TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化及对Twist1表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化(EMT)及对Twist1表达的影响。方法采用10 ng/ml的TGF-β1作用结肠癌细胞SW480 72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力;细胞免疫荧光、Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测E-cadherin、Vimentin及Twist1的蛋白和mRNA表达。结果经TGF-β1诱导72 h后,SW480细胞呈典型间质型细胞形态,且细胞的迁移能力明显增强(P<0.05);E-cadherin蛋白及mRNA表达显著下降,Vimentin、Twist1蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮间质转化时可促进Twist1的表达。

结核分枝杆菌Hsp16.3刺激小鼠巨噬细胞向M2分化

目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Mycobacterium tuberculosis heat shock proteins 16.3,MTB Hsp16.3)在体外细胞水平对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞的影响作用。方法:从BALB/c小鼠的胫股骨中取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获取骨髓来源的M0型巨噬细胞,流式检测CD11b和F4/80的表达;分别用IFN-γ、IL-4诱导M0型巨噬细胞,光镜下观察细胞形态,荧光定量PCR、ELISA检测各组细胞IL-12、TNF-α、i NOS、IL-10、TGF-β、Arg-1的表达情况,构建小鼠骨髓来源M1/M2型巨噬细胞的技术平台;用MTB Hsp16.3刺激M0、M1型巨噬细胞,分别孵育24、48、72、96 h,采用ELISA、qRT-PCR检测不同时间点细胞培养液上清和细胞内的IL-12、TNF-α、i NOS、IL-10、IL-4、TGF-β、Arg-1的表达情况。结果:光镜下观察M0型巨噬细胞形态不规则,细胞伪足较短;M1型巨噬细胞形状呈长梭形,并有伪足伸出现,突触很长;M2型巨噬细胞伪足较短,细胞整体形态较为收拢。FCM检测有90%以上的骨髓细胞细胞具有CD11b和F4/80双阳性的特征。ELISA和qRT-PCR检测发现,M1型巨噬细胞高表达IL-12、TNF-α、i NOS;M2型巨噬细胞高表达IL-4、TGF-β、IL-10、Arg-1。MTB Hsp16.3刺激巨噬细胞后,M0和M1型巨噬细胞均高表达IL-10、TGF-β,低表达TNF-α、i NOS,且在48-72 h增加或降低的水平达到峰值。结论:成功诱导了小鼠骨髓来源的M1、M2型巨噬细胞;MTB Hsp16.3促进M1型巨噬细胞高表达M2型相关的细胞因子,可促进M1型巨噬细胞向M2型样巨噬细胞转换。

Gab2过表达对人结直肠癌SW480细胞株增殖和迁移的影响

目的:探讨Gab2过表达对人结直肠癌细胞株SW480增殖和迁移能力的影响。方法:用携带Gab2基因的重组慢病毒颗粒(LV-Gab2-GFP)感染人结直肠癌SW480细胞株,作为实验组(LV-Gab2-GFP组);以对照慢病毒颗粒(LV-GFP)感染人结直肠癌SW480细胞株,作为阴性对照组(LV-GFP组);空白对照组常规培养,不作任何处理。用RT-PCR和Western blot法分别检测细胞中Gab2 mRNA和蛋白表达的水平;CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖能力的变化;划痕愈合实验检测细胞迁移能力的变化。结果:RT-PCR和Western blot均显示LV-Gab2-GFP组Gab2的表达均较对照组显著增高;与对照组比较,Gab2过表达显著增强人结直肠癌SW480细胞的增殖和迁移能力。结论:Gab2过表达可以促进SW480细胞增殖和迁移能力。

Gab2在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的:探讨Gab2在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法:应用免疫组化方法检测78例结直肠癌及46例癌旁正常组织中Gab2的表达水平,并结合临床病理学资料进行统计学分析,Western blot方法检测10对结直肠癌组织及相对应的癌旁正常组织中Gab2的表达状况。结果:免疫组化检测结果显示78例结直肠癌组织中Gab2蛋白表达阳性率为53.85%,而癌旁正常组织中Gab2蛋白多不表达或弱表达,两组结果比较差异有显著性(P<0.001);Gab2蛋白在结直肠癌中的表达与肿瘤TNM分期及有无淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与肿瘤大小、分化程度无明显相关性(P>0.05);Western blot检测结果显示结直肠癌组织中Gab2蛋白表达显著高于相对应的癌旁正常组织(P<0.05)。结论:Gab2在结直肠癌组织中过表达,可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用。

