耐受性树突状细胞可抑制胶原诱导性关节炎大鼠脾脏细胞的焦亡

背景:课题组前期利用核因子κB寡核苷酸诱骗剂成功构建了抗原特异性耐受性树突状细胞,并用其对胶原诱导性关节炎大鼠模型进行了有效干预,但治疗机制仍有待进一步研究。目的:探讨耐受性树突状细胞对胶原诱导性关节炎大鼠脾脏细胞焦亡的影响。方法:提取骨髓源树突状细胞,利用核因子κB寡核苷酸诱骗剂构建耐受性树突状细胞。取9只SD大鼠,采用随机数字表法随机分为正常组、模型组、治疗组,每组3只,模型组、治疗组建立胶原诱导性关节炎模型(初次免疫:左足跖部皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂;加强免疫:初次免疫后第14天,尾根部多点注射牛Ⅱ型胶原乳剂),初次免疫后第20天分别尾静脉注射生理盐水、耐受性树突状细胞,初次免疫后第35天,进行相关检测。结果与结论:(1)关节炎指数评分:治疗组大鼠关节炎指数评分低于模型组(P<0.05);(2)足踝关节大体与病理观察:模型组大鼠踝关节严重肿胀,治疗组大鼠踝关节轻度肿胀;苏木精-伊红染色显示,与正常组相比,模型组大鼠足踝关节滑膜明显增生,伴有炎性细胞浸润和骨侵蚀;与模型组相比,治疗组大鼠足踝关节滑膜增生减低、骨侵蚀和炎性细胞浸润减少;(3)血清白细胞介素1β水平:模型组大鼠血清白细胞介素1β水平高于正常组(P<0.05),治疗组大鼠血清白细胞介素1β水平低于模型组(P<0.05);(4)脾脏相关蛋白表达:Western blot检测显示,与正常组相比,模型组大鼠脾脏NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD-NT、白细胞介素1β前体、白细胞介素1β的蛋白表达均增高(P<0.05);与模型组大鼠相比,治疗组大鼠脾脏NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD-NT、白细胞介素1β前体、白细胞介素1β的蛋白表达均下降(P<0.05);(5)结果表明,耐受性树突状细胞可能通过抑制脾脏细胞焦亡和促炎细胞因子白细胞介素1β的释放,缓解胶原诱导性关节炎模型大鼠的炎症反应。

去甲斑蝥素对环磷酰胺诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血功能的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对环磷酰胺(CTX)诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血的影响及机制。方法:采用CTX腹腔注射法复制白细胞减少症模型,以NCTD干预模型大鼠,全自动血细胞分析仪检测外周血白细胞(WBC)数量,骨髓组织作切片HE染色观察病理改变,流式细胞术检测骨髓细胞增殖周期、凋亡率,免疫组织化学法检测骨髓组织中凋亡相关蛋白BCL-2、BAX的表达。结果:NCTD干预白细胞减少症模型后,外周血WBC显著升高;模型大鼠骨髓骨髓组织结构破坏,造血细胞明显减少,NCTD干预后促进骨髓组织细胞结构显著恢复;NCTD可促使白细胞减少症模型大鼠骨髓细胞增殖及周期的转化,显著抑制CTX所诱导的骨髓细胞凋亡与坏死,上调抑凋亡蛋白BCL-2表达,下调促凋亡蛋白BAX的表达。结论:NCTD可刺激CTX诱导的白细胞减少症模型大鼠骨髓造血,促进外周血白细胞水平的恢复,其机制可能与NCTD调控骨髓细胞周期、抑制细胞凋亡等有关。

氢醌对K562细胞着色性干皮病基因D甲基化的影响

目的:了解不同剂量苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞株K562细胞着色性干皮病基因D(XPD)甲基化水平的影响。方法:分别以终浓度为0、15、30和60μmol/L HQ溶液重复处理K562细胞48 h,采用MTT比色法检测K562细胞增殖能力,采用亚硫酸氢盐处理后测序法检测XPD甲基化水平;观察各组细胞存活率及甲基化率。结果:HQ 0、15、30、60μmol/L处理后,K562细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(85.46±0.60)%、(63.46±7.02)%和(51.20±6.49)%,15μmol/L组与0μmol/L组比较,差异无统计学意义(P>0.05),30μmol/L和60μmol/L组与0μmol/L组比较,差异有统计学意义(P<0.05);XPD基因甲基化水平分别依次为1.03%(3/290)、0.34%(1/290)、0.34%(1/290)和0.70%(2/290),15、30、60μmol/L组与0μmol/L组比较,差异无统计学意义(χ2=1.531,P>0.05)。结论:HQ对K562细胞生长有明显的抑制作用,但对细胞中XPD基因甲基化水平无影响。

