骨纤维结构不良和骨化性纤维瘤的组织病理及免疫组化研究

对140例骨纤维结构不良和70例骨化性纤维瘤的临床资料及组织病理进行了复习,其中对近期病例中各15例的组织。作了6种有关的免疫组化染色进行观察。本文对骨纤维结构不良和骨化性纤维瘤的诊断、鉴别诊断及其病变的性质进行了讨论。还对6种免疫组化染色在显示某些组织成分,特别对骨连结蛋白在显示骨母细胞及新生骨质的意义作了探讨。

215例汗腺肿瘤的病理组织学类型及免疫组化研究

本文对２１５例汗腺肿瘤（良性１６８例，恶性４７例）的病理组织学进行了复习，并采用７种抗体（Ｋｅｒａｔｉｎ、ＥＭＡ、ＣＥＡ、Ｓ－１００、ＨＨＦ（３５）、ＡＡＣＴ及ＳＰ１等）对近期的５０例汗腺肿瘤（良性３０例，恶性２０例）进行了免疫组化研究。对汗腺瘤中良性和恶性的鉴别诊断及汗腺肿瘤的分型和命名等作了较深入的讨论。免疫组化结果显示ＣＥＡ和ＥＭＡ（尤其是ＣＥＡ）在汗腺肿瘤的诊断及鉴别诊断上有特殊意义。ＡＡＣＴ和ＳＰ１对汗腺内层细胞的显色，Ｓ－１００和ＨＨＦ（３５）对向肌上皮分化细胞，Ｓ－１００对软骨细胞的显色也有相对的特异性。

软骨性肿瘤的电脑图象分析及其分类识别

应用电脑图象分析法,对各不同恶性度的软骨性肿瘤的组织切片图象进行了处理及测量。发现大视场内的细胞数量,以及单个细胞核的切面周长、面积和圆度等均随各类肿瘤恶性度的增加循序,而出现循序递增或循序递减的光谱带样演变过程。运用线性分类法及自组织分类法,对各类肿瘤的各特征参数进行自动分类识别,亦取得较好结果。表明电脑图象分析结果在软骨性肿瘤良恶性鉴别及分类识别中,可作为一客观的指标。

人雪旺氏细胞的培养及吞噬麻风菌的观察

体外培养了6例人胚外周神经的雪旺氏细胞,均经传代繁殖,1例传至第11代,存活期达110天。雪旺氏细胞与麻风菌混合培养,定期取出部分细胞进行抗酸染色观察。感染10小时后,可见少量(10％)细胞吞噬了抗酸菌。72小时后吞菌细胞数达到高峰(95％以上),在细胞内可形成菌团——麻风球。电镜下雪旺氏细胞表面的微绒毛间及胞浆内见有多量麻风菌。96小时后,雪旺氏细胞出现明显变性及坏死,但细胞内的麻风菌却无明显改变。

CD44s、MMP-9、Ki-67的表达与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系

背景及目的:近期研究表明,细胞表面粘附分子CD44和基质金属蛋白酶类(MMPs)在多种肿瘤组织中有高水平表达,且与肿瘤的侵袭转移关系密切;Ki-67是一种细胞增殖核抗原,表示肿瘤细胞的增殖速率;但三者与骨肉瘤的局部侵袭、远处转移及术后是否复发之间的关系尚不清楚,本研究拟探讨细胞表面粘附分子标准型CD44蛋白(CD44s)以及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和细胞增殖核抗原(Ki-67)在骨肉瘤中的表达情况及其与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测了62例骨肉瘤(初发性骨肉瘤51例、复发性骨肉瘤11例,确诊时即伴有肺转移者9例、不伴有肺转移者53例)以及骨纤维结构不良和正常对照组织中CD44s、MMP-9、Ki-67的表达,并根据阳性瘤细胞占肿瘤细胞总数的比率进行半定量量化分析和非参数秩和检验。结果:CD44s、MMP-9、Ki-67在骨肉瘤中的阳性表达率分别为71.0%、75.8%和35.5%,与三种分子在骨良性病变和正常对照组织中的阳性表达率相比,其表达水平显著性升高(P值均小于0.05)。CD44s和MMP-9在初发性和复发性骨肉瘤之间的表达差异无显著性意义,但Ki-67在术后复发的骨肉瘤中的阳性率为81.8%,比初发性骨肉瘤中的阳性率显著性升高。CD44s和Ki-67在伴有肺转移的骨肉瘤中的阳性率分别为88.9%和66.7%。