PRDX1在肿瘤中作用机制的研究进展

过氧化物酶1(peroxiredoxin 1,PRDX1)是新近发现的非硒依赖的过氧化物酶家族的重要成员,广泛存在于原核生物和真核生物中。PRDX1作为一个过氧化物酶分子,在细胞质中,参与活性氧族(ROS)相关的多种信号通路的调节;在细胞核中,PRDX1具有分子伴侣功能,与多种核转录因子结合调节其功能改变。近年研究发现PRDX1与多种肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关,并且在乳腺癌和食管癌中具有双向调节作用。本文将对PRDX1的结构功能及在多种肿瘤的研究进展进行综述。

PRDX2基因沉默促进结直肠癌细胞上皮-间质转化增强侵袭转移能力

目的探讨Peroxiredoxin 2(PRDX2)基因沉默在结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其参与侵袭转移的可能机制。方法将带有抗性的对照shRNA(shRNA-Control)和PRDX2 shRNA(shRNA-PRDX2)慢病毒颗粒分别转染结直肠癌SW480细胞,转染后细胞分为PRDX2沉默组(shRNA-PRDX2)和空载对照组(shRNA-Control)。采用免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测两组细胞中PRDX2蛋白和mRNA表达;以5 ng/m L的TGF-β1作用两组细胞,在0、48、72 h观察两组细胞形态学变化;划痕实验和Transwell小室分别检测两组细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot和qRT-PCR法检测E-cadherin、Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达。结果与对照组相比,PRDX2沉默组细胞PRDX2蛋白和mRNA的表达显著降低(P<0.05),成功建立PRDX2基因沉默稳定细胞株;经TGF-β1作用后,PRDX2沉默组细胞呈纺锤体样间质细胞表型,且迁移和侵袭能力明显增强;E-cadherin蛋白及mRNA水平表达显著下降,Vimentin、Snail、Twist1和MMP-9蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P<0.05)。结论 PRDX2基因沉默可促进结直肠癌SW480细胞发生EMT,从而增强细胞的侵袭和转移能力,可能与其转录调节Snail、Twist1表达有关。

γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体CXCR3在结核性胸膜炎患者中的表达和意义

目的:探讨γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体CXCR3在结核性胸膜炎患者外周血和胸水中的表达和临床意义。方法:采集30例健康正常者的外周血及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,采用流式细胞术检测结核性胸膜炎患者外周血单个核细胞及胸水细胞中的CXCR3的表达;用ELISA法检测结核性胸膜炎患者血清及胸水中IP-10的浓度。结果:结核性胸膜炎患者外周血血清中IP-10的浓度显著高于正常对照组(P<0.05),患者胸水中IP-10浓度较高,且患者胸水与患者外周血中IP-10水平具有正相关(r=0.572,P<0.05);结核性胸膜炎患者外周血中CXCR3的表达显著高于正常对照组(P<0.05),患者胸水细胞中CXCR3的表达较高,且患者胸水细胞与外周血中CXCR3表达具有正相关(r=0.627,P<0.05)结论:结核性胸膜炎患者血清中IP-10浓度及外周血单个核细胞CXCR3的表达显著升高,提示IP-10及其受体CXCR3是参与结核性胸膜炎发生发展的重要免疫分子,可能与结核性胸膜炎发病机制有关。

支架蛋白Gab2与肿瘤关系的研究进展

Gab2是Gabs家族蛋白中一种至关重要的信号中介分子,该家族蛋白通过接受多种生长因子、细胞因子及抗原等胞外刺激,参与信号转导的放大及整合。Gab2蛋白被蛋白酪氨酸激酶磷酸化激活后,招募富含SH2结构域的信号效应蛋白如SHP2、PI3K的p85亚基、Crk和GC-GAP,主要介导SHP2/RAS/ERK和PI3K/AKT两条经典的信号通路,在多种生理学及病理学过程中发挥重要作用。近年研究发现,异常的Gab2及其信号与乳腺癌、白血病及黑色素瘤等其他人类肿瘤密切相关。本文就Gab2蛋白的结构、信号调控及在肿瘤中的研究进展进行综述。

