2001至2005年上海市1450份住院患儿A组轮状病毒分子流行病学研究

目的对2001至2005年上海地区住院患儿A组轮状病毒分子流行病学进行研究,为今后轮状病毒疫苗的研制和应用提供基础数据和理论依据。方法从复旦大学附属儿科医院2001至2005年住院的腹泻婴幼儿1450份轮状病毒抗原阳性粪便标本中用机械抽样的方法随机抽取363份,建立套式RT-PCR的方法,从粪便中检测轮状病毒基因并进行G和P型别的分型。结果轮状病毒腹泻的主要流行季节是10~12月份,2岁以内的患儿占全部患儿总数的79.9%(290/363)。G1型所占比例在2001年最多为28.8%(25/87),以后逐年下降至2004年的1.7%(1/60),但2005年又回升至7.0%(4/57)。G3型在5年间均是最主要的流行型别。存在但少见的流行型别是G2和G4型,2001和2002年分别为14.9%(13/87)和5.0%(5/100)。每年的主要流行株均为P[8],不同年份尚流行少量的P[4]和P[6]型。G3P[8]成为2001至2005年上海地区的主要轮状病毒流行株,其次的流行型别包括2001和2003年份的G1P[8],2002年的G3、P混合型,2004至2005年的G3、P未知型。结论2001至2005年上海地区轮状病毒流行型别显示了一定的变化规律,G3、P[8]及其组合G3P[8]是5年间上海地区的主要轮状病毒流行株,不同年份尚有一些其他已知和未知型别的流行。

尿巨细胞病毒定量检测在巨细胞病毒感染诊断中的意义

目的探讨尿巨细胞病毒(CMV)定量检测在儿科CMV感染诊断中的意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ-PCR)方法检测110例确诊或疑诊CMV感染和81例对照患儿尿CMV-DNA,并与血清抗体检测、pp65抗原检测比较,对更昔洛韦治疗的17例病人进行治疗后尿CMV-DNA;拷贝监测。结果 1．确诊或疑诊为CMV活动性感染患儿110例,其中82例尿中检测到CMV-DNA;对照11例检测到尿CMV-DNA,其中10例为正常健康儿童;且不同年龄组CMV-DNA的阳性率不同。17 例更昔洛韦治疗后,尿CMV-DNA的平均拷贝数明显下降(P<0．001)。2．FQ-PCR、pp65、IgM检测方法敏感性分别为87％、 74％、59％,特异性分别为97％、86％、69％;与其他两种方法比较,FQ-PCR方法敏感性和特异性均明显高(P均<0.001)。结论 FQ-PCR检测尿CMV-DNA对诊断活动性CMV感染有一定意义,量化结果便于治疗过程中进行连续的监测。

EB病毒感染实验室诊断方法探讨

目的探讨EB病毒(EBV)感染的实验室诊断方法。方法设计针对EBV基因组的引物和荧光标记探针,利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测70例外周血标本。其中17例是确诊EBV感染及传染性单核细胞增多症患儿,27例是临床高度怀疑EBV感染患儿,26例是临床非EBV感染的患儿,并与检测EBV抗体VCA-IgM的酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果确诊组、疑似组和对照组患儿FQ-PCR检测EBV的阳性率分别为100.00%、81.48%和0.00%。与此对应VCA-IgM的阳性率分别为100.00%、25.93%和0.00%。确诊组EBV DNA的平均拷贝数为1.15×105/m l,疑似组为4.38×104/m l,均明显高于对照组(P<0.05)。结论与VCA-IgM检测方法相比,FQ-PCR检测到EBV感染的阳性率更高,EBV DNA的定量检测可帮助诊断儿科活动性EBV感染,尤其是可疑患儿的临床诊断。

北京市小儿急性腹泻病病原学监测

1986年3月～1987年2月在北京东、南、西、北4个区县中4所儿童医院门诊逐月采取5岁以下小儿急性腹泻831例的粪便标本。对照组为同龄健康小儿263例,做了细菌、病毒和原虫等病原流行病学监测。患儿组病原阳性总检出率为65.3％,主要病原有轮状病毒27.2％,致泻大肠杆菌18.9％,志贺氏菌7.9％,沙门氏菌4.3％,空肠弯曲菌3.1％,气单孢菌3.4％,并做了分型与药敏试验。

