植物乳杆菌1201对DSS诱导结肠炎的缓解作用

结肠炎是一种具有复发特性的炎症性肠病,近几十年来发病率不断上升。越来越多的研究表明益生菌可缓解结肠炎。本研究通过建立葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导的结肠炎小鼠模型,探究植物乳杆菌1201(Lactobacillus plantarum 1201)对DSS诱导结肠炎的缓解作用。将实验小鼠分为正常组、模型组、1201组,对除正常组外其余组小鼠诱导结肠炎,同时对1201组小鼠每日灌胃0.2 mL的1×109CFU/mL植物乳杆菌1201,持续12 d。通过H&E染色观察小鼠结肠形态,采用荧光定量PCR技术检测小鼠结肠组织NF-κB、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-22、IFN-γ、IL-17A、TGF-β1)和结肠紧密连接蛋白(ZO-1、Ocludin和Claudin-3)的mRNA表达水平;此外,使用16S rRNA高测序技术检测小鼠肠道菌群的变化,采用代谢组学分析肠道代谢物的变化。结果表明,植物乳杆菌1201通过降低肠道Firmicutes/Bacteroidetes的比率,增加乳酸杆菌Bifidobacterium、Lactobacilluse和Akkermansia的相对丰度,减少Escherichia的相对丰度,改善了肠道菌群的平衡。同时,植物乳杆菌1201可以抑制NF-κB和炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-22、IFN-γ)mRNA水平的上调,增加结肠紧密连接蛋白(ZO-1、Ocludin和Claudin-3)的mRNA表达水平,并增加有益代谢物的血清水平,包括α-生育酚(α-Tocopherol)和L-岩藻糖(L-Fucose)。本研究结果表明植物乳杆菌1201具有缓解结肠炎的潜在能力。

夏秋红茶的再加工与冷泡茶制备研究

目的探索利用夏秋红茶再加工制作冷泡茶的可行性和最佳工艺条件。方法利用纤维素酶处理夏秋红茶,通过单因素实验和正交实验筛选最佳酶解条件,测定处理前后红茶中主要化学成分和挥发性风味物质变化,并对其冷泡性能进行评价。结果优化获得了夏秋红茶再加工的工艺条件为:纤维素酶添加量为1.2 kU/g,料液比为5:8(g:mL),处理时间为24h,处理温度为25℃。纤维素酶加工后茶叶中的主要滋味物质和风味物质含量以及冷泡性能等品质指标均有所提高。冷泡茶汤中的可溶性总糖含量由4.33%升高至9.35%,水浸出物含量由26.64%升高至35.73%。在挥发性风味物质方面,加工后茶叶中苯甲醇(芳香、果香)、苯乙醇(玫瑰花香、蜜香)和水杨酸甲酯(清香、花香)等特征香气物质的相对含量升高。冷泡性能方面,加工后的红茶水浸出物冷泡溶出大幅增加和可溶性总糖则可完全冷泡溶出,产品适于冷泡饮用。结论本研究通过纤维素酶再加工提升夏秋红茶品质,制备冷泡茶,不仅能实现夏秋茶资源的充分利用,也为冷泡茶的生产提供了稳定的原料供应。

双歧杆菌原生质体的制备及其转化系统的建立

考察了长双歧杆菌WBL001菌体生长状态、酶解浓度、时长、温度以及不同渗透压稳定剂等因素,获得长双歧杆菌WBL001原生质体制备及再生的优化条件:长双歧杆菌以3%接种量活化至MRS培养基,培养至对数中期(OD600∶1),5μg/mL变溶菌素,37℃孵育30 min,以原生质体稳定液SMM为反应缓冲液,原生质体生成率达到81%,其再生率达到48%;在此基础上,通过聚乙二醇PEG融合,将穿梭表达载体pBAX转入双歧杆菌原生质体,成功建立双歧杆菌转化体系。

