顶空气相色谱法测定瑞替加滨原料药中残留溶剂

建立了测定瑞替加滨原料药中残留溶剂乙醇、正己烷、四氢呋喃、三乙胺的顶空气相色谱方法。采用氢火焰离子化检测器,以N,N-二甲基甲酰胺为样品溶剂,通过对色谱条件优化,建立了以DB-624为分析柱、110℃为平衡温度、15 min为平衡时间的残留溶剂测定方法。经方法学验证,上述4种溶剂的方法检出限依次为0.007 5%、0.000 48%、0.002 4%、0.01%;峰面积的相对标准偏差均小于2.1%;平均回收率为100%～102%;4种溶剂的线性系数均大于0.995。结果表明,该方法的检测灵敏度高、精密度好、准确度高、线性关系良好,能够满足对瑞替加滨质量的控制要求。将该方法应用于3批瑞替加滨原料药的残留溶剂检测,均只检出乙醇和正己烷,且乙醇和正己烷的最高残留量分别为0.149%和0.022%,均未超出限量规定。

石杉碱甲的研究进展

石杉碱甲(huperzine A,HupA)是来源于蕨类植物蛇足石杉的一种倍半萜生物碱,为高效、高选择性、可逆性的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。HupA在治疗阿尔茨海默病(Alzheimersdisease,AD)方面的显著疗效,近年研究还证明HupA有神经保护和预防化学武器的潜力,引起世界各国药学工作者广泛关注和研究。现系统的综述石杉碱甲在药学研究各领域中的研究进展。

磁性二氧化硅微球的表面修饰及其在植物基因组核酸纯化中的应用

在利用自主研发的专利技术制备球形磁性硅胶微球的基础上,对磁性硅胶微球进行表面改性,使其表面分别键合硅羟基、环氧基、邻二醇基和羧基等官能团,并对表面官能团进行了定量研究。以小牛胸腺基因组脱氧核糖核酸(DNA)为模型化合物,研究了核酸在不同表面官能团的磁性硅胶上的吸附和脱附行为,发现表面具有硅醇基的磁球对DNA的回收率最高。将改性后磁性微球应用于玉米DNA的提取,得到了平均长度大于8kb的高纯度基因组DNA。与传统的有机溶剂抽提法相比,基于磁性微球的核酸固相萃取法具有快速简便、省时省力、易于自动化的特点,适合于大规模植物基因组DNA的样品制备。

原子层沉积法制备巯丙基硅胶及其对溶液中钯(Ⅱ)离子的吸附行为

采用原子层沉积技术，在3～5kPa真空和125—150℃的反应条件下，使γ-巯丙基三甲氧基硅烷（MPTMS）、γ-巯丙基三乙氧基硅烷（MPTES）和γ-巯丙基二甲氧基甲基硅烷（MPDMMS）3种巯丙基硅烷试剂气化，并在三乙胺的催化作用下，分别将其键合于多孔硅胶表面，制得贵金属钯（Ⅱ）的高效吸附剂．分别采用FTIR、^13C和^29Si固体核磁、元素分析、热重分析和氮气吸附-脱附等技术研究了巯基硅胶的键合模式和功能基团键合量．用分光光度法研究了在pH=3．0条件下水溶液中Pd（Ⅱ）离子在巯基硅胶上的吸附行为．结果表明，在MPTMS，MPTES和MPDMMS所修饰的硅胶中，硅烷试剂的功能基团均以双齿键合结构为主，表面键合量分别达到2．76，2．53和2．70μmol／m^2．对Pd（Ⅱ）离子的吸附遵从Langmuir等温吸附方程，饱和吸附量分别达到5．45，4．21和4．81μmol／m^2，Pd／S的摩尔比分别为1．44，1．35和1．39．原子层沉积法制备的巯丙基硅胶基质钯吸附剂的巯基键合密度和对钯（Ⅱ）离子的吸附容量均比传统的有机溶剂介质法高．

