胰岛素对胞内不同水平环二鸟苷酸铜绿假单胞菌运动能力的影响

目的探讨胰岛素对胞内环二鸟苷酸(Cyclic diguanosine-5'-monophosphate,c-di-GMP)浓度表达不同的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)运动能力的影响,为进一步研究胰岛素对胞内c-di-GMP浓度表达不同的PA在糖尿病小鼠模型中的作用提供基础。方法按胞内c-di-GMP表达量不同分为对照野生PAO1组、胞内c-di-GMP低表达PAO1/Plac-yhjH组和胞内c-di-GMP过表达PAO1/ΔwspF组。将三种菌株接种于无胰岛素的琼脂中,测定运动环直径以评估不同菌株的泳动、群集和蹭动能力。然后再将三种菌株接种于分别含有200nU/ml、200μU/ml和200mU/ml浓度胰岛素的琼脂中,分析不同菌株在胰岛素干预后其运动能力的变化。结果在无胰岛素干预下,与PAO1组相比,PAO1/ΔwspF组运动能力明显被抑制,相反PAO1/Plac-yhjH组的运动能力则稍提高。在PAO1、PAO1/Plac-yhjH菌株中,与热变性胰岛素对照组相比,含有200mU/ml、200μU/ml、200nU/ml三种胰岛素浓度组的泳动、群集运动直径都明显变小,差异具有统计学意义(P<0.05),且在三个浓度之间菌株的泳动、群集能力无统计学差异,其影响与胰岛素无剂量依赖性。结论胰岛素能抑制PA野生菌株及细胞内c-di-GMP低表达菌株的泳动、群集能力,且与胰岛素无剂量依赖性。

铜绿假单胞菌密度感应系统对铜绿假单胞菌-烟曲霉菌早期混合生物被膜的体外作用研究

目的探讨铜绿假单胞菌密度感应系统(QS)对早期铜绿假单胞菌-烟曲霉菌混合生物被膜(BF)的体外影响。为临床相关混合微生物感染的治疗提供依据。方法体外建立野生型铜绿假单胞菌(PAO1)和铜绿假单胞菌密度感应缺陷菌株(P.aΔlasI/rhlI)分别与临床分离的烟曲霉菌株(A.f)形成混合BF,及单独野生型铜绿假单胞菌(PAO1)、铜绿假单胞菌密度感应缺陷菌株(P.aΔlasI/rhlI)、烟曲霉菌生物被膜,pH为7.0的RPMI-1640组作为空白对照组,于孵育24h,用结晶紫染色法半定量检测生物被膜形成能力;二甲氧唑黃(XTT)比色法评价生物被膜体外生长动力学;正置电子显微镜及扫描电镜观察生物被膜表面形态。结果结晶紫染色法半定量检测24h生物被膜形成能力提示,P.aΔlasI/rhlI+A.f混合生物被膜厚度大于其他各组(P<0.05);PAO1+A.f混合生物被膜厚度与单纯烟曲霉生物被膜组比较差异无统计学意义;XTT比色法生长动力学检测显示,P.aΔlasI/rhlI+A.f混合组活力强于PAO1+A.f组(P<0.05);正置电子显微镜及扫描电镜观察生物被膜表面形态提示,镜下P.aΔlasI/rhlI+A.f混合生物被膜中可见烟曲霉菌丝密度大于PAO1+A.f组,PAO1+A.f组菌丝密度较单独A.f组减少。结论 QS对野生型铜绿假单胞菌(PAO1)+烟曲霉菌株(A.f)早期混合生物被膜的形成起抑制作用。