慢病毒介导干扰LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定

目的构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的卵巢癌稳转细胞株,为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒,紫外分光光度计检测质粒纯度,计算A260/A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T,取转染THM质粒后的293T细胞,在倒置荧光显微镜下观察转染情况;分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞,收集病毒上清液,感染人卵巢癌SKOV3细胞(分别记为观察组和对照组),筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度(0、1、10、100、1 000 ng/m L)多西环素诱导,以及两组均经100 ng/m L多西环素诱导后,采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260/A280在2.0左右,说明纯度较高;THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光,为真核载体表达的绿色荧光蛋白,表明成功转染。随着多西环素浓度的升高,观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高,各浓度间比较有统计学差异(P均<0.01)。观察组经100 ng/m L多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后,H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后(P均<0.01)。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株,并经不同浓度多西环素诱导鉴定;该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。

穴位埋线对心肌缺血再灌注过程自噬相关蛋白表达的影响

目的:探讨埋线对缺血再灌注损伤ZDF大鼠心肌Beclin-1、Bcl-2及P62蛋白表达的影响。方法:将24只雄性ZDF大鼠随机分为4组(n=6):空白组、缺血再灌注组、针刺组和埋线组。采用推管法制备心肌缺血再灌注损伤模型。ELISA法测定各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;蛋白质印迹法检测各组大鼠心肌组织Beclin-1、Bcl-2及P62的表达;电镜观察心肌组织超微结构。结果:与空白组比较,其余3组大鼠血清SOD、GSH-Px含量均明显下降(P<0.01),心肌组织Beclin-1、Bcl-2及P62表达显著增强(P<0.01);与缺血再灌注组比较,针刺组及埋线组血清SOD、GSH-Px含量明显上升(P<0.01),心肌Beclin-1、Bcl-2表达明显升高,P62蛋白的表达显著降低(均P<0.01);电镜观察结果显示,与缺血再灌注组比较,针刺组及埋线组ZDF大鼠心肌损伤相对较轻,自噬泡数量增多。结论:埋线可能通过上调心肌中Beclin-1、Bcl-2及下调P62的表达激活自噬,从而有效保护缺血再灌注损伤心肌。

孙氏腹针对中风恢复期患者PAC-1表达及下肢功能障碍恢复的影响

目的观察孙氏腹针对中风恢复期患者PAC-1表达及下肢功能障碍恢复的影响。方法将60名患者随机分为对照组及腹针组,疗程均为14天。应用流式细胞仪技术检测两组治疗前、后静脉血PAC-1含量的变化,选取30名健康志愿者测定参考值。采用简化的下肢运动功能评分(Fugl-Meyer),评估孙氏腹针对其下肢功能障碍恢复的影响。结果两组患者治疗前后PAC-1水平均高于健康组(P<0.01);治疗后两组PAC-1水平较治疗前均明显降低(P<0.05),腹针组PAC-1水平下降更为明显;两组与治疗前比较,FMA评分差异有统计学意义(P<0.05),且腹针组评分高于对照组(P<0.05),腹针组临床症状改善更为明显。结论孙氏腹针结合体针可更好改善中风恢复期患者下肢功能障碍,降低PAC-1表达水平,但仍需进一步研究。

穴位埋线针对不同性别单纯性肥胖疗效差异的临床研究

目的:比较穴位埋线对不同性别单纯性肥胖患者治疗效果的差异。方法:应用穴位埋线治疗48例不同性别单纯性肥胖患者,比较其减肥疗效。结果:2个疗程后,女性组总有效率为92.59%,男性组总有效率为80.95%。结论:穴位埋线可加速脂肪分解且作用持久,无须每日针刺治疗,针对不同性别单纯性肥胖患者均有效,尚不能证明二者存在差异。

穴位埋线治疗不同年龄段女性单纯性肥胖疗效差异的临床观察

目的：比较穴位埋线对不同年龄段女性单纯性肥胖的疗效差异。方法：采用穴位埋线对60例单纯性肥胖患者进行治疗,观察减肥效果。结果：经过2个疗程后,总有效率20~30岁组为91.3%,31~40岁组为86.36%,41~50岁组为55%。结论：穴位埋线可以抑制食欲,产生饱腹感,加速脂肪分解代谢,发挥作用持久,且不需每日针刺治疗。

