沉默lncRNA PVT1对鼻咽癌细胞C666-1增殖、侵袭转移的影响

目的探讨下调长链非编码RNA PVT1(lncRNA PVT1)对鼻咽癌细胞增殖、侵袭转移的影响。方法采用荧光定量PCR的方法检测PVT1在鼻咽癌细胞中的表达;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析转染siPVT1后对鼻咽癌C666-1细胞生长的影响;用Transwell法评估沉默PVT1对C666-1细胞迁移和侵袭能力的影响;荧光定量RT-PCR和Western blot检测上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)表达。结果 PVT1在鼻咽癌细胞中的表达显著升高;下调鼻咽癌细胞C666-1中PVT1表达可抑制细胞生长、迁移和侵袭;并且抑制N-cadherin和Vimentin的表达,升高E-cadherin的表达。结论下调ln-c RNA PVT1可以抑制鼻咽癌细胞的生长、迁移和侵袭,逆转鼻咽癌细胞上皮间质转化,提示其可作为鼻咽癌治疗的一个潜在靶点。

miR-21在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究miR-21在鼻咽癌组织及细胞中的表达,并分析miR-21反义核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用荧光定量RT-PCR方法检测miR-21在鼻咽癌组织及细胞株中的表达;利用脂质体Lipofectamine TM2000将miR-21 ASO瞬时转染至鼻咽癌细胞,通过荧光定量RT-PCR检测miR-21的沉默效果。利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)、平板克隆形成实验检测miR-21对细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-21对细胞周期的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡-Annexin V-FITC/PI双染色法检测miR-21对鼻咽癌细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测caspase-3蛋白的表达;caspase-3活性检测试剂盒检测沉默miR-21后caspase-3的活性变化。结果 miR-21在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞中显著高表达;MTT法分析显示,细胞接种96 h后,5-8F/miR-21 ASO组的生长速度较对照组显著下降(P<0.05),细胞克隆形成率较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果表明沉默miR-21表达的细胞增殖受抑,主要通过诱导G0/G1期阻滞,减少S期细胞的比例;流式细胞仪检测结果显示转染miR-21 ASO组较对照组细胞凋亡率明显增加,并且caspase-3的活性明显增强。结论 miR-21在鼻咽癌组织及细胞中表达上调,靶向miR-21可有效抑制鼻咽癌细胞增殖、促进细胞凋亡。miR-21的表达可能影响鼻咽癌细胞的生长。

ACE2在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的:探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)在鼻咽癌中的表达并观察ACE2激动剂二乙酰胺三氮脒(DIZE)对鼻咽癌细胞增殖的影响,以及对ACE2、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法:采用免疫组织化学(IHC)En Vision法检测ACE2在66例鼻咽癌、175例鼻咽黏膜慢性炎组织中的表达,以及EGFR在88例鼻咽癌组织中的表达;采用荧光定量RT-PCR法检测ACE2在鼻咽癌细胞中的表达;处理鼻咽癌细胞,采用MTT及平板克隆形成实验检测其对鼻咽癌细胞生长的影响,检测DIZE对ACE2、AngⅡ、Ang(1-7)和EGFR表达的影响。结果:在66例鼻咽癌标本中,均未观察到ACE2的表达,而在黏膜慢性炎标本中,ACE2表达的阳性率为69.7%;鼻咽癌细胞中ACE2的表达显著降低,且与细胞的分化相关;在鼻咽癌组织中EGFR高表达,阳性率为97.7%;DIZE作用于鼻咽癌细胞后,ACE2及Ang-(1-7)的表达升高,AngⅡ与EGFR的表达降低,并且可抑制鼻咽癌细胞的生长及克隆形成。结论:ACE2在鼻咽癌组织与细胞中低表达,ACE2激动剂DIZE可提高ACE2的水平,并且可抑制鼻咽癌细胞增殖。

颈部肿物合并腺样体肥大误诊1例

患者,男,13岁,因发现右颈部肿物1个月余并疼痛3 d,反复双侧鼻腔出血8 d,于2012年12月9日入院。患者于1个月前饮食煎炸食品后开始出现右颈部肿块,约桂圆大小,肿物进行性增大。近3 d伴右颈部疼痛,转颈、按压、吞咽时明显,并伴有低热不适。

