甲状腺乳头状癌与桥本甲状腺炎关系的免疫组化研究

目的探讨甲状腺癌与桥本甲状腺炎的关系。方法对27例甲状腺乳头状癌(7例合并桥本甲状腺炎)应用S-P法检测甲状腺癌细胞与HT中增生滤泡上皮中P53、C-erbB-2及PCNA的表达情况。结果癌细胞P53阳性23例(85.19%),C-erbB-2阳性21例(77.78%),PCNA高表达26例(96.3%)。HT增生滤泡上皮P53阳性5例(71.43%),C-erbB-2阳性4例(57.14%),PCNA高表达7例(100%)。结论HT中滤泡上皮增生属于异型增生,与癌细胞有一定的相关性,可视为癌前病变。

肺泡细胞癌痰液细胞学与组织学对比观察

目的:探讨肺泡细胞癌的痰液细胞学特点,提高细胞学检查的阳性率。方法:对10例肺泡癌进行痰液细胞学与组织学对比观察。结果:肺泡癌的痰液细胞学特点:癌细胞分化程度高,异型性较轻,核偏位,核型规整,染色质均细,核、浆比例失常明显,细胞浆淡染或泡沫状;癌细胞呈乳头状排列,边缘部细胞浆呈花瓣状突起;癌细胞数量较多。结论:肺泡细胞癌缺乏典型的临床症状和影像学图像,临床误诊率较高,多数被误诊为粟粒状肺结核或支气管感染。痰液细胞学检查是诊断肺泡癌的有效方法。

结直肠癌组织中EGFR及HER-2的表达及临床意义

目的 探讨结直肠癌组织中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）和人类表皮生长因子受体-2（human epidermal receptor-2,HER-2）蛋白的表达,并分析二者与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化PV-9000两步法检测78例结直肠癌组织中EGFR和HER-2的表达,分析二者表达与结直肠癌临床病理特征的关系;应用银染原位杂交（silverinsituhybridization,SISH）法检测结直肠癌组织中HER-2基因扩增情况。结果 EGFR在结直肠癌组织中的阳性率为69.23%（54/78）,EGFR表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关,与患者性别、年龄、肿瘤大小、细胞分化程度、Dukes分期无关;HER-2在结直肠癌组织中的阳性率为25.64%（20/78）,HER-2表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关,与患者性别、年龄、肿瘤大小、细胞分化程度、Dukes分期无关。EGFR与HER-2蛋白表达呈正相关。20例HER-2蛋白阳性者中,10例HER-2基因扩增;其中15例HER-2蛋白（＋＋～＋＋＋）中有10例HER-2基因扩增,占高表达组的66.67%;5例HER-2蛋白（＋）者无HER-2基因扩增。结论 EGFR和HER-2蛋白在结直肠癌中均呈高表达,EGFR和HER-2的表达与结直肠癌侵袭、转移密切相关,二者可能存在协同作用。HER-2蛋白（＋＋～＋＋＋）与HER-2基因扩增密切相关,故该类患者可考虑先行免疫组化初步筛选,再行SISH法检测确认,从而为结直肠癌分子的靶向治疗提供有价值的信息。

整合素α_5β_1和E-选择素蛋白在结直肠腺癌中的表达及意义

目的探讨整合素α5β1(integrinα5β1)和E-选择素(E-selectin)蛋白在结直肠腺癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组织化学PV方法检测Integrinα5β1和E-selectin蛋白在80例结直肠腺癌组织、15例结直肠腺瘤、10例癌旁正常肠组织中的表达情况。结果 80例结直肠腺癌组织中Inte-grinα5β1和E-selectin蛋白表达阳性率分别为67.50%和58.75%,其表达均高于相应的结直肠腺瘤及癌旁组织(P<0.05)。低分化腺癌组织中Integrinα5β1与E-selectin蛋白表达均高于高、中分化腺癌组织(P<0.05),且两者表达均与癌组织浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。Integrinα5β1与E-selectin蛋白表达之间存在明显相关性(rs=0.264,P<0.05)。结论 Integrinα5β1与E-se-lectin蛋白在结直肠腺癌中高表达,两者可能共同参与了结直肠腺癌的浸润转移过程。

结直肠癌中p-AKT和PTEN蛋白的表达及其临床意义

目的探讨磷酸化AKT(p-AKT)和PTEN蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化PV-9000两步法检测80例结直肠癌手术切除标本和20例癌旁正常组织中p-AKT、PTEN蛋白的表达,分析两者与临床病理特征的关系。结果 p-AKT蛋白在结直肠癌中表达的阳性率(71.25%)显著高于癌旁正常组织(10.00%,P<0.05);而PTEN蛋白在结直肠癌中表达的阳性率(45.00%)与癌旁正常组织(100.00%,P<0.05)相比具有统计学意义的降低,二者的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、浆膜浸润、淋巴结转移具有明显相关性(P<0.05),并且p-AKT与PTEN蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.314,P=0.005)。结论 p-AKT和PTEN蛋白的表达可能与结直肠癌的发生、发展密切相关。联合检测二者的表达,对判断结直肠癌的恶性程度及预后具有重要的临床意义。