曲古抑菌素A对卵巢癌细胞分化、增殖的影响及其机制

目的观察曲古抑菌素A(TSA)对卵巢癌细胞分化、增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法培养卵巢癌上皮细胞系HO8910,将细胞分为A、B、C、D组,分别加入0、100、200、400 nmol/L TSA。分别于培养24、48、72 h观察A、C组细胞形态变化;于培养24 h后采用Western blotting法检测四组细胞中的Y染色体上的性别决定区盒2(SOX-2)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)和叉头样转录因子A2(FOXA-2)。分别采用MTT法及Ed U染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测不同周期细胞。采用Western blotting法检测各组细胞中的Cyclin D1和p21Cip1蛋白。结果 A组细胞多为类圆形或椭圆形,外表规整,成簇生长。C组细胞发生形态转变,细胞密度有所下降。与A组相比,B、C、D组细胞中SOX-2、OCT-4表达下调,FOXA-2表达升高(P均<0.05)。与A组相比,B、C、D组细胞增殖率降低,G_0/G_1期细胞比例增高,S期细胞比例减小,Cyclin D1蛋白表达下调,p21Cip1蛋白表达上调(P均<0.05)。结论 TSA可诱导卵巢癌HO8910细胞分化,抑制细胞增殖,其机制可能与调节细胞分化相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。

多元化整合提升幼儿语言能力探研

教师在幼儿语言教学过程中,要采用多种不同的策略进行多元整合,有效地提高幼儿的语言能力。要注重整合网络,拓展幼儿的语言资源;要结合绘本,激活幼儿学习语言的内驱力;要整合实践活动,培养幼儿的语言意识。

铂类抗癌药物在妇科肿瘤治疗中的应用效果分析

目的分析铂类抗癌药物在妇科肿瘤治疗中的临床疗效。方法选取76例妇科肿瘤患者,根据用药不同分为A组(采用紫杉醇+顺铂治疗)与B组(采用紫杉醇+卡铂治疗),每组38例。比较两组临床疗效、生命质量及安全性。结果A组总有效率(92.11%)与B组(89.47%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组生命质量总分(40.54±5.90)分与B组(40.43±5.87)分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组发生不良反应9例,发生率为23.68%;B组发生不良反应10例,发生率为26.32%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论对妇科肿瘤患者使用铂类抗癌药物,可有效控制病情或者延缓病情不良进展,改善生命质量,具有一定用药风险,但是顺铂、卡铂用药效果与安全性无显著差异,均可产生一定应用价值。

沉默LSD1基因的表达可抑制卵巢癌HO8910细胞的增殖并诱导其凋亡

目的 :研究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶(1lysine-specific demethylase 1,LSD1)表达下调及其酶活性下降对人卵巢癌HO8910细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用慢病毒感染系统将携带有特异性针对LSD1基因的LSD1-shRNA重组慢病毒载体(pLKO-Tet-On-LSD1-shRNA)转入HO8910细胞,并用嘌呤霉素(puromycin)筛选LSD1-shRNA稳定转入的HO8910细胞(HO8910-LSD1-shRNA细胞);采用不同质量浓度的多西环素(doxycycline,Dox)(1、10和100 ng/m L)处理HO8910-LSD1-shRNA细胞,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中LSD1 mRNA和蛋白以及组蛋白(histones)H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)蛋白表达的变化。分别用LSD1特异性抑制剂苯环丙胺(tranylcypromine,TCP)和Dox处理HO8910细胞和HO8910-LSD1-shRNA细胞后,用MTT法和EdU染色法检测细胞的增殖情况;FCM法检测抑制LSD1活性或沉默LSD1基因表达对HO8910细胞周期及凋亡的影响;最后,采用蛋白质印迹法检测抑制LSD1活性或沉默LSD1基因表达对HO8910细胞中p21、Bax、Bcl-2和survivin蛋白表达的影响。结果:建立了稳定沉默LSD1表达的卵巢癌HO8910细胞株;LSD1表达沉默后,H3K4me2蛋白的表达水平随着Dox浓度的增加而上调;干扰LSD1基因表达或抑制LSD1的活性,均能够显著抑制HO8910细胞的增殖,并促进细胞的凋亡(P值均<0.05)。此外,LSD1活性的抑制或LSD1表达的下调均可使细胞周期阻滞在G_1期,并下调Bcl-2和survivin蛋白的表达,以及上调p21和Bax蛋白的表达。结论 :沉默人卵巢癌细胞HO8910中LSD1基因的表达能有效抑制细胞的增殖,使细胞阻滞在G_1期,促进细胞的凋亡,提示LSD1可能是卵巢癌治疗的一个新靶点。