三种环糊精对白藜芦醇的增溶作用及紫外照射下稳定性的影响

采用紫外光谱、相溶解度曲线和1H NMR考察了3种环糊精(β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和2,6-二-O-甲基-β-环糊精)对白藜芦醇的增溶作用及紫外照射稳定性的影响。结果表明,3种环糊精均可与白藜芦醇形成1∶1的包合物。其中,羟丙基-β-环糊精对白藜芦醇的增溶效果最好,还可在一定程度上提高白藜芦醇的紫外照射稳定性。另两种环糊精则降低了白藜芦醇的稳定性。

β-氨基酸对映体在键合型配体交换色谱固定相上的分离

制备了以L-α-氨基酸为手性配体和球型多孔硅胶为基质的键合型手性配体交换色谱固定相,用于β-氨基酸对映体的拆分.考察了硅胶基质、配体、流动相pH值、中心金属离子浓度和流动相阴离子等因素对5种β-苯丙氨酸对映体分离的影响,由此确立最佳色谱分离条件为：以 BaseLine 硅胶为基质键合L-羟脯氨酸的手性固定相, 5.0 mmol/L和pH 4.6 的CuSO4溶液为流动相,紫外检测波长为254 nm.在此条件下5种β-氨基酸对映体均可在35 min内得到分离,分离因子在1.49～1.77之间.结果表明：该方法操作简便,成本低廉,可用于β-氨基酸对映体的分离和分析.

β-氨基酸对映体在涂敷型手性配体交换色谱固定相上的分离

分别将N-十六烷基-L-羟脯氨酸(C16-L-Hyp)、N-十六烷基-L-脯氨酸(C16-L-Pro)、N-十六烷基-L-丙氨酸(C16-L-A la)涂敷到反相键合硅胶表面,制成涂敷型手性配体交换色谱固定相,应用于5种β-氨基酸的手性分离。考察了固定相中的手性配体的类型和涂敷量、流动相中金属离子浓度、pH及甲醇含量等因素对手性分离的影响。结果表明:在以涂敷0.25μmol/m2C16-L-Hyp的C18硅胶为固定相,以5 mmol/L CuSO4水溶液的(pH 4.6)为流动相的色谱条件下,5种β-氨基酸对映体的分离效果最好,分离因子高达2.46。

2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯的合成与应用

以α D 葡萄糖为原料经过乙酰化、溴化、硫氰酸化三步反应合成了 2, 3, 4, 6 四 O 乙酰基 β D 吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯。用NMR对其进行了表征。考察了相转移催化剂种类及用量、反应时间、溶剂对反应的影响。得出最佳反应条件为:以苯做溶剂,物料摩尔比为n(2, 3, 4, 6 四 O 乙酰基 α D 吡喃溴代葡萄糖)∶n(硫氰酸钾 )∶n(三乙基苄基氯化铵) =1∶2∶1,反应时间为 14h。把它用作柱前衍生试剂拆分异构体,测定了对映体过量 (ee)值,均得到了满意的结果。

雌马醇对映体的高效液相色谱分离

目的:考察色谱条件对 equol 对映体手性分离的影响,建立反相条件下手性流动相添加剂法色谱分离方法。方法:采用高效液相色谱手性流动相法,固定相为 ODS 柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为环糊精水溶液与有机改性剂(甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈)的混合溶液,流速1.0mL·min^(-1),检测波长254nm,柱温为室温。结果:首次用β-环糊精作为手性流动相添加剂成功拆分了 equol 对映体,并确立最佳分离条件:30mmol·L^(-1)β-CD 水溶液(pH 6.4)-乙腈(95:5),分离因子(α)可达1.21。结论:本方法简便易行,操作成本低,可直接放大到制备分离。

二氢麦角碱在极性嵌入反相色谱固定相上的分离行为

二氢麦角碱的4种组分具有不同的药效特性,需适当的分析方法对其在不同剂型药品中的含量进行分析。传统液相色谱方法使用强碱性流动相,严重腐蚀硅胶基质色谱填料,影响色谱柱寿命。合成了极性嵌入反相固定相——C18酰胺固定相,并在中性流动相条件下分离4种组分。考察了流动相组成和pH对二氢麦角碱在C18酰胺固定相上保留行为的影响。在150mm×4.6mmI.D.的C18酰胺色谱柱上,流动相为乙腈-20mmol/LNa2HPO4(30∶70,V/V,pH7.0)的条件下实现了4种组分的基线分离。与传统方法相比,极性嵌入反相固定相可以有效的改善碱性化合物的分离特性和大幅度地延长色谱柱的使用寿命。