病理制片过程的几点体会

在病理技术领域中，HE染色是最常规和最基本的操作技术，一张优质的HE切片，是病理诊断、教学和科研中一个不可缺少的环节。病理制片技术是病理学的一项重要组成部分。一位病理技术工作者，首先要求能懂得组织的石蜡包埋和HE染色的机制，熟练石蜡切片和HE染色技术的操作。几十年来，病理技术有了较大的发展．新设备的问世使病理技术工作者大大减少了繁琐的手工操作．

马兜铃酸作用下肾小管上皮细胞尾加压素Ⅱ、转化生长因子-β1的表达及相互关系

目的观察马兜铃酸(AA)作用下尾加压素(U)Ⅱ和转化生长因子(TGF)-β1在肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达及相互关系。方法常规培养的NRK-52E细胞分别加入DMEM培养基、AA、AA+UⅡ、AA+UⅡ+抗UⅡ抗体,培养24、36、48 h,用RT-PCR技术检测UⅡ、TGF-β1mRNA表达水平。结果与DMEM组比较,AA组NPK-52E细胞UⅡ和TGF-β1基因表达均明显增强(P<0.05);与AA组比较,AA+UⅡ组TGF-β1表达明显增强(P<0.01);与AA+UⅡ组比较,AA+UⅡ+抗UⅡ抗体组TGF-β1基因表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 AA作用下,NRK-52E细胞UⅡ和TGF-β1表达水平均升高,且UⅡ可诱导TGF-β1的表达,提示二者在AA肾病发生发展中可能有一定作用,且二者相互关联。

保证免疫组化染色质量的几个要点

免疫组化染色是临床病理学的重要诊断手段之一,该染色步骤繁琐且每一步都可能影响染色的最终结果,因此保证染色质量是贯穿于免疫组化实验全过程的核心。欲得到一张高质量的免疫组化染色片,必须做好组织固定和制作蜡片的基础工作,准确掌握抗原修复的时间和温度,严格按照染色步骤进行操作。

吡咯烷二硫代氨基甲酸对脂多糖致急性肺损伤大鼠NF-κBP65蛋白表达的影响

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠NF-κB P65蛋白表达的影响。方法雄性大鼠54只,随机分三组。对照组(N组)6只,腹腔注射生理盐水3 ml/kg。ALI组(L组)24只,腹腔注射LPS 3 mg/kg。PDTC干预组(P+L组)24只,先腹腔注射PDTC 120 mg/kg,0.5 h后再腹腔注射LPS 3 mg/kg。后两组分别于腹腔注射LPS后1、2、4、8 h作为观测时间点。观察肺组织胞质及胞核中NF-κB P65蛋白表达强度的变化。结果 ALI组各时相肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较对照组显著降低(P<0.01),而胞核中P65蛋白表达强度较对照组显著升高(P<0.01),但PDTC干预组P65蛋白与ALT组比较,肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较ALT组升高(P<0.05),而胞核中P65蛋白表达强度较ALT组降低(P<0.05)。结论 LPS引起肺组织NF-κB P65蛋白由胞质向胞核转移而活化,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中发挥重要作用。而PDTC可抑制炎性介质的表达和释放,可有效地减轻LPS所致大鼠ALI。

结直肠癌HER-2/neu基因的研究进展

结直肠癌在北美、西欧、澳洲等经济发达地区十分常见,一般为第2-4位常见癌症。随着我国经济的快速发展,国人的生活方式发生改变,结直肠癌的发病率和死亡率在我国经济发展较快的城市和地区迅速上升,居第四位。

马兜铃酸对肾小管上皮细胞UⅡ、GPR14 mRNA表达的影响

目的观察马兜铃酸对肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)中尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体GPR14 mRNA表达的影响。方法在常规培养的NRK-52E细胞中分别加入5、10、20 ng/mL马兜铃酸和单纯培养液(对照组)。培养48 h后用Trizol法提取总RNA,采用RT-PCR法检测UⅡ、GPR14 mRNA。结果用5、10、20 ng/mL马兜铃酸处理48 h后,NRK-52E细胞中UⅡmRNA表达量(相对值)分别为0.53±0.07、0.55±0.05、0.62±0.04,均明显高于对照组的0.41±0.08,P均<0.05;GPR14 mRNA表达量(相对值)分别为0.23±0.06、0.38±0.07、0.51±0.07,20 ng/mL马兜铃酸处理组明显高于对照组的0.22±0.03,P<0.05。结论马兜铃酸以剂量依赖方式促进肾小管上皮细胞UⅡ及GPR14 mRNA表达。