氢醌对K562细胞着色性干皮病基因D转录及表达的影响

目的:探讨苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞株K562细胞中着色性干皮病基因D(XPD)mRNA转录及蛋白表达的影响。方法:分别用终浓度为0、15、30、60μmol/L HQ溶液处理K562细胞48 h后,单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤效应,Taqman探针实时荧光定量PCR法检测XPD基因mRNA转录水平,蛋白印迹法分析XPD基因蛋白表达水平,观察荧光显微镜下细胞的尾矩,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果:不同浓度HQ处理后,各组细胞尾矩与0μmol/L HQ组比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度HQ处理后,K562细胞中XPD基因mRNA和蛋白相对表达量与0μmol/L HQ组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HQ处理K562细胞48 h后,细胞中DNA有明显的损伤效应,但XPD基因mRNA及蛋白无变化。

DNA损伤修复基因甲基化与肿瘤关系的研究进展

机体细胞内DNA会受到多种因素的影响,导致其化学结构或编码特性的改变,如电离辐射、化学物质、异常代谢产物等都会导致DNA损伤,这种损伤若不能及时得到修复,就会影响机体正常活动,进而诱发一系列遗传疾病的产生。正常机体具有完善的DNA损伤修复机制,修复由各种原因导致的DNA损伤,其主要机制有两种：一种是损伤恢复（reversal of damage）,即损伤直接被移除,

WRN基因在氢醌致U937细胞DNA损伤中的作用

目的 WRN基因在氢醌(HQ)致U 937细胞DNA损伤中的作用。方法常规培养白血病细胞U 937至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以10、20、40μmol/L HQ染毒24h及48h,以等体积的完全培养基培养的细胞组为完全空白对照组。采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用免疫印迹法检测WRN蛋白的相对表达量。结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效用随染毒浓度增加而增大,48h比24h的DNA损伤程度增加,呈时间—剂量依赖性(P<0.05);(2)免疫印迹结果显示,HQ染毒24h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P>0.05);HQ染毒48h高剂量组分别与空白组、低剂量、中剂量中比较,WRN蛋白相对表达量呈降低的趋势(P<0.05)。结论 HQ诱导WRN蛋白表达下调影响U 937细胞DNA损伤修复。

苯代谢物氢醌对K562细胞WRN基因转录及表达的影响

目的探讨苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞K562中解旋酶WRN基因mRNA转录及蛋白表达的影响。方法常规培养白血病细胞K562至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以15、30、60μmol/L浓度HQ重复间隔染毒48及72 h,以等体积的PBS培养的细胞组为空白对照组。采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测WRN基因mRNA水平,采用免疫印迹分析WRN基因蛋白表达水平,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效应随染毒浓度增加而增大,72 h比48 h的DNA损伤程度增加,呈时间-剂量依赖性;(2)HQ染毒48 h,WRN基因mRNA在各组差异均无统计学意义(P>0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),低、中剂量组与高剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与中剂量组组间差异无统计学意义(P>0.05);(3)HQ染毒48 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P>0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较,蛋白表达随着染毒剂量增大而降低,差异有统计学意义(P<0.05),HQ各剂量组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HQ可导致K562细胞DNA损伤,且呈时间-剂量依赖性,其机制可能与HQ下调WRN基因mRNA转录及蛋白的表达有关。

XPD基因在氢醌致U937细胞DNA损伤修复中的作用

目的探讨XPD基因在氢醌(HQ)致U937细胞DNA损伤修复中的作用。方法选择5、10、20、40、80μmol/L HQ分别对U937细胞染毒12、24、48 h,根据各浓度下U937细胞活性,选择10、20、40μmol/L HQ染毒24、48 h进行后续实验。取10、20、40μmol/L HQ染毒24、48 h U937细胞,分别设为HQ低、中、高浓度组,另取未染毒U937细胞作为空白对照组,采用单细胞凝胶电泳检测各组细胞尾矩(TM)、Oliv尾矩(OTM),采用Western blotting法检测各组XPD蛋白相对表达量。结果与空白对照组比较,HQ低、中、高浓度组染毒24、48 h TM和OTM均明显增大(P均<0.05);与同组染毒24 h比较,HQ低、中、高浓度组染毒48 h TM和OTM均明显增大(P均<0.05),染毒48 h HQ低、中、高浓度组TM和OTM依次升高(P均<0.05)。与空白对照组比较,HQ低、中、高浓度组染毒24 h XPD蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),且HQ高浓度组明显高于HQ低浓度组(P均<0.05);染毒48 h,HQ高浓度组XPD蛋白相对表达量明显高于空白对照组及HQ低、中浓度组(P均<0.05),但空白对照组及HQ低、中浓度组两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05);HQ各浓度组染毒48 h XPD蛋白相对表达量与染毒24 h比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 XPD基因表达上调可促进HQ致U937细胞DNA损伤修复。

