PGC-1α激动剂ZLN005减轻蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子-1α(peroxisome proliferator activating receptor coactivator-1α,PGC-1α)激动剂2-(4-叔丁基苯基)苯并咪唑(2-(4-tert-butylphenyl)benzimidazole,ZLN005)对蛋氨酸胆碱缺乏饮食(cholinemethioninedeficientdiet,MCD)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的作用及机制。方法用MCD饲料喂养小鼠构建NASH模型,给小鼠每日口服15 mg/mL的ZLN005,8周后检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,对小鼠肝组织进行HE和油红O染色,丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性分析,RT-PCR检测肝组织白介素-1β(leucoides-1β)mRNA和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)mRNA的表达,Western blot检测小鼠肝组织内PGC-1α、血红素氧合酶1(heme oxygenase,HO-1)的蛋白表达。结果ZLN005处理,显著降低了血清ALT、AST水平,减轻了MCD诱导的NASH小鼠肝损伤、脂肪变性;减少了小鼠肝组织炎性细胞浸润;同时,ZLN005降低了IL-1β和TNF-α的mRNA水平;降低了肝脏MDA的含量,提高了SOD活性;上调了PGC-1α/HO-1的表达。结论ZLN005可缓解MCD诱导的NASH,其机制可能与激活PGC-1α/HO-1通路,发挥抗氧化应激和抗炎作用有关。

川芎嗪对脂多糖诱导巨噬细胞环氧化酶-2表达和心肌细胞凋亡的影响

目的观察川芎嗪对脂多糖 (LPS)诱导RAW 2 64 7小鼠巨噬细胞环氧化酶 2 (COX 2 )基因表达和活性的影响 ,进一步研究川芎嗪对脂多糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法采用RT PCR和免疫印迹检测巨噬细胞COX 2基因表达 ,酶联免疫分析其活性 ,并应用荧光显微镜技术对乳鼠心肌细胞凋亡进行检测 ,荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度。结果 1 0 - 6mol/L ,1 0 - 5mol/L和 1 0 - 4mol/L川芎嗪可显著减少LPS刺激的巨噬细胞COX 2mRNA和蛋白的表达 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 ) ,但不同浓度川芎嗪对COX 2活性无明显作用 ;1 0 - 5mol/L川芎嗪可显著降低心肌细胞内钙浓度 ,拮抗LPS诱导的乳鼠心肌细胞凋亡 (P <0 0 5 )。结论川芎嗪具有抑制LPS诱导巨噬细胞COX 2表达和乳鼠心肌细胞凋亡的药理学效应。

人结肠癌组织环加氧酶-2 mRNA剪接异构体片段分离与克隆

目的 探讨人结肠癌组织中是否存在环加氧酶 2 (COX 2 )选择性剪接异构体的表达及其可能意义。方法针对人COX 2DNA第 7、 8外显子序列 ,设计一对全新引物 ,并采用RT PCR技术 ,从结肠癌组织中分离COX 2mRNA ,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析。结果 正常结肠组织和结肠癌组织均发现COX 2目的条带 ( 2 5 2bp) ,但结肠癌组织则出现了一条新的电泳带 ( 5 34bp) ,经克隆和测序证实 ,该条带除目的条带的COX 2DNA的第7、 8外显子序列外 ,还包含第 7、 8外显子间的内含子序列 ,即保留的内含子 ( 2 82bp)。根据阅读框推测 ,在保留的内含子第 4 8～ 5 0碱基出现终止密码。结论 首次发现结肠癌组织中存在COX 2基因的选择性剪接异构体 (Genbankaccessionnumber:BU4 936 0 2 ,AY15 12 980 ) ,其所编码蛋白可能较已报道的COX 2酶蛋白小 ,且蛋白质的C末端缺少阿斯匹林作用位点。

大鼠巨噬细胞环加氧酶-2剪接异构体MRNA片段的分离和鉴定

目的:分离和鉴定大鼠巨噬细胞环加氧酶-2剪接异构体MRNA片段,并分析其可能意义。方法: 采用RT-PCR和测序分析从大鼠巨噬细胞扩增、分离环加氧酶-2剪接异构体CDNA片段,并推导环加氧酶-2剪接异构体氨基酸序列,利用生物信息软件对氨基酸序列进行分析。结果:大鼠肺和血管平滑肌组织及腹腔巨噬细胞均发现COX-2目的条带(253 BP),但腹腔巨噬细胞则出现了一条新的电泳带(422 BP),经克隆和测序证实,该条带除目的条带的COX-2 DNA的第7、8外显子序列外,还包含第7、8外显子间的内含子序列,即保留的内含子(169 BP)。根据阅读框推测,在保留的内含子第21-23碱基出现终止密码。结论:首次发现大鼠腹腔巨噬细胞中存在 COX-2基因的选择性剪接异构体(GENBANK ACCESSION NUMBER:BU500100),其生物学意义有待进一步研究。