吡咯烷二硫代氨基甲酸对大鼠急性肺损伤TNF-α的影响

目的探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂(吡咯烷二硫代氨基甲酸,PDTC)在脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)中对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法雄性大鼠66只,随机分3组。对照组(N组)6只,腹腔注射生理盐水3 mL/kg;ALI组(L组)30只,腹腔注射LPS 3 mg/kg;PDTC干预组(P+L组)30只,先腹腔注射PDTC120 mg/kg,半小时后再腹腔注射LPS 3 mg/kg。后两组分别于腹腔注射LPS后1、2、4、8、12 h作为观测时间点。观察肺组织匀浆及血浆中TNF-α的变化。结果 L组各时相肺组织匀浆及血浆中TNF-α较N组升高(P<0.01),且以2 h组升高最为显著,但P+L组TNF-α与L组比较减少(P<0.05)。结论 LPS引起肺组织和血中TNF-α大量释放,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中起重要作用。PDTC通过调控炎性介质的表达和释放,可有效地减轻LPS所致大鼠ALI。

银染原位杂交检测结直肠癌组织中HER-2基因状态

目的探讨结直肠癌HER-2基因扩增与HER-2蛋白过表达的关系。方法运用免疫组织化学(IHC)和银染原位杂交(SISH)技术,对手术切除的106例结直肠癌石蜡标本进行HER-2状态的检测。结果 106例标本中,48例(45.3%)HER-2蛋白阳性,12例(11.3%)HER-2基因扩增;其中30例(28.3%)HER-2蛋白(3+/2+)中,HER-2基因扩增10例(9.4%),占高表达组的33.3%;76例(71.7%)HER-2蛋白(1+/0)中,HER-2基因扩增2例(1.9%)。结论 HER-2蛋白(3+/2+)与HER-2基因扩增密切相关,故这类患者可考虑先做IHC初步筛选,再做SISH确认,从而为结直肠癌分子的靶向治疗提供有价值的信息。

鼻型NK/T细胞淋巴瘤误诊原因分析

目的提高对鼻型NK/T细胞淋巴瘤诊断的准确性,降低误诊率,对误诊原因进行分析。方法对19例近年来诊断或疑诊为鼻恶性肉芽肿或淋巴瘤的病例进行回顾性研究,采用免疫组化S-P法检测肿瘤组织中LCA、CD3、CD20、CD56的表达,并按鼻型NK/T细胞淋巴瘤诊断标准重新判读。结果在19例中,组织形态特征及免疫表型符合NK/T细胞淋巴瘤的16例。16例中诊断恶性病变8例,疑似4例,未定诊2例,误诊2例。结论鼻型NK/T细胞淋巴瘤在早期诊断很困难,很容易误诊,误诊原因如下:(1)对其组织学形态特征认识不足,缺乏免疫组化检测手段;(2)活检组织取材不充分,肿瘤细胞过少;(3)对鼻外MMR认识不足;(4)未注意与其他易相混淆的疾病鉴别。

宫颈上皮内瘤变及鳞癌组织中组蛋白去乙酰化酶1的表达及与HPV16/18感染的关系

目的探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈鳞癌组织中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的异常表达以及CIN、宫颈鳞癌发病与HPV16/18感染的相关性。方法应用原位杂交(ISH)技术及免疫组织化学(SP)方法检测慢性宫颈炎组织(慢性宫颈炎组)、CIN组织(CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组)和宫颈鳞癌组织(宫颈癌组)中HPV16/18感染以及HDAC1的表达。结果慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组中HPV16/18的感染率分别为8.33%、34.78%、48.00%、65.21%、78.00%,组间差异有统计学意义(P<0.05);HDAC1阳性表达率分别为0、13.04%、32.00%、47.82%和76.00%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16/18感染组的HDAC1阳性表达率高于HPV16/18未感染组(P<0.05)。HDAC1的阳性表达与宫颈癌的临床分期无关(P>0.05),而与组织分化、间质浸润深度及盆腔淋巴结转移相关(P均<0.05)。结论在宫颈癌的发生发展中,HPV16/18感染可能是通过提高组蛋白去乙酰化酶1的水平抑制转录而发挥作用。