2001至2005年上海部分地区腹泻住院患儿诺若病毒分子临床流行病学研究

目的通过对上海地区腹泻住院患儿进行诺若病毒检测,对其流行株进行基因序列的测定,以了解诺若病毒在上海地区的流行特征,为该病原体所致腹泻的防治提供基础数据和理论依据。方法收集2001至2005年复旦大学附属儿科医院5岁以下腹泻住院患儿的粪便标本。首先进行轮状病毒的检测,在轮状病毒抗原阴性标本中,每隔8个标本按编号顺序行机械随机抽样,建立RT-PCR方法进行诺若病毒的检测。对PCR产物进行双向测序,测序结果通过Clustal W和Mega 4.1软件进行分析。结果研究期间共收集腹泻患儿粪便标本5534份,轮状病毒抗原阴性4084份,机械随机抽得484份用于诺若病毒检测,45/484份(9.3%)检测到诺若病毒。对诺若病毒感染季节分布和患儿年龄特点的分析表明,除4月和7月份未检测到诺若病毒外,其余各月份均检测到诺若病毒,其高发的月份是8至11月。5~6月也呈一个小高峰。77.8%(35/45)的患儿<2岁,其中6~11个月的患儿所占比例最高,达35.6%(16/45),<6个月的婴儿占20%(9/45)。GⅡ-4型是这5年间尤其是2003年之后的主要流行型别,2001至2002年尚存在其他的流行型别GⅡ-3和GⅡ-7...

小儿支原体肺炎96例临床分析

经肺炎支原体核酸聚合酶联反应（MPDNA－PCR法）及培养确诊的小儿支原体肺炎96例，占同期肺炎总数的15.87％。发病年龄＜5岁者86.45％，而3岁以内者为64.58％，最小年龄仅l20/30月。除肺炎外有肺外多器官损害者21例（21.88％）。96例中合并其他呼吸道病毒感染者23例（23．96％），其中腺病毒（ADV）及呼吸道台胞病毒（RSV）各5例，副流感病毒ⅠⅢ或Ⅱ（PⅣ－ⅠⅢ，Ⅱ）13例。全部病例均用红霉素治疗，治疗好转率达10O％。

呼吸道合胞病毒DNA疫苗的构建和免疫效果的初步观察

目的构建呼吸道合胞病毒(RSV)的DNA疫苗并对其免疫效应进行观察,为RSV的免疫预防提供新思路。方法构建表达RSV-F蛋白的质粒pcD-F,接种BALB/c小鼠后以RSV long株进行攻击,于攻击当日和攻击后第5、14天采用ELISA和ELISPOT方法分别检测小鼠RSV特异性IgG抗体和分泌RSV特异性IFN-γ的淋巴细胞,荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织RSV-RNA的含量。肺组织切片行苏木精-伊红染色,观察RSVlong株攻击后肺组织病理改变。结果pcD-F免疫小鼠后,产生RSV特异性IgG抗体(滴度1∶60),RSV攻击后第14天,pcD-F免疫小鼠的特异性IgG抗体水平升至1∶250,明显高于对照组(P<0.05)。RSV攻击后,pcD-F免疫小鼠分泌RSV特异性IFN-γ的淋巴细胞升至99个/1×105细胞,明显高于对照组的9个/1×105细胞(P<0.05)。pcD-F免疫小鼠的肺部炎症反应明显轻于对照组,肺部RSV得到有效的清除。结论成功构建的RSVDNA疫苗具有良好的免疫原性。

Ru486对胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞的影响

为研究糖皮质激素的可能作用位点，以分离培养的肺Ⅱ型上皮细胞为主要材料，通过板层小体染色的方法，观察Ｒｕ４８６对该细胞的影响。结果显示，无血清培液中Ｒｕ４８６１０^（－４）ｍｏｌ／Ｌ至培养第１ｄ或１０^（－５）ｍｏｌ／Ｌ培养至第３ｄ时均使Ⅱ型细胞出现坏死现象，但加入地塞米松（ＤＥＸ）１０^（－６）ｍｏｌ／Ｌ４ｈ后再用Ｒｕ４８６则坏死现象消失。由此从形态学角度证实了肺Ⅱ型上皮细胞具有糖皮质激素受体。Ｒｕ４８６是通过阻断该受体发挥作用的。