基础医学教学与医学启蒙教育

在中国现行高考制度下进入医学院校的学生有很好的基础知识,强烈的求知欲望,也有巨大的学习潜力,但大学一年级的医学生仍如同刚入学的小学生一样,未来5、6年,甚或7年的学习内容和学习方式对他们来说是陌生的。医学院校的教学方式、学科特点和中学有极大不同,这使部分学生在进入专业课的学习时不能很快适应,

羟基积雪草苷对LPS诱导小胶质细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的:研究羟基积雪草苷对LPS刺激的小胶质细胞增殖的抑制作用及机制。方法:取SD大鼠的新生小鼠,进行小胶质细胞的原代培养,分离纯化小胶质细胞;MTT法筛选LPS刺激小胶质细胞增殖的最佳浓度,观察不同浓度羟基积雪草苷对LPS刺激小胶质细胞后的作用。ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Western blotting法检测Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达。结果:LPS可以明显诱导体外培养小胶质细胞的增殖和炎症因子释放。与LPS组比较,羟基积雪草苷对LPS诱导的小胶质细胞增殖具有显著抑制作用,且具有剂量依赖性,羟基积雪草苷处理小胶质细胞48 h的IC50为10.97 nmol/L。同时羟基积雪草苷使小胶质细胞TNF-α和IL-6的释放显著降低(P<0.05);羟基积雪草苷使小胶质细胞的G2期细胞与细胞凋亡率增加,并降低小胶质细胞TLR4和NF-κB的表达。结论:羟基积雪草苷对LPS刺激的小胶质细胞的增殖和炎症因子的生成具有抑制作用,其作用机制可能与抑制TLR-4和NF-κB表达、改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。

粉防己碱对LPS诱导的大鼠发热模型的解热作用

目的:研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)对脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠发热模型的解热作用及其机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、LPS模型组、对乙酰氨基酚对照组及粉防己碱5,15,45mg/kg组。用LPS100μg/kg腹腔注射建立大鼠发热模型,药物处理后每30min测体温一次,连续监测6h,观察大鼠的体温变化;运用Western-blot检测脑组织中环加氧酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,并用EIA法检测其前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)的含量;髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)试剂盒检测肝组织MPO水平。结果:粉防己碱能有效抑制LPS诱导的大鼠发热反应,显著降低脑组织中COX-2和PGE2的表达,抑制肝脏MPO水平。结论:粉防己碱具有显著的解热作用,其作用机制可能与抑制脑组织中COX-2和PGE2的表达,降低肝组织中MPO含量有关。

积雪草苷对脂多糖诱导大鼠发热的预防及对相关炎症因子的影响

目的探索积雪草苷的解热作用。方法雄性SD大鼠56只,随机平均分为正常组、模型组、溶媒对照组、对乙酰氨基酚组和积雪草苷3个剂量组。除正常组外,每只大鼠ip细菌脂多糖(LPS)100μg.kg-1制备大鼠发热模型,连续6h监测大鼠体温变化,6h后取血、肝脏和脑组织标本。积雪草苷3个剂量组造模前连续3dig积雪草苷(5,15和45mg.kg-1),每日1次;正常组和模型组给予等量生理盐水;溶媒对照组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠;对乙酰氨基酚组于造模前30min一次性给予对乙酰氨基酚(50mg.kg-1,ip)。肝组织髓过氧化物酶(MPO)活性采用MPO试剂盒检测,肝脏组织血红素氧化酶1(HO-1)和脑组织环氧合酶2(COX-2)蛋白表达采用Western印迹方法测定,血浆前列腺素E2(PGE2)含量用酶联免疫法检测,HO-1活性用Morita法检测。结果注射LPS后,模型组出现3相热,最高升温幅度为2.01℃。积雪草苷5,15和45mg.kg-1组体温明显低于模型组,其中45mg.kg-1组与对乙酰氨基酚组相当。与模型组比较,3个积雪草苷剂量组发热后6h肝组织MPO活性、脑组织COX-2蛋白表达和血浆中PGE2的产生明显降低,肝组织HO-1活性和蛋白表达升高。结论积雪草苷具有预防发热作用,该作用可能与抑制COX-2/PGE2系统,并抑制炎症因子MPO活性、增强炎症保护因子HO-1的活性和表达有关。

