1995～2000年广州地区小儿肺炎支原体感染情况调查分析

目的 :调查小儿肺炎支原体 (MP)感染发病率、发病季节及发病年龄分布。方法 :采用明胶颗粒凝集方法 (PA)对广州市儿童医院部分住院及门诊肺炎儿童做血清肺炎支原体抗体 (MP IgM)检测。结果 :6年共检测肺炎儿童 10 0 98例 ,阳性数为 2 0 79例 ,阳性率为 2 0 6 %。 1岁以内婴幼儿MP感染发病率为 6 3%。～ 6岁组幼儿MP感染发病率为 2 3 6 %。 >6岁组幼儿MP感染发病率为 40 7%。发病时间分布上 ,全年皆有不同程度MP感染病例发生 ,10～ 12月MP感染发病率比其它月份高。 1995～ 2 0 0 0年MP阳性人数呈逐年增加的趋势。结论 :MP是儿童时期肺炎的重要致病菌之一。 1～ 6岁组其它病原引起的肺炎多于MP引起的肺炎 ,>6岁学龄儿童肺炎以MP肺炎为主。肺炎支原体引起儿童肺炎有增加的趋势 ,临床上应加强对肺炎支原体肺炎的防治。

ACE基因多态性及血清ACE水平与儿童川崎病相关性

目的研究血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(insertion/deletion,I/D)多态性及ACE水平与儿童川崎病(Kawasaki disease,KD)的相关性。方法采用PCR方法对138例KD患儿和98例正常儿童ACE基因多态性进行检测,并用酶动力学法测定血清ACE水平。结果①138例KD患儿中ACE基因型DD型I、D型、Ⅱ型频率分别为43.5%(60/138)、34.1%(47/138)、22.4%(31/138);98例正常儿童ACE基因频率分别为24.5%(24/98)、30.6%(30/98)4、4.9%(44/98)。②KD患儿和正常儿童之间ACE基因I/D多态性频率差异有显著性(χ2=15.089,P<0.05),Ⅱ型基因的发生频率明显低于正常儿童,而DD型与ID型发生频率明显高于正常儿童。③KD患儿和正常儿童血清ACE活性比较差异有显著性(t=-4.025,P<0.05)。结论KD患儿ACE基因多态性与正常儿童分布有差异,DD型可能与KD的发病有关。KD患儿血清ACE水平低于正常儿童,其血清ACE水平随病情好转逐渐上升到正常水平。

新生儿病房常见病原菌及耐药性分析

目的了解新生儿病房常见病原菌的种类及其耐药情况,为合理使用抗生素提供依据。方法对该院新生儿病房2004年1月至2005年12月各类标本培养分离、鉴定出的前7种病原微生物进行病原学分析。结果677株病原菌中革兰阳性球菌198株,其中凝固酶阴性葡萄球菌140株,是新生儿菌血症或败血症的主要病原菌;革兰阴性杆菌479株,以肺炎克雷伯菌居多,大肠埃希菌次之。凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素、苯唑西林及红霉素、头孢他啶等具有较高耐药性,MRS发生率为57.6%,对万古霉素、丁胺卡那霉素等敏感性较高;革兰阴性杆菌对亚胺培南、丁胺卡那、环丙沙星、庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦具有很高的敏感性,而氨苄西林、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟、阿莫西林/克拉维酸等耐药率较高。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs的产生率分别为31.9%和23.5%,产ESBLs的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌仅对碳青霉烯类、氨基糖甙类以及喹诺酮类少数抗菌药物敏感,而对第三代头孢菌素耐药率很高。结论凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌等是新生儿病房中检出率最高的几种病原菌,其耐药形势不容乐观,多重耐药相当严重,合理使用抗生素是有效抗感染和遏止耐药性蔓延的重要手段。

