传染性法氏囊病病毒VP2/4/3-ChIL-2融合基因DNA疫苗免疫原性研究

应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2和pCI-IL-2-VP2/4/3。将其制备成DNA疫苗,肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫,定期测定鸡抗IBDV血清ELISA抗体效价及病毒中和抗体效价。加强免疫后3周用IBDV标准强毒株攻击,连续观察3天后全部扑杀,计算保护率及囊体比,并进行组织病理学检查。结果表明:1)融合基因重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3免疫后能明显增强IBDVDNA疫苗对强毒的攻击保护(保护率分别为83.3%、91.6%),显著高于pCI-VP2/4/3单独免疫对照组(58.3%);2)诱导产生的抗IBDV血清ELISA抗体效价明显增高(P<0.05),同时能提高DNA疫苗诱导产生的中和抗体效价(P<0.05);3)能显著促进鸡外周血液T淋巴细胞增殖反应。上述结果提示:IBDV VP2/4/3与ChIL-2基因融合后发挥了相互协同作用,ChIL-2产生了分子免疫佐剂效应;融合基因DNA疫苗能增强IBDV DNA疫苗的免疫原性,促进了机体特异性免疫应答。

IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础.

鸡白细胞介素2在毕赤酵母细胞中的表达

目的 利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法 将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115感受态细胞 ,甲醇诱导蛋白质表达。结果 SDS PAGE和Westernblot均在 30ku处检测到特异条带。结论 表明重组鸡IL

鸡白细胞介素2口服免疫佐剂增强传染性法氏囊病病毒DNA疫苗免疫效果的研究

将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为载体的鸡白细胞介素2口服免疫增强剂具有相对的安全性.重组ZJ111/pCI-IL-2菌能明显增强IBDV DNA疫苗对强毒株攻击保护率;增强IBDV DNA疫苗诱导的抗体的效价(P<0.05);增强IBDV DNA疫苗所诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).上述结果初步表明以减毒沙门氏菌为载体的白细胞介素2免疫增强剂具有良好的安全性和免疫增强作用,为研制低成本、实用化的禽类口服免疫增强剂奠定了基础.

鸡白细胞介素18全长基因的克隆、表达及分子进化分析

根据鸡白细胞介素18(IL-18)cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因(Genbank accession,AY628648)。扩增片段全长591 bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98.99%,只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在E.coli中得到表达,获得45 kD的GST-IL-18融合蛋白,经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析,为深入研究其功能奠定了基础。

OMgp LRR181-228:OMgp神经突起生长抑制功能的主要结构域

OMgp(oligodendrocyte-myelinglycoprotein)可以通过与MAG、nogo-66等神经再生抑制因子竞争结合同一受体NgR而诱使生长锥溃变和抑制神经突起的生长。以前的研究表明,在OMgp与NgR结合抑制神经突起生长的过程中,OMgp的亮氨酸富含重复序列(LRR)是必需的。为进一步了解OMgpLRR在神经突起生长中的作用及其结构与功能之间的关系,采用PCR-定点突变法对OMgpLRR结构域分段删除,表达了删除不同基因片段后的OMgpLRR蛋白,通过对表达有NgR的CHO细胞(NgR-CHO)的黏附实验和对原代培养神经细胞的抑制实验对其功能进行了研究。结果显示,分别删除了OMgp25-56、57-133、134-180位氨基酸的OMgpLRR蛋白仍具有结合NgR-CHO和抑制原代培养的神经元突起生长的作用;而删除了第181-228位氨基酸的OMgpLRR蛋白则失去了对原代培养神经元的生长抑制作用,但仍然具有结合NgR的能力。表明OMgp181-228在OMgp的功能中具有重要的意义。删除了第181-228位氨基酸的OMgpLRR蛋白可望作为OMgp的竞争性抑制剂,用于中枢神经系统损伤后神经再生的治疗。

羽毛绒种类鉴定及气味检测方法研究

羽绒种类纯正与否以及有无异味是影响羽绒品质的2个重要因素。为了准确、快速地鉴定羽绒种类,利用近红外光谱技术建立了一种无损快速鉴别羽绒种类的模型。同时,结合GC-MS技术鉴定分析了不同羽绒浸出物中特征气味成分。近红外光谱显示,4种羽绒的反射率在12 000～4 000 cm-1之间的变化趋势较相近,且特征波段的出峰位置大体相同,表明近红外光谱法是一种快速、高效并可用于羽绒种类鉴别的方法。另外,GC-MS检测结果显示,羧酸类化合物和内酯类化合物为羽绒浸出物中的主要成分,为进一步分析和鉴定羽绒中气味成分提供了理论依据。