LMTK3在ERα阳性乳腺癌中的研究进展

LMTK3是最新发现的在乳腺癌中调控雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)最有效的转录因子。LMTK3通过多种信号通路发挥生物学功能,不仅可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,而且与患者的临床分期、预后及耐药息息相关。虽然,目前对LMTK3的研究不多,但已展示出其在雌激素靶器官肿瘤的发生与治疗中的主要地位。本综述主要针对LMTK3在ERα阳性乳腺癌治疗中介导的效应以及机制的研究进行总结。

热休克蛋白16.3多克隆抗体的制备

目的大肠杆菌表达Hsp16.3,制备其多克隆抗体。方法设计引物,从H37Rv基因组中扩增出目的片段Hsp16.3,pET28a-Hsp16.3质粒的构建、克隆和表达。对His-Hsp16.3进行诱导、表达和纯化。用纯化好的蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,用ELISA检测抗血清中多抗的效价,用Western blot法检测多克隆抗体的生物活性。结果重组质粒pET28aHsp16.3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,SDS-PAGE结果显示在His-Hsp16.3的相对分子质量(Mr)约为20 000。制备的多克隆抗体效价为1∶800,且特异性较好。结论成功的克隆、表达、纯化出His-Hsp16.3,并且成功制备了抗Hsp16.3多克隆抗体。

基于TCGA数据库观察血管生成素样蛋白1在肺癌细胞生物学行为中的作用机制

目的:基于TCGA数据库观察血管生成素样蛋白1(ANGPTL1)在肺癌细胞生物学行为中的作用机制。方法:生物信息数据库TCGA中的肿瘤大数据分析网站GEPIA中查询ANGPTL1在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达(癌旁组织52例,肺癌组织503例),同时分析肺癌患者ANGPTL1高表达和低表达与预后的关系。RT-PCR检测ANGPTL1在不同人肺癌细胞和人肺上皮细胞中的表达,检测ANGPTL1在稳转细胞系NCI-H460-ANGPTL1 mimic及阴性对照NCI-H460-NC和空白对照NCI-H460中的表达;MTT及EdU实验检测ANGPTL1对肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测ANGPTL1对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测ANGPTL1对肺癌细胞迁移能力的影响;Western blot检测ANGPTL1过表达对肺癌细胞株NCI-H460中Drp1、PGAM5和Bax蛋白表达的影响。结果:TCGA结果显示,肺癌组织中ANGPTL1表达明显低于癌旁正常组织(P<0.05),ANGPTL1高表达肺癌患者生存时间明显长于ANGPTL1低表达患者(P<0.05);MTT实验结果显示,第2、3、4天NCI-H460-ANGPTL1 mimic组细胞增殖率明显低于NCI-H460和NCI-H460-NC组(P<0.05),NCI-H460-ANGPTL1 mimic组48 h EdU阳性率明显低于NCIH460和NCI-H460-NC组(P<0.05);Transwell实验显示,NCI-H460-ANGPTL1 mimic组细胞通过matrigel基质胶的数量明显少于NCI-H460和NCI-H460-NC组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,NCI-H460-ANGPTL1 mimic组细胞迁移率明显低于NCI-H460和NCI-H460-NC组(P<0.05),Western blot检测结果显示,NCI-H460-ANGPTL1 mimic组细胞中PGAM5和Bax蛋白表达明显高于NCI-H460和NCI-H460-NC组,而Drp1表达明显低于NCI-H460和NCI-H460-NC组(P<0.05)。结论:过表达ANGPTL1可能通过抑制Drp1表达激活PGAM5和Bax,抑制肺癌细胞增殖、侵袭和迁移,ANGPTL1是肺癌的新型肿瘤标志物及潜在治疗靶点。