小儿紫癜性肾炎ACE基因多态性及其血清ACE分析

目的 :探讨小儿紫癜性肾炎 (Henoch schonleinpurpuranephritis ,HSPN)与ACE基因第 16内含子插入 /缺失多态性、血清ACE活性的关系。方法 :采用聚合酶链式反应 (PCR )检测 72例小儿紫癜性肾炎患儿和 5 8例正常儿童ACE基因并同时用酶偶联法测血清ACE活性。结果 :(1) 72例小儿紫癜性肾炎患儿中ACE基因Ⅱ型 ,ID型和DD型频率分别为 2 7 8% (2 0 / 72 ) ,2 5 % (18/ 72 )和 47 2 % (3 4/ 72 )。 5 8例正常儿童ACE基因Ⅱ型 ,ID型和DD型频率分别为 46 5 % (2 7/ 5 8) ,2 9 3 % (17/ 5 8)和 2 4 2 % (14 / 5 8)。 (2 )小儿紫癜性肾炎患儿和正常儿童之间ACE基因I/D多态性频率差异有显著意义 (P <0 0 1)。小儿紫癜性肾炎患儿和正常儿童血清ACE活性比较差异没有显著意义 (P >0 0 5 )。ACE各基因型中血清ACE活性DD型 >ID型 >II型 ,差异有显著意义。结论 :小儿紫癜性肾炎患儿ACE基因多态性与正常儿童分布不同 ,DD型的发生频率明显高于正常儿童。小儿紫癜性肾炎患儿血清ACE活性与正常儿童没有差异。

新生儿呼吸道感染肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性研究

目的建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性(RAPD)基因分型的方法,并对新生儿病房呼吸道感染肺炎克雷伯菌进行分子流行病学分析。方法在对肺炎克雷伯菌进行RAPD反应体系优化的基础上,对我院新生儿病房下呼吸道分泌物分离获得的30株肺炎克雷伯菌,提取基因组DNA后进行RAPD分型,同时进行抗生素敏感性试验。结果30株肺炎克雷伯菌RAPD分型可分为14型,分型率100.0%;其中A型6株、B型4株、C型3株、D型3株、E型-H型各2株、I型-N型各1株。药敏结果显示分离菌株多重耐药情况严重,对第三代头孢菌素类抗生素耐药率高达50.0%-73.3%,但对亚胺培南仍高度敏感。结论RAPD可对肺炎克雷伯菌进行分子流行病学研究。新生儿病房内存在肺炎克雷伯菌流行株的交叉感染。

两种检测婴幼儿粪便轮状病毒方法的比较

轮状病毒是小儿急性感染性胃肠炎,尤其是秋冬季腹泻的主要致病原。近年来有许多方法能检测该病毒,如电镜、酶免疫分析(EIA)、ELISA 乳胶凝集试验、PAGE 等。我们采用创新 ELISA 一步法和 PAGE 法分别对237例婴幼儿腹泻粪便进行 HRV 检测,现将我们的应用体会及结果总结分析如下。1 材料与方法1.1

小儿肾病综合征血管紧张素I转换酶基因多态性研究

目的 探讨ACE基因第 16内含子插入 /缺失多态性与肾病综合征、血清ACE活性的关系 .方法 采用聚合酶链式反应 (PCR)检测 82例肾病综合征患儿和 38例正常儿童ACE基因并同时用酶偶联法测血清ACE活性 .结果① 82例肾病综合征患儿中ACE基因II型 ,ID型和DD型频率分别为 4 7.6 % (39/82 ) ,2 4 .4 % (2 0 /82 )和 2 8% (2 3/82 ) .对照组分别为 4 7.3% (18/38) ,2 3.7% (9/38)和 2 9% (11/38) ,肾病综合征患儿和正常儿童之间ACE基因I/D多态性频率差异无显著性意义 (p >0 .0 5 ) .② 38例正常儿童和 82例肾病综合征患儿血清ACE活性比较差异无显著性意义(p >0 .0 5 ) ,ACE各基因型中血清ACE活性差异有显著性意义 (p <0 .0 1) ,DD型 >ID型 >II型 .结论 ①小儿肾病综合征ACE基因II型 ,ID型和DD型频率分布和正常儿童差异无显著性意义 (p >0 .0 5 ) .

微量血光氧化增强法检测超氧歧化酶及其儿科临床应用

对光氧化增强法检测超氧歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）方法学上的研究，和进一步推广ＳＯＤ在临床上的应用，摸索建立用微量血法（６０μｌ全血），证实了一般采血法和微量采血法在统计学上呈直线相关（ｒ＝０．９０６７）；并对微量法进行了重复性试验（变异系数ＣＶ＝５．６３％），回收试验（回收率为９９．９％），表明该法重复性良好，稳定、灵敏度高。应用微量法对５０例正常小儿（不同年龄）红细胞ＳＯＤ测定：６月～组（３４７６７．６±８０６．２ｕ／ｇＨｂ），２岁～组（４０５４±９７１ｕ／ｇＨｂ，４～６岁组（４３７９±９５２ｕ／ｇＨｂ）。发现６月～组、２岁～组和４～６岁组ＲＢＣＳＯＤ含量有明显差异（Ｐ＜０．０５），而２岁～组和４～６岁组儿童ＲＢＣＳＯＤ含量无差异（Ｐ＞０．０５）。６例先天性心脏病体外循环心内直视手术患儿术后ＲＢＣＳＯＤ含量明显高于术前（Ｐ＜０．０５）。

