姜黄素联合索拉菲尼对肾癌细胞780-0中自噬及凋亡信号的影响

目的:探究天然化合物姜黄素与化疗药物索拉菲尼在体外的联合抗肾癌作用及其作用机制。方法:以肾癌细胞780-0为研究对象,采用MTT法测定细胞生长抑制率,采用荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测凋亡通路基因表达,采用4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察细胞凋亡小体数量,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡通路及自噬通路相关蛋白表达。采用吖啶橙染色法检测细胞中自噬通量的水平。结果:与对照组相比,姜黄素及索菲拉尼呈浓度依赖性降低肾癌细胞780-0细胞活力。与索菲拉尼处理组相比,姜黄素联合索菲拉尼处理组中Bax、ATG5及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著升高,Bcl-2的表达量显著降低,表明姜黄素能加剧索菲拉尼诱导的肾癌细胞780-0中凋亡及自噬信号的表达。吖啶橙染色结果进一步表明姜黄素加剧索菲拉尼诱导的肾癌细胞780-0自噬流水平。与此同时,在使用自噬的抑制剂3-甲基腺嘌呤抑制细胞自噬后,由姜黄素和索菲拉尼联合诱导的肾癌细胞780-0凋亡现象被抑制。结论:姜黄素可以加剧索拉菲尼诱导的肾癌细胞780-0凋亡,并且其可能是通过激活细胞内自噬信号来实现的。

姜黄提取物对肾癌细胞炎症反应及体内成瘤的调控作用研究

本研究探究姜黄提取物对肾癌细胞ACHN的炎症反应及其对Nude裸鼠体内成瘤的调控作用。体内试验以Nude裸鼠为载体,皮下接种4×10^(6)个人肾癌细胞株ACHN,4周后建立体内移植瘤模型,分别灌胃10 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg的姜黄提取物进行治疗,记录小鼠体重及死亡率,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠移植瘤内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平。体外试验以人肾癌细胞株ACHN为载体,通过MTT试验检测姜黄提取物对人肾癌细胞株ACHN细胞活力的影响,通过乳酸脱氢酶(LDH)标准试剂盒检测姜黄提取物对ACHN细胞LDH释放的影响;通过荧光定量PCR(real-time PCR)试验检测ACHN细胞内炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及转化生长因子-β(TGF-β)以及小鼠肿瘤组织和ACHN细胞内NF-κB通路相关基因的表达。结果显示,与Model组相比,姜黄提取物处理显著降低小鼠体内瘤重、死亡率及增加小鼠体重,且50 mg/kg的姜黄提取物治疗组有最好的治疗效果。与Control组相比,姜黄提取物呈浓度依赖性抑制ACHN细胞的细胞活力,增加细胞内LDH释放。此外姜黄提取物在体内外上调肿瘤组织中炎性因子的表达水平,诱导产生炎性损伤,且姜黄提取物在体内外激活了肿瘤组织中NF-κB通路基因的表达。姜黄提取物能诱导ACHN肾癌细胞的炎症反应,抑制Nude裸鼠的体内成瘤,并且其可能是通过调控机体内的NF-κB通路来实现的。姜黄提取物对肾细胞癌有一定的抑制作用,具有成为肾细胞癌治疗药物的潜力。

淫羊藿苷对顺铂诱导的小鼠急性肾损伤保护作用及其作用机制研究

本研究为探究淫羊藿苷(ICA)对顺铂(CDDP)诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)的保护作用及其潜在作用机制,将40只C57BL/6小鼠随机分对照组(Control),ICA组,CDDP组,淫羊藿苷治疗组(CDDP+CIA),每组10只。Control组腹腔注射等剂量0.9%生理盐水,CIA组连续灌胃20 mg/kg CIA 7 d,CDDP组一次性腹腔注射13 mg/kg CDDP,CDDP+CIA组在一次性腹腔注射CDDP 5 d后连续灌胃20 mg/kg CIA 7 d。每两天记录小鼠体重,标准试剂盒检测小鼠血清中肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)水平,苏木精&伊红(H&E)染色检测小鼠肾脏病理变化,酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠肾脏中炎性因子水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测肾脏中核因子(NF-B)信号通路相关蛋白水平。结果显示:相比于Control组,CDDP组小鼠体重及肾脏指数显著降低,死亡率、血清中Scr和BUN水平及肾脏炎性因子水平显著上升;H&E染色结果表明小鼠肾小管出现炎性病变,管腔内出现炎性细胞浸润,红细胞增加,且CDDP组中小鼠肾脏中NF-B信号通路相关蛋白表达增加,而CIA治疗可以显著降低由CDDP诱导的小鼠肾损伤,降低NF-B信号通路相关蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿苷可通过降低由NF-B信号通路介导的炎症反应来缓解顺铂诱导的小鼠急性肾损伤。

阴离子通道CFTR表达水平与双酚A损伤小鼠精子活性的关系

目的研究阴离子通道囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)表达水平与双酚A(BPA)损伤小鼠精子细胞活性的关系。方法成熟的小鼠精子细胞经0、10、100和500μg/ml BPA染毒2 h。用伊红-苯胺黑染色法计数分析精子细胞存活率,精子获能和顶体反应用金霉素染色法测定,cAMP、磷酸化CREB(p-CREB)和CFTR用蛋白印迹法检测。结果各染毒组的精子细胞存活率、精子获能率和顶体反应率下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),最高剂量组均下降50%以上;cAMP、p-CREB和CFTR蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),最高剂量组均下降70%以上。CFTR水平与cAMP、p-CREB水平及精子顶体反应率高度正相关。结论 CFTR可能与BPA所致精子活性下降有关。