基于可见/近红外光谱的鹅鸭混合绒定量检测研究

鹅绒和鸭绒的外观相似但在品质上鹅绒优于鸭绒,各国羽绒毛标准对鹅绒毛中的鸭绒毛含量都有最高限定。传统检测方法为高倍显微镜目测法,该方法劳动强度大,且不适宜大批量样本的分析及现场快速检测。利用可见/近红外光谱结合连续投影算法(SPA)特征波长选择的建模方法对鹅绒中混有鸭绒含量进行了定量检测。在450～930nm范围内,通过SPA选择的8个特征波长建立多元线性回归模型,取得了较好的预测结果,相关系数为0.983,校正均方根误差(RMSEC)为5.44%,预测均方根误差(RMSEP)为5.75%,有望用于羽绒毛品质的快速检测。

基于气敏传感器的羽绒气味鉴别方法

为快速、准确地鉴别羽绒异味,利用GC-MS气质联用的方法对羽绒中可能存在的气味成分进行鉴定,然后选择VOC气体检测仪对不同羽绒进行检测,并与传统的人工测试方法进行比较,检测示值与人工判定具有明显的关联性.结果表明,羧酸类化合物和内酯类化合物是羽绒气味的主要成分,为进一步研究羽绒气味成分并选择合适的气敏传感器提供参考.

纺织品抗菌性能的改良振荡法测定

纺织品抗菌性能定量测试方法中,振荡法有许多优良的特性是吸收法不能比拟的。但是,目前的振荡测试方法中或多或少还存在一些缺陷,以致不能被广为采用。改良振荡法则结合了FZ/T 73023振荡法和AATCC 100吸收法两种测试方法的优点,改进试验条件,使操作简便易行,并能扩大测试应用范围,更好地应用于纺织品的抗菌性能测试。该方法与AATCC 100吸收法的抑菌率测试比较结果表明,两种方法在统计学上没有显著性差异,可替代吸收法。

基于NIR与GC-MS技术的羽毛绒品质属性鉴定

羽绒种类纯正与否以及有无异味是影响羽绒品质好坏的两个重要因素。为了准确、快速地鉴定羽绒种类,本研究利用近红外光谱技术建立了一种无损快速鉴别羽绒种类的模型。同时,结合GC-MS技术鉴定分析了不同羽绒浸出物中特征气味成分。结果表明,近红外光谱显示4种羽绒种类的反射率在4000～12000 cm-1的变化趋势比较相近,且特征波段的出峰位置大体相同。经二阶导数结合矢量归一化法建立的模型,三维得分图显示可区分4种羽绒种类,其准确性、专属性均良好,提示近红外光谱法是一种快速、高效并可用于羽绒种类鉴别的方法。另外,GC-MS检测结果显示羧酸类化合物和内酯类化合物为羽绒浸出物中的主要成分,为进一步分析和鉴定羽绒中气味成分提供了理论依据。

我国出口羽绒及其制品微生物检测现状分析及对策

我国是世界上最大的羽绒及其制品生产国和出口国,羽绒及其制品产量占世界市场近70%的份额,贸易额占世界总贸易额的40%左右。近年来,随着公共卫生领域各种人畜共患病的出现以及消费者对产品质量要求的不断提高,更加关注涉及卫生安全的检测项目。

危险货物包装检测关键点分析与质量控制

目的控制危险货物包装检测关键点来保证性能检验质量。方法根据危险货物包装种类并结合其性能检验过程中的难点,逐一对其6项常规性能测试指标进行分析。结果归纳和提炼了危险货物包装检测的关键点并在实际检测工作中加以应用。结论对于危险货物包装检验鉴定机构以及生产企业做好产品质量检验具有较强的现实指导意义。

基于定量化学分析的羽绒与聚酯纤维分离方法

研究羽毛绒与聚酯纤维的定量化学分析方法.根据羽毛绒与聚酯纤维化学性质的差异及特点,分别采用3种不同化学试剂对不同批次羽毛绒、聚酯纤维及其混合物进行处理,并对其反应条件进行优化.实验结果表明,NaOH法能有效分离羽毛绒与聚酯纤维,而对聚酯纤维的损伤在标准容许范围内.并分析了NaOH法的重量修正系数d值,经验证该测试方法与人为混合的偏差在±1%以内,优于人工检测法±（3%～4%）的偏差,满足国内外现行检测标准与要求.不仅有利于规范羽绒市场秩序,同时对于指导羽绒企业实际生产也具有现实意义.

