紫草素调控MicroRNA-382-5p抑制人增生性瘢痕成纤维细胞纤维化

背景:目前已有研究表明紫草素具有治疗增生性瘢痕的潜力,且miRNA参与增生性瘢痕的病理机制调控,猜测紫草素有可能通过影响miRNA调控增生性瘢痕的发生发展。目的:探讨紫草素通过影响MicroRNA-382-5p对人增生性瘢痕成纤维细胞纤维化的作用机制。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕组织及瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),并分别分离出人增生性瘢痕成纤维细胞和正常成纤维细胞用于后续实验。苏木精-伊红染色鉴定正常皮肤和增生性瘢痕;免疫荧光鉴定成纤维细胞;采用实时荧光定量PCR从组织水平检测MicroRNA-382-5p相对表达水平。将增生性瘢痕成纤维细胞随机分为紫草素组(紫草素溶于二甲基亚砜配成浓度为13.46μmol/L的药物干预细胞24 h)、二甲基亚砜组、MicroRNA-382-5p阴性对照组、MicroRNA-382-5p抑制组、紫草素+MicroRNA-382-5p阴性对照组及紫草素+MicroRNA-382-5p过表达组。实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达;Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达;CCK-8法检测细胞活性;划痕实验检测细胞迁移能力。结果与结论:①与正常皮肤成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性更强(P<0.01);②与二甲基亚砜组相比,紫草素组可以下调增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01),并抑制增生性瘢痕成纤维细胞迁移(P<0.05);③与正常皮肤相比,MicroRNA-382-5p在增生性瘢痕中呈高表达(P<0.01),且紫草素能下调增生性瘢痕成纤维细胞中MicroRNA-382-5p的表达(P<0.01);④敲低MicroRNA-382-5p能下调增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01),并抑制增生性瘢痕成纤维细胞迁移(P<0.05);⑤过表达MicroRNA-382-5p能上调在紫草素影响下增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01),并促进增生性瘢痕成纤维细胞迁移(P<0.01);⑥提示紫草素可通过下调MicroRNA-382-5p的表达抑制增生性瘢痕成纤维细胞的纤维化和迁移。

miR-382-3p抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:目前多项研究证实了miRNA影响增生性瘢痕的发生发展,STAT1参与瘢痕成纤维细胞的增殖过程,猜测miR-382-3p也有可能与增生性瘢痕的发生发展有关系。目的:探讨miR-382-3p对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用机制。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕和同一个体正常皮肤,提取人增生性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞;细胞转染分别设置:①对照组(不做处理)、miR-382-3p阴性对照组、miR-382-3p过表达组;②对照组(不做处理)、STAT1干扰对照组(si-NC)和STAT1干扰组(si-STAT1-1、si-STAT1-2、si-STAT1-3)。苏木精-伊红染色鉴定正常皮肤和增生性瘢痕;免疫荧光鉴定成纤维细胞;qRT-PCR检测miR-382-3p、STAT1、增殖细胞核抗原及细胞周期依赖性激酶抑制物(p27)mRNA表达;Western blot检测STAT1、增殖细胞核抗原及p27蛋白表达;CCK8、EdU检测细胞增殖活力和增殖水平;Targetscan预测miR-382-3p的下游靶基因,双荧光素酶验证miR-382-3p与STAT1的结合情况。结果与结论:①与正常皮肤和正常皮肤成纤维细胞相比,miR-382-3p在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中呈低表达(组织:P<0.01,细胞:P<0.01),STAT1在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中呈高表达(组织水平mRNA:P<0.01,组织水平蛋白:P<0.01;细胞水平mRNA:P<0.01,细胞水平蛋白:P<0.01);②过表达miR-382-3p后细胞增殖能力减弱(P<0.05),EdU阳性细胞数减少(P<0.01),增殖细胞核抗原的表达减少(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.05),p27的表达增加(mRNA:P<0.05,蛋白:P<0.05);③miR-382-3p能够靶向调控STAT1的表达(P<0.01),过表达miR-382-3p可导致STAT1的表达减少(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01);④干扰STAT1后可导致增殖细胞核抗原的表达减少(P<0.05),p27的表达增加(P<0.05),EdU阳性细胞数减少(P<0.01);⑤结果表明:miR-382-3p可通过抑制STAT1的表达进而抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,为未来增生性瘢痕的治疗寻找有效靶点提供一定的理论依据。

