目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇(PEG-4000)对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙(COM)晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞,或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIP...目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇(PEG-4000)对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙(COM)晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞,或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIPK) 3抑制剂GSK-872预处理后再加入400、800μg/m L COM处理TCMK-1细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,用CCK-8法检测细胞增殖活性,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞氧化应激水平,蛋白质印迹法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK1、RIPK3、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(p-MLKL)的表达,电感耦合等离子体发射光谱法(ICP)检测细胞表面晶体黏附量。将TCMK-1细胞分为3组,分别用800μg/m L COM、先用PEG-4000溶液再加入800μg/m L COM、先用800μg/m L COM再加入PEG-4000溶液处理细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,CCK-8法检测细胞增殖活性、DCFH-DA探针法检测细胞氧化应激水平,ICP检测细胞表面晶体黏附量。结果 400μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量减少、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05);800μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量无明显变化、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05)、RIPK3和p-MLKL表达减少(P<0.05)。与COM处理组相比,PEG-4000预处理组TCMK-1细胞晶体黏附量明显减少、细胞增殖活性增强、氧化应激水平降低(P均<0.05),而后加入PEG-4000组与COM处理组相比晶体黏附量、细胞增殖活性、氧化应激水平均无明显变化(P均>0.05)。结论 用GSK-872抑制坏死性凋亡可以一定程度减少COM在细胞表面黏附沉积,但在较高的晶体负荷下晶体可在细胞表面聚集形成不定型沉淀。在培养基中使用PEG-4000预处理能够使COM微晶粒在悬液中保持悬浮稳定,减少晶体聚集沉积及细胞黏附和细胞氧化应激损伤;但充分接触COM晶体后的TCMK-1细胞再加入PEG-4000不能逆转晶体细胞黏附聚集沉淀。展开更多
文摘目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇(PEG-4000)对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙(COM)晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞,或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIPK) 3抑制剂GSK-872预处理后再加入400、800μg/m L COM处理TCMK-1细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,用CCK-8法检测细胞增殖活性,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞氧化应激水平,蛋白质印迹法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK1、RIPK3、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(p-MLKL)的表达,电感耦合等离子体发射光谱法(ICP)检测细胞表面晶体黏附量。将TCMK-1细胞分为3组,分别用800μg/m L COM、先用PEG-4000溶液再加入800μg/m L COM、先用800μg/m L COM再加入PEG-4000溶液处理细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,CCK-8法检测细胞增殖活性、DCFH-DA探针法检测细胞氧化应激水平,ICP检测细胞表面晶体黏附量。结果 400μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量减少、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05);800μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量无明显变化、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05)、RIPK3和p-MLKL表达减少(P<0.05)。与COM处理组相比,PEG-4000预处理组TCMK-1细胞晶体黏附量明显减少、细胞增殖活性增强、氧化应激水平降低(P均<0.05),而后加入PEG-4000组与COM处理组相比晶体黏附量、细胞增殖活性、氧化应激水平均无明显变化(P均>0.05)。结论 用GSK-872抑制坏死性凋亡可以一定程度减少COM在细胞表面黏附沉积,但在较高的晶体负荷下晶体可在细胞表面聚集形成不定型沉淀。在培养基中使用PEG-4000预处理能够使COM微晶粒在悬液中保持悬浮稳定,减少晶体聚集沉积及细胞黏附和细胞氧化应激损伤;但充分接触COM晶体后的TCMK-1细胞再加入PEG-4000不能逆转晶体细胞黏附聚集沉淀。