新生儿败血症细菌耐药性与敏感性分析

目的 及早有效地干预治疗新生儿败血症 ,减少其死亡 .方法 分析了新生儿败血症的有关临床及致病菌的耐药性和敏感性资料 .结果 32例新生儿败血症中死亡 5例 (15 .6 % ) ,医院感染 2例 (6 .2 5 % ) .严重的新生儿败血症有严重原发疾病 ,主要由革兰氏阴性菌引起 .主要的优势菌群有凝固酶阴性葡萄球菌、克雷伯菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌 .结论 凝固酶阴性葡萄球菌是新生儿败血症最主要的病原菌 ,加强对复合菌或革兰氏阴性杆菌引起败血症的监测、治疗 ,严格执行各种治疗原则 ,预防医院感染败血症的发生 .

广州地区儿童血培养病原菌的分布及耐药性研究

目的探讨儿童血培养病原菌的分布特点及其耐药情况,为临床诊疗提供参考。方法对广州市儿童医院2005年至2006年临床各科室送检血液标本所分离病原菌的分布及药敏结果进行回顾性分析。结果共检出385株病原菌,其中革兰阳性菌208株,占54.0%,革兰阴性菌164株,占42.6%,真菌13株,占3.4%。分离率前6位的病原菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌(CNS,35.8%)、肺炎克雷伯菌(8.8%)、不动杆菌(5.5%)、大肠埃希菌(4.9%)、铜绿假单胞菌(4.7%)、金黄色葡萄球菌(4.4%)。病原菌的病区分布特点:儿科重症监护病房以不动杆菌等非发酵菌为主要分离菌(占41.7%),新生儿重症监护病房以CNS为主(40.5%),血液病区以肠杆菌科细菌为主(35.7%),新生儿病房及传染病房均以CNS为主要分离菌。CNS对青霉素、氨苄西林、红霉素耐药率均超过80%,但对万古霉素、替考拉宁和阿米卡星敏感,MRCNS检出率达72.5%。肠杆菌科细菌对哌拉西林、氨苄西林、头孢噻肟及头孢哌酮的耐药率为50%～100%,但对亚胺培南、阿米卡星和诺氟沙星耐药率较低。不动杆菌对广谱青霉素、第3代头孢菌素、氨曲南及庆大霉素的耐药率较高而对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦较为敏感。结论凝固酶阴性葡萄球菌是广州地区儿童败血症最主要的病原菌。不同病区检出病原菌种类有较大差异。根据病原菌种类及药敏结果合理应用抗菌药是有效控制感染和减少耐药菌株产生的重要手段。

广州地区1998-2003年儿童流行性感冒病毒监测结果分析

目的研究1998-2003年广州地区儿童流感病毒(流感)感染的流行情况。方法对流感样症状的儿童取咽分泌物,接种到狗肾细胞(MDCK)上,在33℃温箱培养48-72h。MDCK细胞上清液进行血凝试验。结果3444例中264例分离出流感病毒,流感病毒分离总阳性率7.7%。1998、1999年流感阳性率分别为16.8%、7.4%,H3N2是强势株;2000年流感分离阳性率8.4%,出现H1N1亚型;2001年流感分离阳性率3馏%,未分离到H3N2亚型;2002年流感分离阳性率7.3%,B型流感病毒为强势株;2003年分离阳性率1.7%。1998-2001年广州地区儿童B型流感病毒流行为Yamagata型,2002-2003年流行为Victoria型。1999年发现禽流感H9N2亚型。结论1998年为流感流行较活跃年份,2001和2003年流感活动较平静;1998-2001年广州地区儿童B型流感流行Yamagata型,2002-2003年流行Victoria型。1999年发现儿童感染H9N2个案。

丙种球蛋白及甲强龙抑制川崎病患者PBMC释放TNF-α的作用

目的探讨丙种球蛋白及甲强龙抑制川崎病(KD)患者外周血单个核细胞(PBMC)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离22例KD患者1、1例发热患者、15例正常人抗凝血的PBMC,用乙酰肉豆蔻佛波酯(PMA)刺激,加入丙种球蛋白和或甲强龙,分空白组、PMA组、PMA+丙种球蛋白组、PMA+甲强龙组、PMA+丙种球蛋白+甲强龙组5组进行PBMC培养48 h,收集上清液,ELISA法测定上清液中TNF-α含量。结果 KD组TNF-α含量均高于发热对照组和正常对照组(P<0.05),差异有统计学意义;KD组中,PMA+丙种球蛋白组、PMA+甲强龙组、PMA+丙种球蛋白球+甲强龙组与PMA组比较(P<0.05),差异有统计学意义;KD组中,冠脉扩张组TNF-α含量明显高于冠脉正常组(P<0.05),差异有统计学意义。结论丙种球蛋白及甲强龙有效抑制KD患者PBMC释放TNF-α,抑制TNF-α释放可能是丙种球蛋白、甲强龙治疗川崎病的作用机制之一。

