纯化蛋白质发生特异性反应。综上,制备的PNRSV抗血清特异性强、效价高,可用于PNRSV的快速检测。

地黄花叶病毒河南分离物的CP基因克隆及序列分析

为探究地黄花叶病毒(rehmannia mosaic virus,ReMV)在河南地黄上的发生与分布及其基因变异情况,从河南温县中草药园采集若干疑似受病毒侵染而呈现出花叶、枯萎等症状的地黄样品,用酚仿法提取地黄样品总RNA,通过PCR扩增目的基因地黄花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因片段,经过回收纯化后,克隆至pMD19-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,随机挑选4个阳性单克隆测序,最后将结果与NCBI数据库中已有的核苷酸序列进行比对,并结合NCBI数据库中已发布的不同地区ReMV分离物的CP基因序列,构建基于CP^(ReMV)核苷酸序列的ReMV不同地区分离物的系统进化树。结果表明:成功克隆出ReMV河南分离物的CP基因,将该序列上传至NCBI后获得GenBank登录号为OM964874;通过构建系统发育进化树,该分离物与郑州、山西、韩国报道的ReMV分离物亲缘关系较近,可能有相近传染源,而与美国、日本的分离物亲缘关系较远,存在一定的遗传分化,序列一致性分析结果与此一致。综上,这一研究扩大了ReMV群体的传播范围,丰富了其基因信息,为揭示ReMV的致病机制奠定了基础。

《黄海风、湿地情》系列舞蹈的编创体会

2019年,黄海湿地入选世界自然遗产,为江苏省、也为我市生态文明建设增添一张亮丽的名片。加强湿地保护,宣传生态成果,让更多的人了解湿地,认识自然,从而为保护这片广袤的滩涂贡献力量,是我们这代人义不容辞的使命和担当。正是带着这种责任感,盐城市歌舞剧院不久前组织了一批文艺编创人员先后三次前往东台条子泥做艺术采风。

永远的洛丽塔——浅析《洛丽塔》、《源氏物语》谈洛丽塔情结

《洛丽塔》少女情怀总是诗老子说：甚爱必大费。这是《老子》＂甚爱必大费,多藏必厚仁＂里的半句话。释义为,＂所以说,过份的贪求物质与名利欲望的人,必定要劳心劳力,大费精神,结果失去越大,贪求利禄的人,必定喜爱宝贵的珍品,但是珍品藏很越多,反而使人嫉妒怨恨,结果往往身遭横祸。＂老子阐明了一个因果关系。而＂甚爱＂一词用于男女之爱。

Hs-CRP与白细胞联合检测在小儿急性上呼吸道感染中的应用

急性上呼吸道感染是鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称,一般病情较轻,病程较短,预后良好,但发病率高,具有一定的传染性,有时还可产生严重并发症。其常见病原体为病毒,少数是细菌。我们通过联合检测超敏C-反应蛋白（Hs-CRP）和白细胞水平,以鉴别小儿急性上呼吸道感染的病因。

甘蔗线条花叶病毒P1蛋白基因原核表达及抗血清制备

甘蔗线条花叶病毒Sugarcane streak mosaic virus(SCSMV)是引起甘蔗花叶病的主要病原之一,在世界各大蔗区普遍发生,严重威胁甘蔗产业的发展。建立快速有效的检测方法对于SCSMV的防控有着重要意义。本研究依据SCSMV P 1基因序列合成一对引物,扩增获得1074 bp的目的基因,将目的基因与原核表达载体pET28a连接,获得pET28a-P1^(SCSMV)。将连接正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta菌株,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测显示在分子量约为42 kDa处有目的蛋白带,与预期的SCSMV P1大小一致。融合蛋白主要是以可溶性蛋白的形式存在。利用镍柱亲和纯化重组的SCSMV P1蛋白,并免疫健康新西兰大白兔,制备兔抗血清。Western blot分析显示,在对多个样品进行检测时制备的抗血清能特异性地识别SCSMV的P1蛋白,在受SCSMV侵染的甘蔗植株中能检测到P1蛋白的表达,而在健康植株中检测不到P1蛋白的表达。制备的抗血清稀释至1∶20000时仍能特异地检测到目的蛋白条带,说明通过大肠杆菌表达P1制备的SCSMV抗血清特异性强,效价高。本研究为SCSMV的快速检测提供了有效方法。

地黄花叶病毒河南分离物检测鉴定及其MP序列分析

2019年夏,在河南温县中草药园内发现种植的地黄呈现疑似病毒侵染所表现出的褪绿、花叶等症状,采集该样品,用Trizol法提取地黄样品总RNA,分离其siRNA,并进行文库构建和siRNA高通量测序。将测序结果经接头去除、拼接组装后(Velvet Software 0.7.31,k=17),与NCBI数据库中序列进行核酸比对分析,发现该样品中存在着地黄花叶病毒(Rehmannia mosaic virus,ReMV)和瓜类褪绿黄化病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)的部分片段。通过RT-PCR确认该样品存在ReMV的侵染,使用商业化的ELISA试剂盒进一步确认该样品被ReMV侵染过。进一步克隆ReMV河南分离物的MP序列,并结合NCBI数据库中发布的该病毒MP序列,构建了基于MP序列的ReMV河南分离物系统发育树。该研究丰富了ReMV群体的传播范围及其基因组遗传信息,为后续ReMV的深入研究奠定了基础。

浅谈舞剧《烽烟桃花飞》的场景寓意

为庆祝中国共产党成立100周年,用文艺讴歌党的光辉历史,再现1941年抗日战争烽火燃烧的岁月里,华中鲁艺的广大战士在党的领导下所表现的英雄业绩和大无畏牺牲精神,激发今天的人们继承光荣的革命传统,弘扬伟大铁军精神,不忘初心、牢记使命,为实现中华民族伟大复兴的宏伟目标而不懈奋斗,奋力谱写“争当表率、争做示范、走在前列”的盐城新时代答卷,从2016年起,历经三年的创作,由我团演出的大型原创舞剧《烽烟桃花飞》(以下简称《烽烟》)终于搬上舞台与广大观众见面。

试剂间的携带污染对测定结果的干扰及对策

影响临床检验结果的因素很多,除饮食、标本采集、药物、方法学外,试剂间的携带污染也长期困扰着检验人员。因其隐蔽性强,不易发现,常导致错误结果,给临床造成误诊,严重者可危及病人的生命,因此携带污染问题不容忽视。

河南温县地黄上瓜类褪绿黄化病毒的鉴定及其CP序列分析

0引言地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)为玄参科(Scrophulariaceae)多年生草本植物,根部为传统中药材,主要产区分布在山东、山西、河南、河北、北京等地。地黄栽培中通常使用块根进行无性繁殖,易导致病毒病积累发生,从而严重影响地黄的产量与质量[1]。目前侵染地黄的植物病毒主要有烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)、地黄花叶病毒(rehmannia mosaic virus,ReMV)、油菜花叶病毒(youcai mosaic virus,YoMV)、蚕豆萎蔫病毒2号(broad bean wilt virus 2,BBWV2)、车前草花叶病毒(plantago asiatica mosaic virus,P1AMV)等[2]。