铁死亡诱导剂抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:增生性瘢痕是各种原因导致的皮肤创伤后愈合过程中出现的一种病理性瘢痕,目前缺乏特效治疗方法。目的:探讨铁死亡诱导剂Erastin对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕组织和同一个体正常皮肤,提取人增生性瘢痕成纤维细胞进行后续实验。将细胞分为对照组(不做处理)和铁死亡诱导剂组(用20μmol/L的Erastin干预细胞24 h),Western blot检测铁蛋白(Ferritin)的表达,铁离子检测试剂盒测定细胞铁离子浓度,丙二醛检测试剂盒检测细胞丙二醛水平;将细胞分为对照组(不做处理)、铁死亡诱导剂组(用20μmol/L的Erastin干预细胞24 h)和铁死亡诱导剂+铁死亡抑制剂组(用20μmol/L的Erastin和20μmol/L的Ferrostatin-1同时干预细胞24 h),qRT-PCR检测PCNA及p27的mRNA表达,Western blot检测PCNA及p27的蛋白表达,CCK-8、EdU检测细胞增殖活力和增殖水平。结果与结论:①与对照组相比,铁死亡诱导剂组铁蛋白减少(P<0.01),铁离子增多(P<0.05),丙二醛增多(P<0.01);②与对照组相比,铁死亡诱导剂组PCNA的表达降低(P<0.01),p27的表达增加(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.01),EdU阳性细胞数减少(P<0.01);③与铁死亡诱导剂组相比,铁死亡诱导剂+铁死亡抑制剂组PCNA的表达增加(P<0.05),p27的表达降低(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.01),EdU阳性细胞数增多(P<0.05);④结果表明,铁死亡诱导剂Erastin通过诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡进而抑制其增殖。

长链非编码RNA SNHG1对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lnc RNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法纳入2019-2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),从中分离培养成纤维细胞。采用q RT-PCR从组织和细胞水平检测SNHG1m RNA和mi R-382-3p相对表达水平。将增生性瘢痕成纤维细胞随机分为对照组、SNHG1阴性对照组(转染慢病毒空载体)、模拟物对照组(转染对照模拟物)、SNHG1阴性对照+模拟物对照组(转染慢病毒空载体和对照模拟物)、SNHG1过表达组(转染过表达慢病毒)、mi R-382-3p过表达组(转染mi R-382-3p模拟物)、SNHG1过表达+模拟物对照组(转染过表达慢病毒和对照模拟物)与SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组(转染过表达慢病毒和mi R-382-3p模拟物),采用q RT-PCR检测各组SNHG1、PCNA、p27 m RNA和mi R-382-3p的相对表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;Ed U染色法检测各组细胞增殖水平;Western blotting检测各组p27和PCNA蛋白表达水平。结果与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,SNHG1 m RNA在增生性瘢痕组织(3.21±2.65 vs.1.14±0.61,P<0.001)及其成纤维细胞中呈高表达(0.91±0.08 vs.0.54±0.08,P<0.01),而mi R-382-3p表达下调(组织:0.53±0.34 vs.1.15±0.61,P<0.001;细胞:0.84±0.09 vs.1.01±0.004,P<0.05)。与SNHG1阴性对照组相比,SNHG1过表达组细胞增殖能力增强(0.23±0.03 vs.0.16±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比明显增高(30.01%±5.70%vs.7.13%±4.40%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平增高(m RNA:2.97±0.33 vs.0.98±0.25,P<0.01;蛋白:2.20±0.09 vs.0.88±0.20,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.30±0.03 vs.1.42±0.15,P<0.001;蛋白:0.47±0.11 vs.1.13±0.19,P<0.05),mi R-382-3p相对表达水平降低(0.05±0.01vs.1.03±0.12,P<0.001);与SNHG1过表达+模拟物对照组相比,SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组细胞增殖能力减弱(0.15±0.02 vs.0.26±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比下降(5.97%±0.33%vs.11.70%±0.87%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.64±0.09 vs.3.33±0.38,P<0.001;蛋白:1.70±0.36 vs.2.34±0.16,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平升高(m RNA:1.01±0.44 vs.0.09±0.04,P<0.05;蛋白:1.38±0.31 vs.0.50±0.09,P<0.05)。结论 SNHG1在增生性瘢痕中呈高表达,可负向调控mi R-382-3p的表达,进而促进增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,有望成为治疗增生性瘢痕的新靶点。