HPLC法测定尿免疫化学非反应性白蛋白及其在早期诊断儿童糖尿病肾病中的意义

目的:研究尿免疫化学非反应性白蛋白的检测对早期诊断儿童糖尿病肾病的意义,探讨HPLC法测定尿白蛋白的应用价值。方法:收集58份糖尿病患儿的随机尿标本,分别用高效液相色谱法(HPLC)和免疫比浊法对其进行微量白蛋白检测。结果:标准品和尿液标本的白蛋白出峰时间均为14.3min,58例糖尿病患儿尿液中,由HPLC法和免疫比浊法测定的尿白蛋白分别为9.6-195.1mg/L和0-158.6mg/L,在每份标本中HPLC法的测定结果均高于免疫比浊法(P<0.05)。HPLC法检出的微量白蛋白尿41例(70.7%),免疫比浊法检出22例(37.9%)。结论:HPLC法能检出全部的尿白蛋白,比免疫化学法检测出更多的尿微量白蛋白,可更早期诊断糖尿病患儿是否伴有持续性白蛋白尿。

四种儿童常见肠道致病菌的多重PCR检测

目的对儿童感染性腹泻能进行四种常见病原菌如肠致病性大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属、空肠弯曲菌的快速检测。方法建立多重PCR检测体系。结果用一次PCR即可检测四种肠道致病菌,灵敏度达10～100CFU/mL;同时利用16SrRNA基因的保守区域作为内参照,有利于对粪便标本的扩增进行质量控制;对粪便标本,整个检测过程约5h。结论通过检测编码细菌的毒力因子或特异性生化反应相关的酶的基因,多重PCR体系能特异、灵敏、快速地检测四种肠道致病菌;icsA基因可以作为志贺菌属检测的特异性靶基因;该方法可进一步完善成体外基因诊断试剂盒。

缺氧缺血肺损伤新生鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达和意义

目的:探讨细胞凋亡与缺氧缺血肺损伤发生、发展的关系以及Fas/FasL系统表达的意义。方法:通过复制缺氧、缺氧后吸入纯氧大鼠肺损伤模型,采用TUNEL法、原位杂交检测、SqRT-PCR技术观察肺组织细胞凋亡情况、FasmRNA、FasLmRNA表达强度。结果:缺氧组或缺氧吸入纯氧组在缺氧4h后即可见大鼠肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞出现凋亡现象,并随着时间延长,细胞凋亡指数增高(P=0.003,P=0.005),同时FasmRNA、FasLmRNA表达上调,且缺氧后吸入纯氧组大鼠FasmRNA、FasLmRNA表达较单纯缺氧组明显增强(P<0.05)。结论:细胞凋亡与FasmRNA、FasLmRNA表达的上调可能参与缺氧和缺氧后吸入纯氧时导致的肺损伤。

ACE基因多态性及血清ACE水平与婴幼儿肺炎的相关性

目的研究血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(insertion/deletion,I/D)多态性及ACE水平与婴幼儿肺炎的相关性。方法采用PCR方法对73例儿童肺炎及137例新生儿肺炎和98例正常儿童ACE基因多态性进行检测,并用酶动力学法测定血清ACE水平。结果①73例儿童肺炎及137例新生儿肺炎患儿中ACE基因型DD型、ID型、II型频率分别为24.7%(18/73),11.0%(8/73),64.4%(47/73);35.0%(48/137),14.6%(20/137),50.4%(69/137),98例正常儿童ACE基因频率分别为25.5%(25/98),29.6%(29/98),44.9%(44/98)。②肺炎患儿和正常儿童之间ACE基因I/D多态性频率差异有统计学意义(2=10.309,P=0.006),II型基因的发生频率明显高于正常儿童。③新生儿肺炎患儿和正常儿童血清ACE活性比较差异有显著性。结论儿童肺炎、新生儿肺炎患儿ACE基因多态性与正常儿童分布有差异,II型基因可能与肺炎的发病有关。新生儿肺炎患儿血清ACE水平低于正常儿童。血清ACE水平与急性肺损伤的严重程度相关,随病情好转逐渐上升到正常水平。