Coxsackie B组病毒研究

Coxsackie B 病毒有6个血清型,可引起人的一系列严重疾病。为推动对该组病毒的研究,我们采用原代猴肾（MK）、人胚肾（HK）细胞,以及传代细胞 LLc-Mk2、Veto、MA104.BSC-1.Hela.F1.R66、pK15等十种细胞,比较对该组病毒的敏感性,以 CPE 及感染滴度为指标,结果以 HK 最敏感,F1不敏感,Hela 也较敏感。可用 Hela 繁殖病毒、测血清抗体等。

急性轮状病毒性腹泻患儿免疫应答的观察

目的研究小儿在轮状病毒急性感染期的免疫应答特点。方法采用ELISA方法检测血浆和粪便轮状病毒特异性抗体,流式细胞术进行淋巴细胞亚群分析,采用荧光定量RTPCR方法检测外周血单个核细胞转录因子、细胞因子mRNA的表达。结果腹泻患儿血浆中轮状病毒特异性IgMIgG抗体和大便中轮状病毒特异性IgA抗体及CD19细胞亚群比例,均较对照组有明显的升高。腹泻患儿外周血单个核细胞中IL12p40mRNA的表达升高。粪便和血浆中IgA抗体的滴度与患儿腹泻的严重程度有一定关系。结论急性轮状病毒感染小儿早期出现的免疫应答反应,以特异性抗体显著增加为主要特点,并且抗体产生的水平与疾病的严重程度相关。

上海地区急性呼吸道感染患儿病毒病原学研究

目的 探讨上海地区近 5年来急性呼吸道感染患儿病毒病原和支原体病原感染状况。方法 采用系列呼吸道病毒单克隆抗体桥联酶标法或聚合酶链反应技术 ,对上海地区 5年中的急性呼吸道感染患儿 5 496例标本进行病毒学或肺炎支原体 -DNA检测。结果 检出病毒阳性 2 2 5 7例 ,阳性率 41 0 7%以上 ,肺炎支原体 -DNA检出率 16 2 % (5 72 / 35 38)。结论 连续 5年中上海地区有 2次急性呼吸道病毒感染发病高峰 (1994年和 1998年 ) ,病毒性感染流行季节主要在每年 1～ 2月和 11～

急性轮状病毒腹泻小儿单个核细胞Toll样受体的变化

目的 研究轮状病毒腹泻小儿单个核细胞Toll样受体的变化。方法 收集3岁以下因急性轮状病毒腹泻来复旦大学附属儿科医院就诊的小儿75例，以荧光定量RT-PCR方法检测外周血单个核细胞TLR2，3、4、7、8 mRNA的表达情况。结果 起病时间在3d以内的小儿外周血单个核细胞中TLR 2、3、4、7、8 mRNA的表达水平都有明显升高，P均〈0．05。其中TLR 2．3、8 mRNA表达在发病7d和14d时仍高于对照组，P均〈0．05。TLR 4 mRNA的表达在病情较重的息儿比较轻的患儿高，P〈0．05。结论 多种TLR参与了轮状病毒引发的宿主免疫应答反应的启动和调节。

菌痢患儿Toll样受体mRNA表达的变化及与炎性细胞因子的关系

目的探讨Toll样受体(TLR)和细胞因子在细菌性痢疾(以下简称"菌痢")患儿免疫应答中的作用,为该病的防治提供理论线索。方法研究对象为确诊菌痢的患儿55例,建立荧光定量PCR方法对外周血单个核细胞5种TLR和6种炎性细胞因子的基因表达进行定量检测。结果与正常对照组比较,发病在3 d以内和3 d以后的小儿外周血白细胞中TLR2、TLR4 mRNA的表达水平均有明显的升高。IL-8 mRNA的表达水平在发病的全程比对照组均明显升高,IL-12 p40 mRNA的表达水平在起病早期有3倍的明显升高。升高的TLR2、TLR4和升高的炎性细胞因子之间呈明显的正相关关系。结论菌痢患儿TLR2和TLR4显著升高,并通过促使细胞因子的产生启动并参与免疫应答。