虎杖苷对小鼠脓毒症模型ALT、AST、TNF-α及COX-2的影响

目的研究虎杖苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)小鼠脓毒症模型,并设假手术对照组。在CLP手术前1h,采用不同剂量虎杖苷(50、100、300mg/kg)干预,随后每6h观察小鼠一般情况,24h后处死存活小鼠,收集血清和肝组织样本。分别采用比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;采用酶联免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)含量;采用免疫印迹法检测肝组织环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达;并取部分肝组织进行病理组织学分析。结果 CLP后24h,小鼠死亡率高达50%,生化指标和肝脏病理显示病变明显,模型成功率达90%,相对于假手术组,血清ALT、AST活性、TNF-α水平和肝组织中COX-2蛋白表达显著升高(P<0.01);虎杖苷呈剂量依赖地改善脓毒症诱导的死亡率,抑制ALT、AST活性和TNF-α升高(P<0.05),降低肝组织中COX-2表达,减轻肝脏病理损伤。结论虎杖苷有效地保护脓毒症诱导的急性肝损伤,其作用机制可能通过抑制TNF-α生成和COX-2的表达。

积雪草苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响

目的观察积雪草苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的保护效应。方法56只Balb/c小鼠随机分为对照、假手术、模型、溶媒、积雪草苷(5、15、45 mg/kg)7组,每组8只。LPS(2.5 mg/kg)气管滴注造ALI模型,24 h后HE染色观察小鼠肺组织病理改变,计算肺湿质量/干质量值;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)后行白细胞计数和分类,BCA法检测其蛋白的量;化学法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性减轻LPS所致ALI模型肺组织病变情况,减轻肺水肿,减轻中性粒细胞的浸润,抑制蛋白渗出。抑制肺组织中MPO活性。结论积雪草苷对LPS诱导ALI有保护效应。

羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用及其初步机制。方法建立四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤模型,检测羟基积雪草苷(3、10、30 mg/kg)对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及肝组织一氧化氮(NO)的影响;Western-blotting检测肝组织中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达,并取部分肝组织进行HE染色,观察病理学改变。结果羟基积雪草苷明显降低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性及肝组织中NO的量,抑制肝组织中iNOS、COX-2蛋白的表达,病理切片显示羟基积雪草苷组病变程度远较模型组为轻。结论羟基积雪草苷具有一定的肝保护作用,其机制可能与其抗炎作用有关。

积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用

研究积雪草苷(asiaticoside)对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)的作用,并初步探讨其作用机制。建立CIA模型,检测小鼠足爪炎症的肿胀度,石蜡切片HE染色对关节组织进行病理检查,MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应,Western blotting法检测关节软组织中环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白的表达,EIA法测定关节软组织中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平,ELISA法检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6的水平。积雪草苷(10,20及40mg.kg-1)灌胃给药能剂量依赖性地减轻CIA小鼠的关节炎症状,抑制CIA小鼠CII胶原诱导的淋巴细胞增殖反应,减少CIA小鼠踝关节软组织中高水平的COX-2表达及PGE2含量,降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平;同时病理检查发现,可以改善局部关节炎症状,抑制CIA小鼠滑膜细胞增生,减轻炎性细胞浸润。结果表明,积雪草苷对CIA具有抑制作用,其机制可能与抑制淋巴细胞增殖、减少COX-2表达及促进炎症因子TNF-α、IL-6释放等有关。

肾上腺素对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞炎症介质表达的影响

目的 研究肾上腺素对脂多糖 (LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW 2 6 4 7中肿瘤坏死因子 (TNF α)、一氧化氮 (NO)、环加氧酶 2 (COX 2 )等表达的影响。方法 以 10ng/ml的LPS刺激体外培养的RAW 2 6 4 7细胞作为炎症模型 ,加入不同浓度的肾上腺素 (1× 10 -6,5× 10 -6,1× 10 -5,5× 10 -5mol/L)孵育 2 4h后 ,收集培养上清并提取细胞总蛋白 ,酶联免疫法测定上清中TNF α浓度 ,Griess法检测上清NO含量 ,免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX 2的表达量。结果 10ng/ml的LPS明显诱导TNF α、NO、COX 2的产生 ,这一效应可被肾上腺素抑制 ;而单独加入肾上腺素时 ,对上述 3种炎症介质的表达无明显影响。结论 肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中炎症因子的表达 ,可能对炎症的发生发展起到一定的调节作用。

羟基积雪草苷与积雪草苷对LPS诱导大鼠发热模型的影响

目的观察积雪草苷和羟基积雪草苷的解热作用,并比较两者在解热作用上的差异。方法将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组(LPS 100μg/kg)、溶酶对照组(羧甲基纤维素钠)、积雪草苷5,15,45 mg/kg、羟基积雪草苷10,20,40mg/kg、对乙酰氨基酚50 mg/kg组。腹腔注射LPS(100μg/kg)建立SD大鼠发热模型,绘制各组平均体温变化曲线,比较测量体温与基础体温差值ΔT。结果羟基积雪草苷(10,20,40 mg/kg)与积雪草苷(5,15,45 mg/kg)对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温有显著的降温作用(P<0.05)。结论羟基积雪草苷和积雪草苷对LPS诱导的SD大鼠发热模型的体温均有降温作用,积雪草苷在某些时间点(如LPS注射5 h后)降温效应优于羟基积雪草苷。