同型半胱氨酸通过激活beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)促进人肝细胞自噬

目的探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法体外培养肝细胞,分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、LC3BⅠ)的表达水平;使用(0、25、50、100)μmol/L氯喹(CQ)处理肝细胞,CCK-8法检测CQ对肝细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测LC3B和AMBRA1的表达;采用AMBRA1小干扰RNA感染肝细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot法检测肝细胞AMBRA1表达干扰效率。敲低AMBRA1后肝细胞用Hcy处理,Western blot法检测LC3B蛋白表达水平,转染表达双荧光蛋白和LC3的腺病毒(mRFP-GFP-LC3),激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬流的变化。结果与对照组相比较,Hcy处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值升高;50μmol/L CQ对肝细胞增殖的抑制率接近于50%;与对照组相比,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、AMBRA1的表达明显升高,而Hcy联合CQ组的LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、AMBRA1的表达比Hcy组明显降低;敲低AMBRA1后,肝细胞LC3BⅡ/LC3BⅠ比值下降;与对照组相比,Hcy组自噬体和自噬溶酶体增加,敲低AMBRA1后,自噬体和自噬溶酶体减少。结论Hcy可通过激活AMBRA1促进肝细胞自噬。

推动当代中国马克思主义大众化的思考

马克思主义是我党的根本指导思想,我们在长期的实践过程中致力于将马克思主义普遍真理结合于中国具体发展,在中国革命的建设与改革方面都取得了一系列重大成就,马克思主义在此过程中也逐步实现了自身的时代化、中国化、大众化发展。在今后的发展时期中,我们仍要坚持将马克思主义放在重要的指导地位,通过全新的实践行动去推动当代中国马克思主义大众化。

“四个坚持”与推动中欧国际合作关系健康稳定发展

坚持和平共处、坚持开放合作、坚持多边主义、坚持对话协商,这“四个坚持”明确指出了中欧国际关系的合作方向,对深化中欧国际合作关系有着重要意义。虽然目前中欧关系中的国际合作在战略内涵、合作领域、推动新平台建设等方面取得了重大成就,但是还面临着欧盟对中国崛起的战略疑虑、双方经济贸易关系中的矛盾与摩擦、双方文化及价值观念差异的影响等挑战。以“四个坚持”推动中欧国际合作关系的健康稳定发展,需要正确认识国家合作中的摩擦,正确看待中国当前取得的成绩,主动承担大国国际责任。

法治思维下的共建共治共享社会治理路径研究

“推进法治中国建设”“加快形成共建共治共享的现代社会治理格局”是新时代中国社会治理发展战略目标,以“共建共治共享的现代化社会治理”为目标,以“法治中国建设”为导向,全面深化社会治理,形成了独具创新意义的现代社会治理理念。推进法治中国建设,确定性思维、自组织思维、自下而上思维等多角度的社会治理思维与法治思维互通互融是实现社会治理现代化的基础。具体社会法理治理实施中仍存在一些现实困境,推动法治中国建设,推动社会治理现代化发展,我们必须下沉基层治理法治单元、推动德治法治深度契合、利用法制化促进法治化发展,为加快推进法治中国建设、形成共建共治共享的现代化社会治理格局奠定理论基础。

累托石吸附处理含铅废水试验结果

选取累托石作为吸附剂用于废水中铅离子的去除,探究铅离子初始浓度、吸附剂投加量、反应时间、温度等因素对铅离子去除的影响。实验结果表明:REC吸附处理Pb(II)的最佳条件为:初始浓度100 mg•L−1、累托石用量5 g•L−1、吸附温度25℃、吸附时间40 min,Pb(II)去除率可达62.12%。累托石吸附Pb(II)能较好地拟合Langmuir模型,该材料吸附处理铅离子过程更加符合准二级动力学模型。累托石对Pb(II)的去除过程以化学吸附为主导,反应过程与累托石表面的活性位点和吸附质之间的离子交换速率、表面沉淀有关。