某地区老年人血糖和血脂检测结果分析

目的：探讨14632例60岁以上老年人健康体检中血糖（blood sugar，GLU）与血脂各成分之间的关系。方法以14632例健康体检老年人为研究对象，清晨空腹采静脉血3ml，2h内用日本产Olympus AU5400全自动生化分析仪检测血糖（GLU）和血脂，血脂检测项目包括：总胆固醇（total-cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein-C，HDL—C）、低密度脂蛋白胆固醇（light density lipoprotein-CLDL—C）、载脂蛋白A1（apolipoproteinA1，ApoA1）、载脂蛋白B（apolipoproteinB，ApoB）和血清脂蛋白（a）[lipoprotein（a），Lp（a）]，所得数据用SPSS11．5统计软件进行统计分析。结果血糖（GLU）与三酰甘油（TG）、载脂蛋白B（ApoB）之间存在显著的正相关，而与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）存在显著的负相关；随着GLU的增高，血脂差并存在显著性；在高TG组与非高TG组间，GLU差异存在显著性。结论GLU和血脂各成分间关系不尽相同，与TG和ApoB呈显著的正相关，与HDL—C呈显著的负相关；高血糖人群患有高血脂的概率明显增高，高血脂（高TG）人群患有高血糖的概率显著增高。

基于区块链的农机跨区域调度模型构建与应用

由于各区域之间的调度策略与农产品种类存在差异使得相互之间难以管理,因此农机跨区域调度呈现无中心的管理模式。且由于区域之间距离较远导致个体农户与调度方之间难以建立信任关系,从而无法充分利用已有的农机资源,难以有效降低各区域农机的购买成本。针对上述问题,该研究构建了基于区块链的农机跨区域调度系统。首先,对农机的调度成本进行分析,建立以农机数量、农机需求量与机手数量为约束条件的农机跨区域调度模型;然后以调度成本最小化为目标,采用基于最短距离的农机跨区域调度匹配方法求解农机调度方案,并通过区块链智能合约自动执行调度匹配算法;最后根据江苏省宜兴市与安徽省广德市的农田与农机数据以及随机生成的调度任务进行仿真试验,并与区域内的调度成本与农机利用率进行对比。结果表明:区块链的去中心化特点可以满足无中心的跨区域调度需求,其身份认证机制与高透明度、不可篡改的技术特性可为用户提供技术上的信任保障。在各区域农机总量充足的情况下,跨区域调度可以减少农机购买成本,并将农机利用率提升至90%,相较于域内调度,跨区域调度的投入成本随着任务数的增加而下降,当任务数为10时,成本下降大约21.3%。研究结果可为农机跨区域调度模式的建立提供科学依据。

槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与Bcl-2、C-myc表达的影响

目的:研究槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、癌基因C-myc表达的影响。方法:5、10、20、40、80、160μmol/L槲皮素处理SW480细胞后,采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;实时荧光定量反相聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测Bcl-2、C-myc mRNA和蛋白表达水平。结果:槲皮素对SW480细胞有明显抑制作用,能够诱导SW480细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关;40μmol/L槲皮素可明显抑制Bcl-2、C-myc mRNA的表达;处理48、72 h时40μmol/L槲皮素明显抑制Bcl-2、C-myc蛋白的表达(P<0.05)。结论:槲皮素能够抑制SW480细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性,槲皮素可能通过下调Bcl-2、C-myc的表达水平而发挥抗结直肠癌作用。

GM-CSF参与APC及T细胞免疫应答调节研究进展

GM-CSF是机体受抗原刺激,体内多种细胞如T细胞、巨噬细胞、内皮细胞及成纤维细胞等分泌产生的一种造血生长因子及免疫调节剂,能够刺激骨髓前体细胞增殖与成熟,对多种粒细胞的功能都具有重要的调节作用。近年来研究发现,GM-CSF作为一种免疫佐剂,不仅可以促进APC(如DC和巨噬细胞)的成熟,提高其抗原提呈能力,而且在T细胞介导的炎症性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤中扮演着关键性作用。本文简要综述GM-CSF的生物学特性及参与APC、T细胞免疫应答调节的概况和进展。