以旋毛虫成虫的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增获得旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI)基因。经克隆鉴定正确后,将TsAdSPI基因连接到pET-28a表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,并将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔...以旋毛虫成虫的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增获得旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI)基因。经克隆鉴定正确后,将TsAdSPI基因连接到pET-28a表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,并将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。应用Western-blot及ELISA方法对重组蛋白的免疫原性和抗体效价进行分析。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量为44 k Da,以包涵体形式表达。经Western-blot和ELISA方法分析,制备的多克隆抗体效价可高达1∶51200,表明该蛋白具有较好免疫原性。表明TsAdSPI蛋白可作为旋毛虫感染早期血清学诊断方法的候选抗原,为新型的抗旋毛虫及相关寄生虫药物研发打下结实基础。展开更多
文摘以旋毛虫成虫的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增获得旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI)基因。经克隆鉴定正确后,将TsAdSPI基因连接到pET-28a表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,并将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。应用Western-blot及ELISA方法对重组蛋白的免疫原性和抗体效价进行分析。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量为44 k Da,以包涵体形式表达。经Western-blot和ELISA方法分析,制备的多克隆抗体效价可高达1∶51200,表明该蛋白具有较好免疫原性。表明TsAdSPI蛋白可作为旋毛虫感染早期血清学诊断方法的候选抗原,为新型的抗旋毛虫及相关寄生虫药物研发打下结实基础。