沉默变异性浆细胞瘤异位1抑制鼻咽癌细胞增殖作用的机制研究

目的探讨变异性浆细胞瘤异位1(plasmacyto-mavarianttranslocation1,PVT1)抑制鼻咽癌细胞增殖的分子机制。方法构建特异性的shRNA PVT1慢病毒载体,包装慢病毒(LV/shRNA PVT1)并转导鼻咽癌C666-1细胞,检测Smad4的表达;LV/shRNA PVT1转导C666-1细胞24 h后转染Smad4 siRNA,通过细胞计数、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞术分析沉默Smad4对LV/shRNA PVT1介导的鼻咽癌细胞生长及细胞周期的影响,并检测细胞周期相关调控因子的表达。结果下调PVT1后鼻咽癌细胞中Smad4的表达升高,而用siRNA沉默Smad4表达后,结果显示,抑制Smad4表达可阻断LV/shRNA PVT1介导的细胞生长抑制效应,同时细胞周期结果显示,与对照组相比,shRNA PVT1/Smad4 siRNA组细胞G1期比例降低,S期和G2期比例升高,并且CDK4、CDK6及c-myc的mRNA水平升高。结论下调PVT1可抑制鼻咽癌细胞增殖,并升高Smad4的表达,沉默Smad4可阻断shRNA PVT1对鼻咽癌细胞增殖的抑制效应;提示Smad4可能是PVT1作用的一个下游靶基因,下调PVT1可能通过Smad4抑制鼻咽癌细胞增殖。

丹酚酸B抑制人鼻咽癌细胞生长的体外试验研究

【目的】研究丹酚酸B(Sal B)对体外培养的人低分化鼻咽癌细胞株C666-1生长的抑制作用及可能的机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Sal B对C666-1细胞的半数抑制剂量(IC50),以IC50浓度的Sal B处理C666-1细胞48 h后,采用Hoechst 33258进行凋亡染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞周期,观察Sal B对C666-1细胞周期及凋亡的影响。【结果】经Sal B处理24、48、72 h后,C666-1细胞生长受到抑制,以48 h最为显著,IC50为(80±6.8)μg/mL;流式细胞仪检测结果显示Sal B可使C666-1细胞G1期显著延长(P<0.001),凋亡染色计数显示Sal B可诱导C666-1细胞凋亡(P<0.001)。【结论】Sal B体外抑制人鼻咽癌细胞C666-1生长的作用与其能使C666-1细胞G1期显著延长,促进细胞凋亡有关。

cN_0梨状窝癌同侧及对侧颈淋巴结隐匿性转移的规律研究

目的探讨c N0梨状窝癌同侧及对侧颈淋巴结隐匿性转移的规律及特点。方法选取2008-05-2014-06在我院行c N0梨状窝癌手术的60例梨状窝癌患者为研究对象,根据病理检查分为内侧壁癌组、外侧壁癌组及内外侧壁均受侵犯组。三组患者均行双侧Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区颈清扫,对比淋巴结组织病理学检查结果,分析术后复发、颈部淋巴结转移及预后情况。结果 1三组患者通过术后病理检查,共40例发现颈淋巴结转移,转移率为66.7%,其中A组16例,B组16例,C组8例。40例转移颈淋巴结主要集中于颈部Ⅱ、Ⅲ区,其中Ⅱ区21例,Ⅲ区16例,仅3例（7.5%）位于颈部Ⅳ区;2内侧壁癌组复发率（清扫后二次复发）、转移率（未清扫区转移）及远处转移率分别为11.1%,83.3%和5.6%,外侧壁癌组为11.1%,88.9%和0,内外侧壁癌组为12.5%,75.0%和12.5%。结论 c N0梨状窝癌患癌位置对淋巴结隐匿性转移情况具有直接影响,内侧壁癌患者双侧均可能存在隐匿性转移淋巴结。颈部Ⅱ、Ⅲ区证实为颈淋巴结隐匿性转移可能性最大的区域,c N0患者无需行Ⅳ区颈清扫。

改良小切口手术治疗甲状腺腺瘤的疗效观察

目的:分析应用改良小切口手术治疗甲状腺腺瘤的临床效果,为临床治疗提供参考依据。方法:选取2012年3月-2013年6月期间我院收治的甲状腺肿瘤患者64例,随机分为观察组(33例)与对照组(31例),观察组给予改良的小切口治疗,对照组给予传统手术治疗,通过比较两组患者的手术时间、出血量多少以及住院时间等指标,对两组患者的临床疗效进行评价。结果:两组患者最终甲状腺腺瘤均完整切除,无手术并发症出现,全部治愈出院。与对照组比较,观察组手术平均时间、住院时间明显缩短,手术出血量明显减少,不良反应发生率显著降低,经统计学检验,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:应用改良小切口手术治疗甲状腺腺瘤,其出血量较少、手术时间短、患者恢复较快、创伤小、不良反应发生率低,具有很好的临床疗效,应被临床所推广。

