胚胎植入前单基因遗传学检测结合HLA配型诊疗X连锁高IgM综合征1例

目的 探讨胚胎植入前单基因遗传学检测(PGT-M)基因突变结合人类白细胞抗原(HLA)配型在X连锁高IgM综合征(X-HIGM)患者临床诊疗中的应用效率及可行性。方法 应用多重PCR结合二代测序技术针对X-HIGM的致病基因CD40LG及临近区域特异性单核苷酸多态性(SNP)位点进行鉴别构建单体型,另外针对HLA-A、HLA-B、HLA-DRA、HLA-DQB1及临近区域特异性SNP位点进行鉴别构建单体型。经本中心常规促排卵、体外受精及胚胎培养,随后进行胚胎活检;对于目标基因CD40LG进行PGT-M,包括直接突变检测和间接单体型连锁分析;对于HLA采用HLA复合体中多个位点的连锁分析来选择相合的胚胎。结果 先证者男孩,临床诊断为X-HIGM,基因检测分析显示其X染色体上的CD40LG基因有1个半合子突变,c.49_59del(p.L17Hfs*28)。该基因突变会导致X-HIGM。经家系验证发现,先证者母亲在该位点存在和先证者相同的杂合变异。对该家系通过单体型连锁分析之后进行CD40LG基因检测+HLA配型双重PGT。由于先证者母亲卵巢储备不足,只获得3枚卵子,受精后养成的囊胚也只有1枚,这枚囊胚的PGT结果为整倍体+未携带CD40LG基因突变+HLA配型半相合。此枚胚胎发育出生的婴儿没有患上X-HIGM,而且他的半相合的造血干细胞成功移植给了先证者。结论 PGT-M技术在该类血液遗传病家系中不仅可以阻断基因突变垂直传递,同时HLA相合胚胎的选择也为先证者儿童的造血干细胞移植治疗提供了新的曙光。

测序技术在无创产前筛查中的应用及进展

测序技术是现代分子生物学研究中的重要技术,1977年桑格测序技术(一代测序技术)出现。30年后,二代测序技术也应用于科研及临床;近年国外出现了以单分子测序为特点的第三代测序技术。测序技术促进了无创产前筛查技术的进步。相对于传统的羊膜腔穿刺术和绒毛活检,高通量测序技术通过对妊娠妇女血浆中胎儿游离DNA进行测序而获得胎儿的染色体信息,避免直接接触和伤害生长中的胎儿。研究人员利用大规模并行测序技术发现无创产前筛查技术相对于标准筛查技术拥有较高敏感度和特异度。多国卫生机构相继公布了产前检测的指导意见。2013年,单细胞测序开始应用于产前辅助生殖技术的临床试验。国内外通过对单个卵细胞的测序有望大幅度提高辅助生殖的活产率。高通量测序技术在产前诊断领域具有广阔的应用前景。

端粒酶逆转录酶基因多态性与中国人群肝细胞肝癌遗传易感性的关系

目的探讨端粒酶逆转录酶（TERT）基因多态性与中国人群乙型肝炎病毒阳性肝细胞肝癌（HCC）易感性的关联。方法采用病例一对照研究设计，以经确诊的1300例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性HCC患者作为病例组，同时选取1344例HBsAg阳性人群作为对照组。选取TERT基因rs2736098和rs2736100为研究位点，应用TaqMan探针法进行多态性检测，并用logistic回归计算OR值（95％CI），比较不同基因型与HCC发病风险的关系。结果rs2736098位点3种基因型GG、AG及AA在病例组分布频率分别为39．3％（500／1273）、44．2％（563／1273）及16．5％（210／1273）；在对照组中分别为39．6％（526／1328）、45．5％（604／1328）及14．9％（198／1328）。rs2736100位点3种基因型AA、AC及CC在病例组分布频率分别为33．7％（428／1269）、49．9％（633／1269）及16．4％（208／1269），在对照组中分别为34．0％（449／1322）、49．2％（651／1322）及16．8％（222／1322）。多因素logistic回归分析显示，在调整年龄、性别、吸烟和饮酒因素后，携带至少1个rs2736098位点突变等位基因A的个体与携带GG基因型的个体相比，HCC发病风险差异无统计学意义[AA＋AG对GG：调整OR=1．00（95％CI：0．86—1．18）]；与携带AA基因型个体比较，携带至少1个rs2736100位点突变等位基因C的个体HCC发病风险差异无统计学意义[AC＋CC对AA：调整OR=1．03（95％CI：0．87—1．22）]。结论TERT基因rs2736098和rs2736100多态改变可能不是中国人群HCC易感性标志物。