儿童感染肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因分型及随机扩增DNA多态性分析

目的了解儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药情况、产质粒介导的AmpC酶的基因型别及产酶株的分子流行病学特征。方法采用K-B纸片法检测广州市儿童医院患儿感染的肺炎克雷伯菌的耐药情况;头孢西丁三维试验检测AmpC酶;多重PCR技术检测ampC基因并经DNA测序确定其基因型别;RAPD技术对产酶株进行DNA多态性分析。结果在分离到的110株肺炎克雷伯菌中,产质粒型AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率达17.3%,产酶株对头孢菌素类、头霉素类及复方β-内酰胺类抗生素高度耐药,但对亚胺培南仍全部敏感。多重PCR及DNA测序显示AmpC酶的基因型均为DHA型。多态性分析结果显示19株产AmpC酶菌株可分为15个谱型,其中A型有3株菌,B型、C型各两株,另12株菌谱型各不相同;C型两株产酶株分布于同一病区,而A型、B型产酶株则分布于不同病区。结论本地区儿童感染的肺炎克雷伯菌多重耐药情况严重;质粒介导的AmpC酶的检出率较高,其基因型为DHA型;产酶株主要为散发感染。

儿童A群链球菌感染的耐药性分析及其emm基因分型

【目的】了解广州地区儿童感染A群链球菌(GAS)的耐药情况及emm基因分型。【方法】对所分离的GAS以K-B法进行药敏试验并分析耐药情况;采用PCR法扩增GAS的M蛋白N末端,直接进行测序确定GAS的emm基因分型。【结果】GAS对青霉素、阿莫西林/棒酸、氧氟沙星、头孢菌素和万古霉素敏感,对红霉素、克林霉素、复方新诺明、四环素和氯霉素的耐药率分别为47.1%、42.5%、33.3%、21.8%、18.4%。以emm1基因型为主(37.9%),其次为emm18(13.8%),emm12(11.5%),emm69(9.2%)等。【结论】广州地区儿童感染GAS对大环内酯类等抗菌药物耐药形势严峻,应引起重视;GAS的emm基因型主要为emm1,选择主要流行菌株,可以作为基因疫苗的基础。

急性肺损伤新生大鼠肺组织细胞凋亡及其相关基因的表达和意义

【目的】 探讨细胞凋亡与其相关基因Fas/FasL系统表达在缺氧、缺氧后吸入纯氧致肺损伤发病机理中的意义。 【方法】 通过复制缺氧、缺氧后吸入纯氧大鼠肺损伤模型,采用TUNEL法、原位杂交检测、SqRT-PCR技术观察肺组织细胞凋亡情况、FasmRNA、FasLmRNA表达强度探讨其相关基因的表达。 【结果】 缺氧组或缺氧后吸入纯氧组在缺氧4 h后即可见大鼠肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞出现凋亡现象,并随着时间延长,细胞凋亡指数增高(P均<0.01),同时FasmRNA、FasLmRNA表达均上调,且缺氧后吸入纯氧组大鼠FasmRNA、FasLmRNA表达均较单纯缺氧组明显增强(P<0.05)。 【结论】 细胞凋亡与FasmRNA、FasLmRNA表达的上调可能参与缺氧和缺氧后吸入纯氧时导致的肺损伤。

1998—2000年广州地区儿童呼吸道感染常见病毒学分析

目的了解广州地区呼吸道病毒感染情况。方法采用咽拭子和部分血清进行病毒分离、红细胞凝集试验、红细胞凝集抑制试验和免疫酶标固相吸附试验进行研究。结果4298例咽拭子中分出流感病毒200例，其中上呼吸道流感病毒172例阳性，占流感病毒阳性率的86％；分出呼吸道合胞病毒150例，下呼吸道合胞病毒139例阳性，占呼吸道合胞病毒阳性率92.7％；及分出单疱病毒20例；单疱病毒阳性率0.5％。462例肺炎和支炎血清检测巨细胞病毒IgM82例阳性，CMV-IgM阳性率17.7％。40份急性期和恢复期血清检测流感病毒有6份血清阳性。结论流感病毒为上呼吸道感染的主要病原，呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒是下呼吸道感染的主要病原。流感病毒流行有2个高峰，1个在每年的3～4月，另1个在7～8月份。1998年流感病毒主要流行的是A3型；1999年流感病毒主要流行是B型，同年广州市出现有1例H9N2禽流感病毒；2000年出现A1型流感病毒。单疱病毒在上下呼吸道感染中为发病例。