miR-199a调控Sirt1对SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响

目的探讨miR-199a调控Sirt1对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧化损伤的影响。方法采用H_(2)O_(2)(1200μmol/L)分别刺激体外培养的SH-SY5Y细胞3、6、9、12、15 h,MTT法检测细胞活力,DCFA-DA探针法检测细胞内ROS水平;miR-199a模拟子和抑制物分别转染SH-SY5Y细胞48 h,Western blot检测Sirt1蛋白的表达;miR-199a模拟子和抑制物分别转染SH-SY5Y细胞48 h后采用H_(2)O_(2)(1200μmol/L)刺激12 h,生化法检测细胞超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。结果不同时间H_(2)O_(2)刺激SH-SY5Y细胞时细胞活力,细胞内超氧化物歧化酶含量升高,且呈现时间依赖性;miR-199a模拟子可抑制SH-SY5Y细胞Sirt1蛋白表达,miR-199a抑制物增加SH-SY5Y细胞Sirt1蛋白表达;当SH-SY5Y细胞处于氧化损伤时,miR-199a模拟子可降低细胞超氧化物歧化酶活性和升高丙二醛含量,miR-199a抑制物增加细胞活力、降低细胞内超氧化物歧化酶含量、升高超氧化物歧化酶活性和降低丙二醛含量。结论当SH-SY5Y细胞处于氧化损伤状态时,miR-199a调控Sirt1进一步加重SH-SY5Y细胞氧化损伤。

三七总皂苷对D-半乳糖致H9c2细胞衰老的保护作用研究

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng Total Saponins)对D-半乳糖致心肌细胞株H9c2细胞衰老的保护作用及其可能机制。方法:50 mmol/L D-半乳糖处理H9c2细胞建立衰老模型。不同浓度三七总皂苷(5、25、50μg/mL)预处理细胞4 h,再加入D-半乳糖继续培养24 h。β-半乳糖苷酶染色法鉴定细胞衰老程度,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen species,ROS)水平,生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Hochest染色分析细胞凋亡情况。结果:与正常对照组比较,D-半乳糖组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数目显著增多,ROS荧光强度显著上升,SOD活性降低,MDA含量增加,Hochest染色发现细胞核染色质浓缩和凝聚,并可见大量凋亡小体;与D-半乳糖组比较,不同浓度三七总皂苷组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数目显著减少,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,ROS荧光强度显著降低,细胞核染色质浓缩和凝聚以及凋亡小体均有所改善。结论:三七总皂苷可通过提高抗氧化能力和减少细胞凋亡来对抗D-半乳糖所致的H9c2细胞衰老。

竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。

竹节参总提物对D-半乳糖致衰老小鼠的影响

目的观察竹节参总提物对衰老小鼠的学习记忆、抗氧化及抗凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、维生素E组和竹节参低、高剂量组。除正常组外,其余各组颈背部皮下注射D-半乳糖建立衰老模型。各给药组分别给予竹节参总提物和维生素E灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,连续7周。第8周进行小鼠学习和记忆能力测试。测试结束后,苏木素-伊红染色观察海马CA1区神经元的形态变化,生化法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,RT-PCR检测脑组织中Bcl-2、Bax mRNA表达。结果竹节参低、高剂量组均能缩短小鼠寻找平台时间,改善小鼠学习记忆能力;显著增强SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量;升高Bcl-2 mRNA、降低Bax mRNA表达水平。结论竹节参总提物具有抗衰老的作用。

不同工艺提取的竹节参皂苷粗提物毒性及其抗炎作用初步研究

目的比较不同工艺提取的竹节参皂苷粗提物的毒性及抗炎效果。方法采用不同工艺分别制备竹节参皂苷粗提物样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6,然后用不同工艺、不同浓度的样品处理RAW264.7细胞,显微镜下观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,一氧化氮(NO)试剂盒检测RAW264.7细胞NO释放量。结果不同样品作用于RAW264.7细胞毒性从小到大依次为:样品4<样品6<样品5<样品2<样品1<样品3。不同样品对脂多糖刺激的RAW264.7细胞NO释放抑制效果依次为:样品4>样品5>样品2>样品6>样品1>样品3。结论 6种不同提取工艺得到的竹节参皂苷粗提物中,泡沫分离法提取的竹节参皂苷粗提物毒性最小,抗炎效果最好。

竹节参皂苷对D-半乳糖致SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用研究

目的研究竹节参皂苷保护D-半乳糖致SH-SY5Y神经细胞损伤的作用及机制。方法采用50g/L的D-半乳糖刺激SH-SY5Y神经细胞,以不同浓度竹节参皂苷(1,5,25μg/mL)和50g/L的D-半乳糖共同孵育SHSY5Y神经细胞24h。JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位,Western blot检测细胞Sirt1蛋白的表达。结果竹节参皂苷能显著升高线粒体膜电位和Sirt1蛋白的表达。结论竹节参皂苷通过激活Sirt1抑制线粒体功能障碍从而改善D-半乳糖对SH-SY5Y神经细胞造成的损伤。