基于手性18-冠-6-四羧酸络合作用的毛细管电泳分离β-氨基酸对映体

以D-（-）-酒石酸和一缩二乙二醇为原料，合成了（-）-18-冠-6-四羧酸（18C6H4），并将18C6H4作为手性添加剂，应用于β-氮基酸对映体的毛细管电泳分离。考察了背景电解质溶液（BGE）中18C6H4的浓度、BGE pH值、BGE组成、有机改性剂及运行电压等因素对分离的影响。在优化的分离条件下，即BGE的组成为10mmol／L18C6H4，10mmol／LTris，pH2．20，紫外检测波长为254nm，所测试的5种伊氮基酸的出峰时间均在25min内，分离因子1．04—1．08，分离度0．46～1．52。结果表明该方法简便快速，可方便地用于β-氨基酸对映体的分离和分析。

多孔Fe_2O_3/SiO_2复合磁性微球的合成

采用分散聚合法制备了单分散脲醛树脂 Fe2O3 SiO2的复合微球,研究了不同的反应条件对于复合微球的分散状况和粒径大小的影响。该微球在马弗炉内灼烧后,脲醛树脂成分被除去,得到Fe2O3 SiO2的复合微球,其中的Fe2O3组分一部分转化为磁性γ-Fe2O3。由脲醛树脂 Fe2O3 SiO2复合微球的电镜(SEM)图、Fe2O3 SiO2复合微球的XRD衍射图得知该微球为多孔的磁性复合微球,且具有单分散性。

溶胀法制备含铕配合物的聚苯乙烯荧光微球

用溶胀剂溶胀单分散的聚苯乙烯微球,使稀土配合物铕-二苯甲酰甲烷-邻菲罗啉[Eu(DBM)3phen]渗透进入微球中,制备出含铕配合物的聚苯乙烯荧光微球。系统的研究了制备过程中溶胀剂的选择和用量、Eu(DBM)3phen的用量及溶胀时间对微球形貌和荧光强度的影响。用环境扫描电子显微镜、荧光显微镜和荧光分光光度计对微球的形貌、粒径和荧光强度进行了表征。结果表明,通过条件优化,可以制备出单分散的高亮度荧光微球,微球中铕配合物的最大含量为5.5%,并且荧光微球在pH=1～14范围内均有良好的稳定性,在生物医学领域有很好的应用前景。

十八烷基键合硅胶的原子层沉积法封尾及其在碱性化合物分离中的应用

采用原子层沉积法对十八烷基键合硅胶进行端基封尾。以六甲基二硅氮烷为封端试剂,在250℃下与键合硅胶样品反应6h,制备了对碱性化合物具有高惰性的反相色谱填料。分别以吡啶/苯酚和萘/阿米替林为分子探针,考察了经原子层沉积法和传统液相有机溶剂法封尾处理的十八烷基键合硅胶的色谱性能,并与商品十八烷基硅胶Zorbax SB-C18和Kromasil C18进行对比。结果表明,原子层沉积法封尾的十八烷基硅胶对碱性化合物的分离特性明显优于传统液相法,其色谱性能已超过Zorbax SB-C18,与Kromasil C18相当。本方法无需有机溶剂,操作简便,反应耗时短,易于放大生产,封尾反应完全,应用前景良好。

β-环糊精与中性化合物结合常数的测定

在二元环湖精体系中采用毛细管电泳法测定了β 环糊精与中性化合物的结合常数.在磷酸盐缓冲溶液浓度10mM,硫酸化环糊精的浓度为2.5mM,pH为7.20的条件下,测得的β 环糊精与1 萘酚和2 萘酚的结合常数分别为80.50M-1,720.99M-1,519.00M-1,并将比测定值与光谱法测定值进行了比较.结果表明,本文采用的方法快速可靠,适用于测定中性环糊精与中性化合物的结合常数.