我国羽绒行业标准化问题探讨

本文针对我国羽绒行业标准多而杂的特最,通过对我国现行羽绒检测标准的差异性进行分析,指出了羽绒行业标准化存在的问题,并提出了相应对策。

RP-HPLC法考察邻氟硝基苯和2,4-二氟硝基苯对大鼠肝脏中药物代谢酶的影响

目的探索邻氟硝基苯和2,4-二氟硝基苯对大鼠肝脏中药物代谢酶的影响。方法建立大鼠肝微粒体中睾酮、非那西丁、氯唑沙宗和香豆素的RP-HPLC定量分析方法基础上,制备大鼠肝微粒体,检测底物浓度变化,根据Lineweaver-Burk方程计算酶反应动力学参数Km和Vm值。结果结果表明睾酮、非那西丁、氯唑沙宗和香豆素分别在0.5~100μg·mL^(-1)浓度范围内,线性关系良好(r>0.999),回收率90%以上,日内和日间RSD小于10%。酶反应动力学结果表明两种氟化物对CYP3A1、CYP2E1和CYP2A6起显著促进作用,Km值显著降低;同时对CYP2A1起显著抑制作用,Km值显著升高。结论本研究建立的RP-HPLC检测方法灵敏、准确、可靠,能够满足不同肝药酶底物定量检测和肝药酶活性评价,结果表明两种氟化物能够促进CYP3A1、CYP2E1和CYP2A6活性,抑制CYP2A1酶活性。

出口羽绒微生物状况合格控制点研究

针对我国羽绒新国家标准及欧盟羽绒检测标准中有关微生物指标的限量要求,结合国内羽绒企业实际生产情况,对经水洗加工的羽绒按不同时间与蒸汽压力组合进行烘干处理,同时检测经不同组合模式处理后羽绒微生物残存状况,以找出最佳杀菌处理模式和合格控制点。结果表明,当蒸汽压力达到0.35 MPa,烘干时间为25 min时,羽绒微生物检测合格。同时得出了一批合格控制点以上的蒸汽压力与烘干时间杀菌处理模式,能有效控制羽绒微生物超标情况的发生。

浙江出口危险货物包装产业现状及技术性贸易措施对策研究

根据浙江地区危险货物包装产业现状,在归纳和总结我国出口危险货物包装监督制度及检验标准的基础上,通过对主要目标市场技术性贸易措施进行了分析和解读,提出了相应的对策和建议,为进一步提升浙江地区危险货物包装产业发展和促进贸易便利化提供了有益的借鉴和参考。

羽绒填充量与环境相对温湿度的相关性研究

利用恒温恒湿箱,设置不同温度与相对湿度的组合,以模拟环境中各种温湿度状况,并将羽绒填充料置于该恒温恒湿箱中进行处理.通过比较分析处理前后羽绒制品的质量大小变化,得出了环境中相对温湿度的变化对羽绒填充料质量影响的规律.为羽绒在国际贸易中确立质量检测的温湿度标准提供了参考,并为我国羽绒产品的出口提供技术支撑.

危险货物包装检测分析与实践

危险货物包装种类、材质、规格不一,其性能测试要求也不一样。在不影响检测结果准确性的前提下,可用模拟物替代实际内装物质或物品进行测试。危险货物包装的性能检测主要包括跌落试验、气密试验、液压试验、堆码试验,分别对应于危险货物包装所应具备的抗冲击、密封性、耐内压和强度等性能要求。在检测时,应注意其试验要求、试验条件、合格判定准则及检测关键控制点。检测实践发现,危险货物包装检测不合格主要有:瓦楞纸箱堆码检测不合格,塑料桶液压测试不合格,钢塑复合桶液压测试不合格,钢桶跌落测试及液压测试不合格,纸板桶跌落测试不合格等。未来包装检测应朝着标准化、规范化和科学化方向发展,尽量减少人为因素的影响。