鼻内镜手术对鼻窦炎合并鼻息肉患者嗅觉检测评分的影响研究

目的：研究鼻内镜手术对鼻窦炎合并息肉患者嗅觉检测评分的影响。方法回顾性分析我院2013－01～2014－01间收治的60例鼻窦炎合并鼻息肉患者的资料，根据患者采取的治疗方法分为观察组和对照组，每组各30例患者。对照组患者采用药物治疗患者，观察组进行鼻内镜手术的治疗，观察两组患者的嗅觉检测评分等指标变化情况。结果观察组患者在术后12周各项临床症状均显著优于对照组，差异具有统计学意义，P＜0．05；观察组患者在对酸、香蕉等5种不同气味的嗅觉察觉阈值（ DT）和嗅觉识别阈值（ IT）的比较中，显著优于对照组，差异具有统计学意义，P＜0．05。结论较药物等保守治疗方法，鼻内镜手术治疗鼻窦炎合并鼻息肉患者效果显著，手术后患者嗅觉功能得到显著的改善，预后情况良好。

组织细胞性坏死性淋巴结炎—附2例报告及文献复习

目的结合文献探讨组织细胞性坏死性淋巴结炎的临床特征。方法报道2例组织细胞性坏死性淋巴结炎病例,并就本病的临床生物学特征、病因病理、诊断与鉴别诊断、治疗及预后进行分析。结果组织细胞性坏死性淋巴结炎是一种以细胞凋亡为病理特征的非特异性临床表现的淋巴系疾病。以区域性淋巴结肿大为主,易误诊。结论病理学诊断是唯一可靠依据。糖皮质激素治疗可见显著效果并缩短病程,抗生素和抗结核药物治疗无效。本病为自限性疾病,自然病程数周或数月,多数预后良好。

高中化学实验改进的探究与实践

高中化学实验课程在高中化学教育中具有非常重要的作用,能够指导学生如何运用化学知识和规范操作化学实验技术。针对目前高中化学实验中存在的不足展开讨论,探究改进化学实验教学的措施和办法。

Tiam1基因沉默增加紫杉醇抑制头颈部鳞状细胞系SCC Ⅶ的机制

目的构建Tiam1 RNA干扰载体,转染并观测Tiam1基因沉默效果,探索基于Tiam1基因沉默的影响下,紫杉醇对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)治疗的敏感性及其抗癌机制。方法构建Tiam1 RNA干扰载体,体外培养头颈部鳞状细胞癌小鼠HNSCC细胞株SCCⅦ细胞,G418抗性验证Tiam1 RNAi的效果,利用RT-qPCR、Western blot法探索Tiam1基因沉默后紫杉醇对SCCⅦ细胞的表皮生长因子受体(EGFR)、Rac1基因和蛋白的表达。结果成功构建Tiam1 RNA干扰载体,并转染入SCCⅦ细胞,利用G418证实Tiam1 RNAi质粒可明显抑制Tiam1的表达,造成Tiam1基因沉默。紫杉醇给药后,HNSCC细胞侵袭和迁移能力降低,结合Tiam1基因沉默后,EGFR、Rac1表达也减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。由此推测紫杉醇可以通过Tiam1/Rac1、Tiam1/EGFR信号途径起抑癌作用。结论体外实验证实Tiam1基因沉默后,紫杉醇可抑制HNSCC的侵袭与迁移能力,使得EGFR和Rac1的表达降低,推测紫杉醇可能通过减弱Rac1的表达来削弱肿瘤的敏感性,阻碍HNSCC细胞株SCCⅦ细胞新生,抑制其转移,Tiam1基因沉默使紫杉醇抑癌的作用大大提高。

常规放射治疗联合三维适形放射治疗鼻咽癌的临床疗效分析

目的:研究分析采用常规放射治疗联合三维适形放射治疗鼻咽癌的临床治疗效果。方法:选择我院收治的80例鼻咽癌患者,将患者随机分为观察组与对照组,每组40例。对照组给予常规放射治疗,观察组在对照组基础上联合三维适形放射治疗。对比分析两组患者的临床治疗情况及腮腺的毒性反应情况。结果:治疗后,观察组患者的第1年和第3年生存率明显高于对照组,差异显著(P<0.05)。观察组腮腺毒性反应分级(I、II、III级)与对照组对比差异显著(P<0.05)。结论:鼻咽癌患者采用三维适形放射联合常规放射治疗具有较好的治疗效果,能够有效提高患者的生存率,且毒性反应相对较轻。