苯亚急性染毒对大鼠造血系统的影响及其机制

目的探讨苯亚急性染毒对大鼠造血系统的影响及其机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、苯低剂量组、苯中剂量组和苯高剂量组,每组6只。苯低、中、高剂量组分别按照体质量给予200、400、800 mg/kg苯溶液灌胃,空白对照组未经任何处理,溶剂对照组给予等量玉米油灌胃;均1次/d,连续处理28天。采用全自动血细胞分析仪检测血常规,处死大鼠后计算肝脏、脾脏系数,观察股骨病理改变及骨髓、外周血细胞形态改变;采用单细胞凝胶电泳法检测骨髓及外周血细胞DNA损伤情况,记录尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)。结果苯低、中、高剂量组白细胞均低于空白对照组和溶剂对照组,苯高剂量组红细胞均低于其余各组,苯中、高剂量组血红蛋白均低于其余各组(P均<0.05);各组间血小板比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各组肝脏、脾脏系数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。空白对照组、溶剂对照组股骨病理改变及骨髓、外周血细胞形态改变基本一致;苯低、中、高剂量组股骨病理显示造血组织面积减小,骨髓、外周血细胞有较多中毒颗粒、空泡,随着苯染毒剂量的增加,上述改变越明显。苯低、中、高剂量组骨髓及外周血细胞TM和OTM依次升高,且均高于空白对照组、溶剂对照组(P均<0.01)。结论苯亚急性染毒对大鼠骨髓具有毒性损伤作用,且呈浓度依赖性,可能与其导致外周血、骨髓细胞发生DNA损伤有关。

氢醌染毒对红白血病细胞株K562细胞周期的影响及其机制

目的探讨氢醌(HQ)对红白血病细胞株K562细胞周期的影响及其作用机制。方法取生长至对数期时K562细胞,设空白对照组及HQ染毒低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别以HQ终浓度为0、15、30、60μmol/L处理,各实验组间隔处理72 h后,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹法检测CDC25A、CDK2、Cyclin E、Cycli-n A、p53、p21、PCNA等细胞周期相关蛋白表达。结果空白对照组及HQ染毒低剂量组、中剂量组、高剂量组G0/G1期细胞所占比例分别为55. 90%±2. 71%、40. 16%±3. 34%、29. 97%±1. 23%、32. 84%±0. 93%,S期细胞比例分别为43. 42%±2. 61%、57. 01%±3. 50%、66. 87%±1. 77%、66. 66%±0. 31%,G2/M期细胞比例分别为0. 73%±0. 78%、3. 27%±2. 05%、4. 40%±5. 07%、0. 18%±1. 54%,与空白对照组比较,各染毒剂量组G0/G1细胞比例下降,S期细胞比例增加(P <0. 05),G2/M期细胞差异无统计学意义(P> 0. 05)。与空白对照组比较,CDC25A蛋白表达在HQ染毒各剂量组降低(P <0. 05),HQ染毒各剂量组间高剂量组<中剂量组<低剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,Cyclin E、PCNA蛋白表达在HQ染毒低剂量组差异无统计学意义,在中、高剂量组表达量降低(P <0. 05),HQ染毒各剂量组间高剂量组<中剂量组<低剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,p53蛋白在HQ染毒低、中剂量组表达量增高(P <0. 05),在高剂量组表达差异无统计学意义,HQ染毒各剂量组间高剂量组<中剂量组<低剂量组(P <0. 05)。CDK2、Cyclin A和p21蛋白在空白对照组与HQ染毒各剂量组间的表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 HQ致K562细胞周期发生S期阻滞,可能与其下调CDC25A、Cyclin E、PCNA蛋白表达有关。

氢醌HQ对K562细胞WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响

目的:探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对K562细胞中WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响。方法:K562细胞生长至对数期后,设置空白对照组,低(15μmol/L)、中(30μmol/L)、高(60μmol/L)剂量HQ组,重复间隔染毒72 h,空白对照组加入等量的PBS培养。MTT比色法检测细胞存活率;重亚硫酸盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测细胞WRN基因甲基化水平;FQ-PCR法检测DNMT1基因的m RNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT1基因的蛋白表达情况。结果:(1)MTT结果显示,细胞存活率随着HQ染毒浓度增加而下降(P=0.000)。(2)BSP检测结果显示,低、中、高剂量HQ组甲基化率与对照组比较,差异有统计学意义(χ~2=7.50,P=0.048)。(3)与对照组比较,低、中、高剂量HQ组DNMT1基因m RNA及蛋白表达量呈下降趋势(P=0.000)。结论:HQ染毒K562细胞可引起WRN基因甲基化水平增高,同时下调DNMT1基因的表达。