积雪草苷对小鼠脂多糖致痛觉增敏及对MPO、NO和TNF-α影响研究

目的观察积雪草苷(aisaticoside,AS)对小鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导痛觉增敏型疼痛的影响,并探讨AS对髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)和α-肿瘤坏死因子(α-tumour necrosis factor,TNF-α)的影响。方法随机将小鼠分为空白组、模型组、盐酸哌替啶组、AS5,15,45mg.kg-16组,通过腹腔注射LPS100μg.kg-1建立痛阈增敏型疼痛模型,采用醋酸扭体法、热板法观察AS的镇痛效应;通过相关试剂盒检测小鼠脑组织MPO和NO,ELISA法检测血浆TNF-α含量的变化。结果AS5,15,45mg.kg-1各组明显减少醋酸扭体次数,提高小鼠痛阈。降低脑组织MPO活性、NO含量和血浆TNF-α含量。结论AS具有明显镇痛效应,其镇痛效应可能与降低MPO、NO和TNF-α有关。

抗炎中药的药理机制与其促炎症缓解作用的关系研究

目的:基于新的炎症消退学说,结合传统抗炎中药清热疏导的理论,将其抗炎药理学机制与促进炎症缓解过程相结合,着重观察了几种抗炎中药对几种重要炎症缓解因子及细胞凋亡的关系.

积雪草苷对LPS诱导小鼠急性肺损伤炎症因子平衡的影响

目的:观察积雪草苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-6、TNF-α、IL-10的影响。方法:56只Balb/c小鼠随机分为空白、模型、假手术、溶媒、积雪草苷5,15,45mg/kg剂量组。LPS(2.5mg/kg)气管滴注造急性肺损伤模型,24h后处死小鼠,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆IL-6、TNF-α、IL-10表达。结果:积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性降低LPS所致急性肺损伤模型BALF中IL-6、TNF-α含量,增加IL-10表达。结论:积雪草苷对LPS诱导急性肺损伤保护作用可能与抑制炎症因子IL-6、TNF-α和促进IL-10,维持炎症因子间平衡有关。

脂氧素与炎症消退

脂氧素是继前列腺素和白三烯后被证实的又一重要的花生四烯酸代谢产物 ,新近研究发现脂氧素对多种炎性细胞的功能和多种炎症相关基因的表达有广泛的调节作用 ,能促进炎症反应的及时消退 ,被认为是机体内一类重要的内源性脂质抗炎介质 ,因而在炎症 。

青心酮对活化RAW264.7细胞株血红素氧合酶-1mRNA/一氧化碳及TNF-α表达的影响

目的观察青心酮对活化 RAW264.7细胞株血红素氧合酶-1mRNA/一氧化碳(Hemeoxygenase-1/carbon monoxide,HO-1mRNA/CO)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法用 LPS 做刺激剂,建立活化细胞模型。分别用 RT-PCR 法检测 HO-1mRNA 的表达,血红蛋白结合法检测 CO 的相对含量,Western-blot 方法检测 TNF-α蛋白质的表达。结果 10^(-5)mol/L 青心酮使活化巨噬细胞 HO-1mRNA 表达增加,CO 增加,TNF-α蛋白表达下降。结论青心酮上调活化 RAW264.7细胞株 HO-1mRNA/CO 的表达,抑制 TNF-α蛋白的产生,这可能是 DHAP 抗炎作用机制之一。

退黄合剂对ANIT致胆汁淤积性肝损伤的保护作用及机制研究

目的观察退黄合剂对异硫氰酸-1-萘酯(ANIT)诱导的胆汁淤积性肝损伤的保护作用。方法 SD大鼠随机分成5组,即空白对照组,ANIT模型组,退黄合剂低、中、高剂量组,大鼠在ANIT处理48 h后被处死,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性及总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)含量;肝组织做组织切片HE染色;分析肝组织中SOD和MPO活性;酶联免疫法分析肝组织中巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2生成;免疫印迹法检测细胞间黏附分子(ICAM)-1表达。结果与空白对照组相比,模型组ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL、MPO和MIP-2显著增高(P<0.01),肝脏病理病变明显,肝组织ICAM-1表达上调;与模型组相比,退黄合剂呈剂量依赖地降低ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL、MPO和MIP-2,减轻肝脏病变,下调ICAM-1的表达(P<0.05或P<0.01)。结论退黄合剂能保护ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤,其作用机制可能与抑制MIP-2和ICAM-1,减少中性粒细胞浸润,减轻炎症性肝脏损伤有关。