高黏附力双歧杆菌的筛选与鉴定

利用体外细胞培养法,从实验室现有的10株双歧杆菌中筛选具有较强粘附能力的菌株。采用革兰氏染色法和平板计数法,评价了这10株双歧杆菌对HT-29细胞的粘附性能,通过测定这10株双歧杆菌的16S rRNA基因序列(16S rDNA)进行分类学鉴定。结果显示,WBBI01,WBBI02,WBIN03,WBBI06具有极强的黏附力,其黏附指数分别达1.97×103,2.17×103,3.57×103,1.88×103。经16S rDNA测序鉴定WBBI01,WBIN03,WBBI06均与两歧双歧杆菌S17有极高的同源性,而WBBI02属于长双歧杆菌。结果表明,双歧杆菌黏附性能具有明显的种属特异性,不同种属双歧杆菌的粘附能力相差极大,以两歧双歧杆菌的黏附性能最强,婴儿长双歧杆菌为最弱。

红莲型水稻细胞质雄性不育花药蛋白质组学初步分析

采用固相pH梯度-SDS PAGE双向电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻的不育系(YTA)和保持系(YTB)单核期花粉总蛋白质进行了分离,通过银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。Image Master 2DV5.0软件可识别约1800个蛋白质点,其中差异表达的蛋白质点数为85。将其中16个差异点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionizaton time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行了肽质指纹图分析,通过采用Mascot软件对MSDB数据库查询,其中9个蛋白质点得到了鉴定。YTA相对于YTB有部分参与碳代谢和淀粉合成的酶缺失或表达量降低,这些蛋白质分别是ADP-葡萄糖磷酸转移酶(AGPase),UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶,乙酰辅酶A合成酶和二氢硫辛酸脱氢酶等。其中AGPase是参与淀粉合成的蛋白,与花粉发育密切相关。乙酰辅酶A合成酶和二氢硫辛酸脱氢酶是细胞内合成乙酰辅酶A的重要酶,而乙酰辅酶A是进入TCA循环的重要底物,乙酰辅酶A的缺乏可以导致TCA循环不能顺利进行,从而不能提供小孢子发育所需要的大量能量。YTA相对于YTB部分参与碳水化合物代谢的重要酶缺失或表达量降低,有可能导致因线粒体提供的能量不足,淀粉合成受阻,因而花粉不能正常发育。

红莲型水稻不育系和保持系线粒体基因组BAC文库的构建

以红莲型 (HL )细胞质雄性不育系和保持系为材料 ,构建了水稻线粒体基因组的 BAC文库。每个文库保存约2 30 0个菌落 ,外源插入片段介于 9～ 2 5 kb之间。以线粒体基因为探针对文库进行菌落原位杂交验证 ,均筛选到了阳性克隆。构建的两个文库为进一步研究水稻线粒体基因组的结构特点 。

Viili中乳酸菌的分离、鉴定及其产胞外多糖的初步研究

从Viili中分离得到两株具有较高产胞外多糖能力的乳酸菌,其产多糖量可达111.7mg/L和106.5mg/L。对菌株I、菌株II进行16SrDNA序列分析及生理生化鉴定。16SrDNA序列测序和API50CHL试纸条鉴定结果表明:两株菌分别为Lactobacillus paracaseissp.paracasei和Lactobacillus delbrueckii ssp.bulgaricus。

水稻花药总蛋白质双向电泳方法的改良与优化(简报)

双向电泳作为蛋白质组学核心技术之一．目前已广泛地应用在植物领域，并且成功应用于水稻代谢和调节等方面的研究。谢锦云等利用溶液法提取温敏核不育水稻花药总蛋白质．利用pH3—10线性胶条分离，经银染显色后检测到约1．000个点。本文通过对传统双向电泳方法进行改良和优化．得到了一种适合于分析水稻花药总蛋白质的双向电泳（two—dimensional electrophoresis．2DE）的方法，第一向采用固相胶条在等电聚焦分离．第二向采用SDS—PAGE分离。