三七总皂苷对H_(2)O_(2)诱导SH-SY5Y细胞的保护作用及机制研究

目的观察三七总皂苷(Total saponins of Panax notoginseng,TPNS)对H_(2)O_(2)诱导SH-SY5Y细胞的保护作用,并探讨其作用机制。方法实验分为正常组,H_(2)O_(2)组(1000μmol/L H_(2)O_(2))和药物干预组(1000μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)+0.1μg·mL^(-1)TPNS,1000μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)+1μg·mL^(-1)TPNS,1000μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)+10μg·mL^(-1)TPNS)。SH-SY5Y细胞孵育24 h后,除正常组和H_(2)O_(2)组外,其余各组加入相应的药物浓度处理12h,除正常组外,其余各组再加入相同浓度的H_(2)O_(2)处理12h。运用MTT检测细胞活力,DCFA-DA探针检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen species,ROS)水平,JC-1检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测Sirt1、Foxo3a、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果TPNS干预组能显著提高细胞活力,降低细胞内ROS含量,改善MMP,升高Sirt1和Foxo3a蛋白表达和提高Bcl-2/Bax比值。结论TPNS可通过Sirt1/Foxo3a和Bcl-2/Bax信号通路对H_(2)O_(2)诱导SH-SY5Y细胞损伤发挥保护作用。

调节Sirt1的microRNA的研究进展

沉默信息调节因子1(Silent information regulator 1,Sirt1)是沉默信息调节因子(Silent information regulator,sir2)家族中的一员,是NAD+依赖的Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶。Sirt1在细胞的生存、凋亡、肿瘤的发生发展、代谢性疾病以及抗衰老等方面扮演着非常重要的角色。microRNA(miRNA)是一组广泛存在于真核生物中的、短小的、不编码蛋白质的单链RNA。近年来研究表明,miRNA能从转录后水平调控Sirt1的表达。因此,调控Sirt1的miRNA可能成为治疗许多疾病的新靶点而倍受研究者们广泛关注。

竹节参总皂苷通过NF-κB通路对LPS致RAW264.7细胞炎症的保护作用研究

目的:探讨竹节参总皂苷对脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用。方法:噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的竹节参总皂苷对RAW264.7细胞活性的影响;一氧化氮(NO)试剂盒法检测竹节参总皂苷对LPS刺激RAW264.7细胞的NO释放量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1-β(IL-1β)分泌;逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS),TNF-α,IL-1βmRNA的表达;免疫印迹法(Western blot)检测胞核内核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:竹节参总皂苷的安全用药范围为≤80 mg·L-1;与LPS模型组相比,竹节参总皂苷各剂量组(0.1,1,10,40 mg·L-1)均能显著降低LPS刺激下RAW264.7细胞NO,TNF-α和IL-1β分泌;竹节参总皂苷各剂量组(10,40 mg·L-1)均能抑制iNOS,TNF-α,IL-1βmRNA表达和NF-κB p65蛋白表达。结论:初步证实了竹节参总皂苷对LPS致RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用,作用机制可能与NF-κB通路有关。

竹节参醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的:观察竹节参醇提物对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨。方法:用不同质量浓度的竹节参醇提物处理RAW264.7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;检测LPS刺激的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)释放量以及竹节参醇提物干预后RAW264.7细胞NO释放量;酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)分泌;聚合酶链反应(PCR)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达;免疫印迹(Western blot)法检测胞浆胞核核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果:竹节参醇提物作用RAW264.7细胞的安全范围<100 mg·L-1;LPS的用药质量浓度为1 mg·L-1;与LPS模型组相比,竹节参醇提物0.1,1,10,40 mg·L-1能有效抑制NO释放(抑制率分别为31.2%,41%,46.1%,55.2%)和抑制TNF-α,IL-1β的分泌(P<0.05或P<0.01);竹节参醇提物10,40 mg·L-1能下调LPS模型组iNOS mRNA表达且抑制NF-κB的核移位。结论:竹节参醇提物对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能与调控NF-κB通路,进而抑制NO的释放,降低TNF-α,IL-1β,iNOS表达有关。

SH-SY5Y神经细胞氧化损伤时microRNA-199a和Sirt1表达变化

目的:观察神经细胞氧化损伤时microRNA-199a(miRNA-199a)和Sirt1表达的变化,探讨miRNA-199a对Sirt1的调控作用。方法:不同浓度双氧水(600μmol/L,1 200μmol/L)刺激体外培养的SH-SY5Y细胞12h造成损伤。MTT检测细胞活力,DCFA-DA探针检测细胞内活性氧水平,Hochest染色分析细胞凋亡,RT-PCR检测miRNA-199a的表达,细胞免疫荧光和Western blot检测Sirt1蛋白水平。结果:600μmol/L和1 200μmol/L双氧水刺激SH-SY5Y后细胞活力显著下降,分别降低27.0%和53.6%;ROS荧光强度细胞凋亡显著上升且具有浓度依赖性;miRNA-199a的表达明显上升,分别上升23.0%和51.0%;Sirt1蛋白表达量下降具有浓度依赖性。结论:双氧水刺激SH-SY5Y神经细胞时miRNA-199a表达升高,Sirt1的表达降低。Sirt1水平降低与miRNA-199a通过调控Sirt1表达参与氧化损伤有关[1]。