Dnmt1、Caveolin-1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨Dnmt1和Caveolin-1在结直肠癌中的表达及其临床病理意义。方法应用免疫组化PV-9000二步法检测84例结直肠癌组织及20例癌旁正常组织中Dnmt1、Caveolin-1蛋白的表达情况,分析二者与其临床病理特征的关系。结果 Dnmt1蛋白在结直肠癌中的阳性表达率(72.62%)显著高于癌旁正常组织(25.00%)(P<0.05);Caveolin-1蛋白在结直肠癌中的阳性表达率(32.14%)显著低于癌旁正常组织表达率(75.00%)(P<0.05);二者表达与肿瘤的组织学分化程度、Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移等组间差异性有显著性意义(P<0.05);Dnmt1和Caveolin-1蛋白的表达呈负相关关系(r=-0.304,P=0.000)。结论 Dnmt1和Caveolin-1的表达与结直肠癌的发生、发展密切相关。

再生基因Ⅳ在子宫内膜样腺癌中的表达及与细胞增殖的关系

目的检测子宫内膜样腺癌中再生基因Ⅳ(RegⅣ)和增殖相关抗体增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67表达,分析其临床意义。方法 65例子宫内膜样腺癌术后存留的蜡块组织作为观察组,30例复杂性增生的子宫内膜组织作为对照组,21例因子宫肌瘤行子宫全切后的非肿瘤性子宫内膜组织作为正常对照组。应用免疫组化SP法检测三组中RegⅣ、PCNA和Ki67的表达。结果三组中RegⅣ、PCNA和Ki67的表达差别有统计学意义。观察组中RegⅣ、PCNA和Ki67的表达均与肿瘤的浸润深度和最大径均密切相关,RegⅣ的表达与分化程度密切相关。相关分析显示观察组中RegⅣ和PCNA、RegⅣ和Ki67的表达均呈正相关性。结论子宫内膜样腺癌中RegⅣ高表达是肿瘤形成和进展的重要因素,RegⅣ对肿瘤细胞的增殖有一定的调节作用。

大豆素与葛根素抑制LPS诱导RAW264.7细胞NO产生的活性比较

目的:比较分析大豆素与葛根素体外抗氧化及抑制NO、NOS活性机制。方法:用1μg·mL-1LPS诱导体外培养的RAW264.7细胞,制备呼吸爆发、自由基反应模型。采用MTT法检测大豆素及葛根素的细胞毒性;采用DCFH-DA探针及激光共聚焦显微镜观察被试药的抗氧化能力;采用Griess法检测细胞培养体系中NO水平;采用化学比色法测定细胞内T-NOS含量。结果:大豆素与葛根素均能显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞NO释放及T-NOS表达。结论:大豆素与葛根素的抗氧自由基活性接近,有望作为葛根素的替代品使用。

miR-138靶向调控PDK1基因抑制人结肠癌SW620细胞侵袭

目的探讨人结肠癌SW620细胞中miR-138和PDK1基因的表达,阐明miR-138对PDK1基因的靶向调控作用以及对SW620细胞侵袭性的影响。方法培养SW620细胞并应用免疫荧光检测PDK1基因在细胞中的表达。采用生物信息学方法对miR-138和PDK1基因的靶向匹配关系进行预测并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定。脂质体2000转染miR-138模拟物后,qRT-PCR检测miR-138和PDK1基因的表达,Western blot检测PDK1蛋白的表达,Transwell小室检测SW620细胞体外的侵袭性。结果倒置相差显微镜下可见人结肠癌SW620细胞均匀分布,形态规则均一;细胞免疫荧光显示细胞内有PDK1蛋白的表达,显示红色荧光。靶基因预测软件miRanda和Target Scan显示miR-138和PDK1基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现miR-138能够结合PDK1 m RNA 3’UTR并有效抑制其表达。qRTPCR和Western blot检测结果表明过表达miR-138能够导致PDK1基因表达的下降。Transwell实验表明miR-138的过表达能够抑制SW620细胞的侵袭。结论 miR-138通过靶向作用于PDK1 m RNA 3’UTR能够负性调控PDK1基因的表达,并能够抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭。

子宫内膜样腺癌中基质金属蛋白酶14和血管内皮生长因子的表达及意义

目的针对子宫内膜样腺癌组织中基质金属蛋白酶(MMP)-14和血管内皮生长因子(VEGF)的表达特征及相关性进行研究,旨在探讨二者的关系及临床病理意义。方法子宫内膜样腺癌根治手术的56例患者作为观察组,收集术后的蜡块组织及临床资料,25例非肿瘤性的子宫内膜作为对照组。应用免疫组化方法检测两组中MMP-14和VEGF的表达。结果两组中MMP-14和VEGF表达的阳性率差异有统计学意义。观察组中MMP-14和VEGF的表达均与肌层浸润深度和宫颈累犯密切相关。MMP-14的表达与肿瘤的淋巴结转移相关。二者均与年龄和分化程度无相关性。线性相关分析显示观察组中MMP-14和VEGF的表达具有正相关性。结论 MMP-14和VEGF在子宫内膜样腺癌中表达升高,二者有一定的协同作用,对肿瘤性病变的形成和进展有一定价值。