基于磁性微球的基因组核酸提取及其在中药材真伪鉴别和亲缘关系分析中的应用

为从分子水平上对中药材质量进行控制,基于磁性微球对中药材核酸进行纯化及后续生物鉴定,采用磁分离技术提取高纯度的核酸模板,以高磁响应性、粒径均一的超顺磁性四氧化三铁微球为固相载体,在聚乙二醇和氯化钠等的协同作用下,对根、茎、叶、花、果实、种子类中药材基因组核酸进行提取;分别提取丹参和柴胡的基因组核酸,并对其进行聚合酶链式反应扩增（PCR）和随机扩增多态性分析（RAPD）,用于对丹参的真伪鉴别和对柴胡进行亲缘关系分析。结果表明：经提取,获得了纯度较高（OD260 nm/OD280 nm介于1.6~2.0）的中药材核酸模板;通过扩增叶绿素rpl16基因片段,可有效鉴别丹参及其伪品牛蒡;采用3个有效随机引物,可从基因水平上分析4个柴胡品种的亲缘关系远近。

β-环糊精与白藜芦醇结合常数的亲和毛细管电泳测定

应用亲和毛细管电泳,在β-环糊精(β-CD)、硫酸化β-环糊精(SCD)二元环糊精体系中同时测定β-CD、SCD与顺、反式白藜芦醇和顺、反式白藜芦醇糖苷的结合常数。结果表明β-CD与4种单体形成了摩尔比为11的包合物。比较了4种单体与β-CD结合常数的大小,并对包合机理进行了讨论。

β-氨基酸对映体的配体交换快速色谱制备分离及其固相萃取法纯化

目的:建立重要医药中间体β-氨基酸对映体的简便易行的制备方法。方法:制备方法由手性配体交换色谱分离和固相萃取法两步组成。首先合成 L-羟脯氨酸硅胶键合手性固定相,用于快速色谱中3-羟基-4-甲氧基-β-苯丙氨酸对映体的制备分离,考察了流动相中 Cu^(2+)浓度、样品体积等因素对分离的影响。然后分别采用基于强酸型阳离子交换树脂和十八烷基键合硅胶(C_(18))的固相萃取法(SPE)对制备得到的β-氨基酸对映体进行纯化以除去所含的 Cu^(2+)。考察了淋洗液组成、pH 和有机改性剂含量对去除 Cu^(2+)和氨基酸回收率的影响。结果:配体交换快速色谱分离β-氨基酸对映体的最佳条件为0.1 mol·L^(-1)硫酸铜溶液作为淋洗液,进样为氨基酸饱和溶液4 mL;强酸型阳离子交换树脂 SPE 法除铜的最佳条件为 pH 3.0的0.1 mol·L^(-1)氯化钠溶液,50%乙醇;C_(18) SPE 法除 Cu^(2+)的最佳条件为 pH 3.0的水溶液,20%甲醇。结论:β-氨基酸对映体可以通过配体交换快速色谱分离和固相萃取法除铜的两步法来制备,方法经济、简便、快速,适合于实验室规模制备和工业化生产。

基于磁性微球的固定化金属亲和载体及其在蛋白质/多肽纯化中的应用

采用模板法制备的单分散磁性硅胶微球,经过表面修饰偶联上亚氨基二乙酸(IDA),与过渡金属离子Cu2+螯合,制成一种新型的磁性固定化金属亲和纯化载体。用牛血清白蛋白(BSA)作为模型进行磁性固定化金属亲和吸附蛋白的研究,结果表明,BSA在磁性亲和载体上的吸附可用Langmuir吸附方程描述,对BSA的饱和吸附量为90mg/g。将磁性亲和载体用于带有组氨酸标签的镇痛抗肿瘤多肽(analgesic-antitumorpeptide,AGAP)纯化,在未经过滤的细胞裂解液中可以将AGAP一步纯化,非特异性吸附低,操作简便,完全适用于含有组氨酸标记的重组多肽或蛋白的分离纯化。