水稻红莲型细胞质雄性不育系小孢子不同发育时期花药总蛋白质比较分析

采用双向凝胶电泳对水稻红莲型细胞质雄性不育的不育系小孢子发育单核期和二核期花药总蛋白进行了分离，通过银染显色，获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱，且单核期和二核期花药总蛋白质在双向电泳胶上分布的图谱十分相似。PDQuest 2DE图像分析软件在等电点（pI）3．0—10．0、分子量（M．W．）9．0—98．0kD之间可识别约1800个蛋白质点。比较分析发现单核期和二核期花药中共有241个差异表达的蛋白质点，其中仅在单核期中表达的点数为125，仅在二核期中表达的为13点；表现为表达量差异的105点，其中在二核期表达下调的点数为70点，表达上调的为33点。还对蛋白质点集中的区域（p14．5—8．0，M．W．25．0—70．0kD）中的41个差异蛋白质点进行了分子量和等电点分析。

显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的提取纯化

[目的]优化显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的提取纯化工艺。[方法]采用水提法从显齿蛇葡萄中提取二氢杨梅素,并对二氢杨梅素进行了纯化和检测。通过单因素试验和正交试验优化工艺提取条件。[结果]最佳工艺条件为:提取温度为90℃,料液比为1∶10(g∶ml),提取时间为60 min,在此工艺条件下,二氢杨梅素的得率最大;重结晶5次后总黄酮纯度由原来的68.51%提高至91.0%。[结论]该二氢杨梅素的提取纯化工艺简单,成本低、原料来源易,作为抗氧化剂生产工艺前景看好。

红莲型细胞质雄性不育水稻线粒体DNA的AP-PCR分析

为了研究红莲型细胞质雄性不育与线粒体基因组的关系 ,以水稻红莲型粤泰细胞质雄性不育系 A和保持系 B及杂种一代 F1 为材料 ,应用 AP- PCR分析 ,用 10个单引物对其线粒体 DNA进行扩增。实验结果表明 ,不同的引物在 3种材料间均有不同程度的差异 ,为红莲型细胞质雄性不育分子机理的研究提供了线索 ;此外 ,在引物 6 F1的扩增图谱中找到一条在 YTA和 F1 中特异的带 TAF6 F 2 ,Sounthern分析 TAF6 F2 不育胞质的特异性 ,可能与红莲型水稻细胞质雄性不育性状的形成有关。

一种适用于线粒体基因表达分析的cDNA-RAPD方法

由于植物线粒体DNA分子结构复杂 ,并在与细胞核共进化的过程中形成了自己独特的表达系统 ,迄今仍没有一种较好的能够对植物线粒体基因表达进行分析的方法。本文依据线粒体RNA的自身特点 ,对已用于分析真核mRNA的差展方法进行了改进。采用随机六聚体引物取代oligo(dT)n ,从而将线粒体RNA及其他各类无poly(A)尾的mRNA纳入到可直接研究的范围 ,发展了一种适用于线粒体基因表达分析的方法。

双歧杆菌脂磷壁酸生物学活性研究进展

本文综述了双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)的免疫激活、抗肿瘤、抗突变、抗衰老及粘附等重要生物学功能。

Serpin多抗制备和产Serpin的双歧杆菌菌株的初步筛选

从长双歧杆菌WBL001基因组中克隆了serpin基因,构建重组Serpin蛋白的原核表达体系pBX2-serpin,纯化表达产物作为抗原,免疫小鼠制备Serpin的多克隆抗体。采用偶联Serpin的磁珠纯化多克隆抗体,并探究了不同溶剂对抗体洗脱效率的影响。纯化的多抗用于斑点杂交筛选产Serpin蛋白的菌株。结果表明:磁珠纯化多克隆抗体以1 mol/L NaOH的洗脱率最高,达50%;纯化后的Serpin抗体消除了与部分乳酸菌和致病菌的非特异性反应;采用斑点杂交方法从11株双歧杆菌中筛选到婴儿双歧杆菌WBAN07具有类Serpin蛋白。