如何提高化学课的学生学习能力

如何提高普通高中学生学习能力是我们一直研究的课题,倡导学生主动参与、积极探索、勤于动手的习惯,构建以师生双向互动、探究创新为主的教学模式。

紫杉醇对人鼻咽癌细胞体外自噬的影响

目的探讨紫杉醇对人鼻咽癌细胞体外自噬的影响。方法体外培养人鼻咽癌细胞系CNE2,采用MTT法检测紫杉醇对人鼻咽癌细胞系CEN2的增殖抑制,分析紫杉醇对CEN2细胞凋亡的影响;观察并分析药物作用后鼻咽癌细胞周期变化及紫杉醇对CNE2细胞的放射增敏作用。结果加药12 h后,存活细胞比例明显低于对照组(P <0.05);加药48 h后,存活细胞比例明显低于其他组(P <0.05);加药24 h后,早期凋亡细胞比例最高,明显高于其他组(P <0.05);加药48 h后,细胞坏死和晚期凋亡细胞比例最高,明显高于其他组(P <0.05)。在整个细胞周期中,空白对照组G_0/G_1周期占比最高,同时明显高于其他组(P <0.05);单纯紫杉醇组G_2/M周期占比最高,同时明显高于其他组(P <0.05);单纯放疗组G_0/G_1、G_2/M和S周期的占比比较,差异无统计学意义(P>0.05);紫杉醇+放疗组G_2/M周期占比例最高(P <0.05)。其中紫杉醇+放疗组的细胞凋亡率明显高于其他组(P <0.05)。结论紫杉醇对人鼻咽癌CNE2细胞有明显的毒性作用,能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的分裂,可一定程度上治疗鼻咽癌。随着紫杉醇浓度的增加,其对CNE2细胞的凋亡作用越强。紫杉醇联合放疗治疗可进一步提高CNE2细胞的凋亡率。

神经网络预测金属晶体结合能的研究

由于金属材料的研究具有周期性的特点,其开发过程不可能是一蹴而就的。传统的预测金属晶体结合能往往是通过电子理论、能带理论和前人的经验方法进行的,这些方法手段很难将金属晶体所有的非线性因素综合起来,所以金属整体的晶体结合能研究取得成功的可能性便大大降低。为此提出基于神经网络预测法进行金属晶体结合能研究的方法。分析研究表明,神经网络预测法能弥补传统预测算法的不足,能够有效地避免温度、环境等影响因素,改善预测精度。神经网络预测也就有希望成为研究金属晶体结合能和元素化合物关系的重要理论方法。并且,希望通过相关理论的研究可以指导实际的结合能试验活动。

EB病毒核抗原1对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究EB病毒核抗原1（Epstein—Barr virus nuclear antigen1，EBNAI）对人鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响。方法构建特异性的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）EBNA1慢病毒干扰载体，包装慢病毒后感染过表达EBNA1的鼻咽癌细胞C666－EBNA1（简写为CE）。应用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）和细胞计数法检测细胞增殖状态，流式细胞术、荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测细胞周期及相关调控因子变化。结果成功构建含shRNA EBNA1的重组慢病毒，其感染可显著下调CE细胞中EBNA1表达。细胞计数和MTF均证明CE—shRNA细胞的增殖能力较CE-对照组显著下降（P值均〈0．05）。细胞周期提示干扰EBNAl后cE细胞G0．G1期比例由（62．43±6．62）％升高到（89．66±0．64）％，两者比较差异有统计学意义（t=-7．091，P=0．002），S期比例由（34．93±7．36）％下降为（7．824-2．44）％，两者比较差异有统计学意义（t=6．095，P=0．004），G2-M期无明显变化（t=0．090，P=0．933）。抑制EBNA1后，c—myc、CDK4、CDK6、pRb的mRNA水平分别下调65．60％、34．06％、41．05％、55．29％。蛋白免疫印迹法证实抑制EBNA1后4种蛋白的表达亦下凋。结论沉默EBNA1基因可抑制鼻咽癌细胞增殖，其机制之一可能是通过影响c—myc、CDK4、CDK6、pRb等基因的表达使鼻咽癌细胞阻滞于G0-G1期。