机械张力对兔耳增生性瘢痕的形成及转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的探讨机械张力对兔耳增生性瘢痕的形成及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用实验研究方法。取6只3~5个月龄雌雄不拘新西兰大白兔, 于每侧兔耳腹面制作5个全层皮肤缺损创面。观察术后0(即刻)、7、14、21、28 d所有兔耳创面外观。术后28 d, 计算瘢痕形成率。将每只兔左耳的3个成熟瘢痕纳入张力组并采用螺旋扩弓器持续扩弓, 将每只兔右耳的3个成熟瘢痕纳入假张力组并仅缝合螺旋扩弓器不扩弓, 每组共18个瘢痕。经机械张力处理(以下简称处理)40 d, 观察2组兔耳瘢痕组织颜色、质地。处理40 d, 观察并计算瘢痕增生指数(SEI), 分别行苏木精-伊红染色观察组织形态、Masson染色观察胶原形态, 采用实时荧光定量反转录PCR法检测瘢痕组织中TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达, 采用蛋白质印迹法检测瘢痕组织中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA的蛋白表达和Smad3磷酸化水平。以上实验各组样本数均为3。对数据行独立样本t检验。结果术后0 d, 所有兔耳均形成5个新鲜创面;术后7 d, 可见创面结痂;术后14 d, 大部分创面已上皮化;术后21 d, 可见全部创面上皮化;术后28 d, 形成明显的增生性瘢痕。术后28 d, 瘢痕形成率为75%(45/60)。处理40 d, 张力组的兔耳瘢痕组织凸起较假张力组明显, 瘢痕组织较硬, 颜色较红润;张力组兔耳瘢痕的SEI为2.02±0.08, 明显高于假张力组的1.70±0.08(t=5.07, P<0.01)。处理40 d, 与假张力组相比, 张力组兔耳瘢痕组织角质层变厚, 真皮层可见大量新生的毛细血管、炎症细胞和成纤维细胞;胶原排列更加紊乱, 呈结节状或旋涡状分布。处理40 d, 张力组兔耳瘢痕组织中TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA的mRNA表达量分别为1.81±0.25、5.71±0.82、7.86±0.56、4.35±0.28、5.89±0.47, 分别明显高于假张力组的1.00±0.08、1.00±0.12、1.00±0.13、1.00±0.14、1.00±0.14(t值分别为5.36、9.82、20.60、18.26、17.13, P值均<0.01);张力组兔耳瘢痕组织中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA的蛋白表达和Smad3磷酸化水平分别为0.865±0.050、0.895±0.042、0.972±0.027、1.012±0.057、0.968±0.087, 分别明显高于假张力组的0.657±0.050、0.271±0.029、0.631±0.027、0.418±0.023、0.511±0.035(t值分别为5.08、21.27、15.55、16.70、8.40, P值均<0.01)。结论机械张力会刺激瘢痕增生, 抑制真皮层胶原纤维的正常排列, 加剧胶原纤维的沉积, 从而对兔耳增生性瘢痕的消退起抑制作用, 其机制可能与机械张力激活TGF-β1/Smad信号通路有关。

论马克思主义政治经济学对供给侧结构性改革的指导

毛泽东曾言,没有理论指导的任何实践都是盲目的、无意义的。在经济社会发展中,供给侧结构性改革的重点在于解决各种深层次矛盾。对于特色社会主义建设而言,马克思主义政治经济学是重要的理论指导,其呈现了人类不同时期发展过程中所表现出的规律,可科学预见经济社会的发展,对于供给侧结构性改革具有不可替代的指导作用。马克思主义政治经济学认为,社会形态的发展实际上是自然历史的发展过程。同时,作为社会主要形态的基础,生产力与生产关系在各种社会生产中融为一体。所以,如何合理协调生产力与生产关系之间的关系是供给侧结构性改革的关键所在,想方设法地促进生产力发展,对各生产关系进行积极协调,能够反作用于生产力的可持续稳定发展。对此,必须深入学习与理解马克思主义政治经济学,重点思考怎样促使供给侧改革顺利完成,协调并进,提高资源与全要素配置率,进而真正提升人民群众福利水平,实现我国经济可持续发展。基于此,对马克思主义政治经济学进行深入研究,着重分析其对供给侧结构性改革的指导意义,并提出进一步深化供给侧结构性改革的路径。