奢侈品的酒店业品牌延伸及其对母品牌的反馈

依附成熟品牌开发新产品可减少失败的风险并带来可观的收益。但如若品牌延伸失败,则不仅无法为延伸产品带来附加价值,而且可能伤害母品牌形象及品牌资产。奢侈品牌已开始将其触角延伸至酒店业,为避免决策失误,有必要对奢侈品在酒店业品牌延伸中的消费者评价进行研究。该研究采用实验研究法,依据2个自变量:高/低品牌概念一致性场景和母品牌拥有者/非拥有者将消费者分为4组实验组和2组对照组,通过对参与实验的对象进行问卷调查,研究和分析不同组间消费者对延伸产品评价及延伸后对母品牌态度评价的评分差异。研究结果显示,母品牌拥有者中,消费者对此2个维度的评价均在高品牌概念一致性场景下高于低品牌概念一致性场景;而在非母品牌拥有者中则相反。

体验经济下旅游社发展战略研究

随着体验经济时代的带来,人们的旅游需求发生了翻天覆地的变化.这些变化对于旅行社行业而言,既是机遇,也是挑战.在体验经济的背景之下,旅行社行业应当做出怎样的战略选择呢？本文将就该问题进行深入探讨,提出针对性的建议,以期为旅行社行业的深入发展提供借鉴.

呼吸道合胞病毒血清中和抗体检测方法的建立

目的 建立荧光检测法测定呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)血清中和抗体的检测方法,并对其进行验证和初步应用。方法 采用反向遗传学拯救的表达绿色荧光蛋白的重组呼吸道合胞病毒(recombinant RSV experssed the enhanced green fluorescent protein, RSV-EGFP)进行RSV重组腺病毒疫苗免疫后血清的检测。通过对RSV-EGFP在人喉癌上皮(human epithelioma-2,HEp-2)细胞上荧光的检测波长、检测时间、病毒的感染剂量和HEp-2的细胞密度进行优化,确定合适的条件后,再将RSV血清倍比系列稀释后与RSV-EGFP混合接种至HEp-2细胞培养,利用多功能酶标仪检测HEp-2细胞中表达的绿色荧光蛋白的荧光强度,从而计算其中和抗体滴度。同时,通过对RSV重组腺病毒载体疫苗免疫棉鼠血清的检测进一步评估中和抗体检测方法的精密度、重复性、准确度以及边缘孔效应。结果 结果显示,当检测的激发波长为479 nm,发射波长为517 nm,检测时间为病毒感染后48 h,最佳病毒感染剂量为3 000 pfu/孔,检测的最佳细胞密度为2.0×10~4个/孔时,相对荧光强度最高,且病毒数量与荧光强度之间呈现出较好的剂量-效应关系。采用该方法检测不同抗体滴度的血清样本,日内与日间精密度的CV均<15%;同一血清样本10次重复性检测结果最大值与最小值的比值均≤4,且RSD均<15%;用建立的方法实际测得的中和滴度结果与稀释后理论中和滴度(酶联免疫斑点法)的回收率均在80%~120%之间;在边缘孔与非边缘孔检测RSV血清中和抗体滴度结果一致性较好(P>0.05)。结论 建立的荧光检测法较酶联免疫斑点法操作简便、快捷,可被用来检测RSV血清中和抗体效价。

人呼吸道合胞病毒感染不同细胞基因的差异表达分析

目的 采用生物信息学方法,筛选人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)感染人喉表皮样癌细胞(human larynx epidermoid carcinoma cells,HEp-2)与人肺(支气管)上皮细胞(human normal lung epithelial cell,BEAS-2B)后均具有表达差异的基因,为了解宿主与RSV之间的相互作用提供线索。方法 从基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中下载RSV感染HEp-2与BEAS-2B细胞的转录组数据,运用R软件进行转录组数据差异表达分析,筛选差异表达基因。利用DAVID数据库对差异表达基因进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,采用STRING数据库网站构建蛋白共作网络(Protein-Protein Interaction Network Analysis,PPI),并运用Cytoscape软件中的CytoHubba插件寻找差异表达基因中的关键基因。最后,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)对RSV感染HEp-2与BEAS-2B细胞后均差异表达的基因进行验证。结果 筛选出135个RSV感染HEp-2与BEAS-2B细胞后均差异表达的基因,其中有132个上调基因,3个下调基因。这些基因主要富集在炎症反应和肿瘤坏死因子信号通路。CytoHubba评分确定2个关键基因CTGF和IL-11,qRT-PCR结果显示,2种细胞被RSV感染后,CTGF与IL-11基因表达水平均显著增强。结论 本研究通过对基因转录组数据的分析以及实验验证,发现CTGF和IL-11基因在RSV感染的HEp-2与BEAS-2B细胞中均表达显著增强,与转录组数据差异表达分析结果一致,提示2个基因参与了RSV感染过程,CTGF和IL-11是影响RSV复制的宿主基因,该发现有助于找到防治RSV的新靶点,为RSV防治策略提供新思路。

利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体

目的:建立一种基于DNA Assembly方法的重组腺病毒载体构建方法。方法:首先,通过设计合适的酶切位点及同源臂,采用了传统的限制性内切核酸酶连接方法和DNA Assembly方法获得63型猩猩腺病毒(Chimpanzee adenovirus serotype 63,ChAd63)的骨架质粒pChAd63。随后,采用Sca I单酶切携带EGFP基因的穿梭pShuttle63/EGFP,Hpa I单酶切pChAd63,以DNA Assembly方法,获得重组腺病毒载体pChAd63/EGFP。最后,在293细胞中拯救获得重组腺病毒rChAd63/EGFP。结果:采用DNA Assembly方法成功构建了重组腺病毒载体pChAd63/EGFP,并拯救出重组腺病毒rChAd63/EGFP。结论:DNA Assembly可用于重组腺病毒载体的构建,有利于提高重组腺病毒载体的构建效率。