泡菜中植物乳杆菌的筛选及益生活性研究

从民间自制泡菜中筛选乳酸菌。根据菌落形态,革兰氏染色和溶钙透明圈,分离得到17株乳酸菌菌株,用16S r DNA测序鉴定分离菌株,并测试了其耐酸和耐胆盐能力。结果表明,筛选菌株中WHLP-01、WHLP-02、WHLP-03和WHPE-02四株菌株可以在p H=2.0的环境下生存2 h;WHLP-01与WHLP-02两株菌株可以在0.3%胆盐浓度下存活;其中菌株WHLP-01属植物乳杆菌,其对常见的8株致病菌均有明显的抑制效果和降胆固醇能力,可以作为微生态制剂的候选菌株深入研究。

双歧杆菌表达系统的研究进展

双歧杆菌作为表达外源基因的宿主备受关注,成为近年来研究的热点。本文从双歧杆菌表达系统的组成、外源蛋白的表达等角度综述了近期的研究成果,对该系统在口服疫苗和抗肿瘤方面的研究及应用前景进行了展望。

量子点在食源性致病微生物检测中的应用

量子点在生物、医学领域,尤其是在微生物快检中的应用引起了广泛关注。本文对量子点的特性、多元检测中的应用以及量子点在检测食源性致病微生物中的应用进行了综述。

水稻线粒体coxⅡ基因转录本的编辑位点研究

RNA编辑是指由RNA水平的核苷酸改变所引起的密码子发生变化的一种预定修饰,它的发现是近年来对分子生物学中心法则的重要补充。本文以红莲型(HL)水稻细胞质雄性不育系粤泰A,保持系粤泰B和杂种F_1(不育系A与恢复系71068的杂交一代)为材料,首次研究了线粒体基因coxⅡ转录本的编辑位点。coxⅡ基因的转录本有15个编辑位点,其中有14个发生在密码子的第一和第二位点。这14个位点的编辑可改变氨基酸的种类,并导致所编码蛋白的疏水性以及所编码蛋白在氨基酸序列上的保守性增加。

人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因的克隆、表达与功能研究

目的克隆和表达人纤溶酶原(plasminogen,Plg)的丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因μplg,并进行重组蛋白的纯化及功能探索。方法用PCR方法从p DNR-plg质粒上扩增μplg,构建原核表达载体p ET22b(+)-μplg,IPTG诱导重组蛋白表达后复性,再经Ni+-NTA树脂亲和层析纯化,通过与双歧杆菌外膜蛋白Serpin的共孵育实验来探索μPlg的功能。结果 PCR成功扩增出了680 bp的人纤溶酶原Plg的SP区基因μplg,测序正确后与表达载体p ET22b(+)重组,重组质粒p ET22b(+)-μplg在大肠杆菌BL21中成功表达出分子量约为35 k D的μPlg蛋白质,经纯化后的蛋白纯度高达约90%以上,与Serpin蛋白共孵育后得到了二者的复合物。结论人纤溶酶原μPlg的成功克隆、表达及纯化对于研究SP区功能和与双歧杆菌的黏附作用有重要意义。

双歧杆菌插入失活载体的构建

目的构建双歧杆菌serpin基因插入失活载体,为探究双歧杆菌外膜蛋白Serpin功能做准备。方法在实验室前期构建的p MD18-T/serpin质粒中serpin基因片段的SacⅡ酶切位点插入氯霉素抗性基因cmr,构建双歧杆菌p MD18-T/serpincmr,插入失活载体。结果 PCR成功扩增出了氯霉素抗性基因cmr且测序结果正确;p MD18-T/serpin质粒经SacⅡ单酶切、去磷酸化后与cmr连接,通过菌落PCR、酶切验证和测序显示cmr已成功插入serpin基因片段中。结论成功构建了双歧杆菌serpin基因插入失活载体p MD18-T/serpin-cmr。