EZH2对鼻咽癌细胞增殖和侵袭影响的研究

目的探讨果蝇zeste基因增强子人类同源物（enhancer of zeste homolog2，EZH2）对鼻咽癌细胞增殖及侵袭能力的影响及其分子机制。方法构建特异性的短发夹状（short hairpin RNA，shRNA）EZH2慢病毒干扰载体，转染293FT细胞包装成慢病毒后，感染鼻咽癌细胞株5—8F。采用四甲基偶氮唑蓝法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖状态及细胞周期的改变，利用细胞划痕实验及Invasion Chamber侵袭小室测定法检测迁移和侵袭能力变化，荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测转染EZH2基因后的mRNA和蛋白表达水平改变及上皮间质转化相关标志物的变化。结果成功构建EZH2 shRNA慢病毒干扰载体，包装的慢病毒感染鼻咽癌细胞株5—8F后，EZH2的mRNA和蛋白表达水平显著下凋。四甲基偶氮唑蓝法显示，细胞接种96h后，5-8F／shEZH2组的生长速度较空载组显著下降（P〈0．001），平均（x^-±s，下同）细胞克隆形成率为（31．56±7．49）％明显小于空载组的（84．44±7．12）％，差异有统计学意义（P=0．001）；细胞周期结果表明，沉默EZH2表达的细胞增殖受抑，主要通过诱导G0／G1期阻滞，减少s期细胞的比例；基因转染沉默EZH2后，鼻咽癌细胞的运动迁移能力显著下降，5-8F／shEZH2组细胞划痕48h的相对迁移率为（0．58±0．05）明显低于空载组的（0．81±0．02），差异有统计学意义（P〈0．000）；体外侵袭能力明显降低，5-8F／shEZH2组穿膜细胞数（72．23±4．08）个，与其相对应空载组（150．95±16．27）个比较，明显减少（P〈0．000）；5-8F／shEZH2细胞的上皮标志物上皮性钙黏附蛋白（E—cadherin）、细胞角蛋白18（Keratin18）的mRNA水平分别上调1．77倍、1．58倍，间质标志物β-连环蛋白（β—catenin）、神经性钙黏附蛋白（N-cadherin）分别下调18．04％、41．18％；蛋白免疫印迹证实此四者的蛋白水平表达亦出现相同趋势。结论EZH2可显著促进鼻咽癌细胞的体外增殖和侵袭能力，其机制可能是通过诱导上皮问质转化促进鼻咽癌转移。

鼻内镜下咽鼓管球囊扩张术治疗延迟开放型咽鼓管功能障碍

目的：探讨鼻内镜下咽鼓管球囊扩张术（BET）治疗延迟开放型咽鼓管功能障碍（ETD）的疗效。方法选取2014年6月至2015年6月于本科室接受治疗的延迟开放型ETD患者21例（33耳）为研究对象，所有患者均行鼻内镜下BET。手术前后进行患耳纯音测听、鼓室导抗图、咽鼓管测压和咽鼓管功能障碍评分问卷（ETDQ？7）检查。结果所有患者均顺利完成鼻内镜下BET，其中1例男性患者（1耳）术后6个月失访。术后6个月纯音测听显示，有3耳气骨导差为10~15 dB，余耳气骨导差均＜10 dB。术后6个月鼓室导抗图检测显示，有1耳由B型转为C型，1耳由C型转为As型，余耳均恢复为A型。术前、术后7 d、术后1个月、术后6个月患者ETDQ？7评分分别为5.05±0.25、4.36±0.20、2.74±0.13、1.93±0.10。与术前比较，术后1个月和6个月患者ETDQ-7评分均显著降低（均P＜0.01）。咽鼓管测压显示，术后1个月及6个月不同压力下咽鼓管开放正常的百分率较术前均显著增加（均P＜0.01）。结论鼻内镜下BET治疗延迟开放型ETD患者短期疗效较好。

Tiam 1基因对头颈部鳞状细胞癌细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨Tiam 1基因过表达对头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)细胞增殖及迁移能力的影响。方法:采用荧光定量RT-PCR方法检测Tiam 1基因在HNSCC细胞株中的表达;利用慢病毒介导Tiam 1基因在人HNSCC细胞株UM-SCC-47中过表达,G418筛选抗性克隆,荧光定量RT-PCR和Western blot法鉴定转导效果。利用细胞计数和四甲基偶氮唑盐法检测Tiam 1对细胞增殖的影响,划痕实验检测Tiam 1对HNSCC细胞侵袭转移的影响。结果:Tiam 1基因在高转移性HNSCC细胞株M2中呈高表达,在低转移性细胞株UM-SCC-47中呈低表达。细胞计数和MTT结果显示,过表达Tiam 1后能显著促进细胞增殖(P<0.05),划痕实验证明Tiam 1可显著促进HNSCC细胞迁移(P<0.05)。结论:Tiam 1基因具有促进HNSCC细胞增殖与迁移的能力,Tiam 1基因表达可作为HNSCC侵袭转移过程中一个有价值的指标。