CK19、CK20在甲状腺乳头状癌诊断中的应用价值

目的 :探讨甲状腺癌中CK19、CK2 0蛋白的表达 ,提高甲状腺癌的诊断与鉴别诊断水平。方法 :应用免疫组化染色对 70例甲状腺癌 (15例经典型乳头状癌、34例滤泡型乳头状癌、3例Warthin乳头状癌、2例透明细胞型乳头状癌、1例柱状细胞型乳头癌、15例滤泡性癌 ) ,10例甲状腺腺瘤、10例结节性甲状腺肿和 5例桥本甲状腺炎中CK19、CK2 0的表达进行观察。结果 :CK19在甲状腺疾病中的表达 :5 5例乳头状癌中 ,5 3例为中、强阳性 ,2例为弱阳性 ;15例滤泡性癌中 ,13例为阴性、弱阳性 ,2例为中、强阳性 ,两者之间差异存在显著性 (P <0 0 5 )。各癌旁滤泡、10例滤泡性腺瘤、10例结节性甲状腺肿的滤泡、5例桥本甲状腺炎也主要为阴性、弱阳性 ,个别为中等阳性。对CK2 0的表达 ,各型甲状腺乳头状癌、滤泡性癌、癌旁滤泡及滤泡性腺瘤、结节性甲状腺肿、桥本甲状腺炎主要为阴性、弱阳性 ,偶尔为中等阳性 ,差别不明显。结论 :CK19对区别甲状腺乳头状癌和乳头状增生、多灶性分布的甲状腺滤泡型乳头状癌与各种滤泡性病变有帮助 ,可提高甲状腺良恶性病变诊断的准确率及鉴别诊断水平 ;CK2 0对鉴别诊断的帮助不大。

骨肉瘤中HIF-1α、VEGF、p53表达与血管生成和预后的关系

目的 检测缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)及VEGF、p5 3、CD34在骨肉瘤的表达 ,探讨其与缺氧情况下骨肉瘤血管生成和预后的关系。方法 采用免疫组织化学S P法检测 4 6例有完整随访资料的骨肉瘤病例中HIF 1α、VEGF、p5 3、CD34的表达。用Spearman分析各指标间的相关性 ,并结合临床资料进行生存曲线分析。结果 4 6例骨肉瘤标本中有 14例 (30 4 % )表达HIF 1α ;HIF 1α表达组VEGF、p5 3表达强度及术后转移率均高于HIF 1α不表达组 ;HIF 1α表达组患者术后 1年生存率及总生存率均显著低于HIF 1α不表达组。HIF 1α表达与VEGF、p5 3表达之间存在显著相关性 ;HIF 1α表达与微血管密度(MVD)之间无相关性。结论骨肉瘤组织中存在HIF 1α的过表达 ,HIF 1部分地参与了骨肉瘤的演进 ,HIF 1通过调节VEGF的表达在骨肉瘤血管生成中发挥着重要作用 ;HIF 1和p5 3缺失或突变可能协同参与了缺氧对骨肉瘤肿瘤细胞的调节 ,HIF 1α表达与骨肉瘤的不良预后密切相关 。

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中相关因子的动态表达

目的:探讨在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中,生长因子TGF-β1,VEGF,bFGF动态表达的生物学意义,研究幼龄成骨细胞移植对促进SD老龄鼠骨质疏松性骨折愈合的作用机制。方法将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD鼠骨质疏松性骨折部位,用原位杂交及免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本:bFGFVEGF,TGF-β1及bFGFmRNA,VEGFmRNA,TGF-β1mRNA的动态表达。结果:实验组:成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存,生长繁殖,bFGF、bFGFmRNA及VEGF、VEGFmRNA均在7d左右可见有阳性表达的细胞,14d有分泌高峰,TGF-β1,TGF-β1mRNA在3d左右可见阳性细胞,7～10d有分泌高峰,而对照组未见明显分泌高峰。结论:成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位TGF-β1,VEGF,bFGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义。

基质金属蛋白酶-2,9及其抑制剂在骨肉瘤中表达的意义

[目的]探讨基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)及其特异性抑制剂TIMP-2,1在骨肉瘤中的表达情况及其与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系。[方法]采用免疫组织化学链酶菌抗生物紊一过氧化酶(SP)法检测了62例骨肉瘤(初发性骨肉瘤51例、复发性骨肉瘤11例,确诊时即伴有肺转移者9例、不伴有肺转移者53例)和正常对照组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达,并根据阳性瘤细胞占肿瘤细胞总数的比率进行半定量量化分析和非参数检验。[结果]MMP-9、TIMP-1在骨肉瘤中的阳性表达率分别为76％、18％,与二者在正常对照组织中的阳性率相比,MMP-9表达明显升高,TIMP-1表达明显降低(P均<0.01)。MMP-2、TIMP-2在骨肉瘤中的阳性表达率分别为69％、52％,与二者在正常对照组织中的阳性率相比差异无显著性(P均>0.05)。MMP-9在肿瘤细胞的胞浆及胞膜中均有表达,且在肿瘤的侵袭边缘阳性细胞数目较多,染色强度较高。MMP-2,9及TIMP-1,2在初发性和复发性骨肉瘤之间以及在伴有肺转移和不伴有肺转移的骨肉瘤之间的表达差异无显著性。Spearman相关分析表明骨肉瘤中MMP-9与MMP-2、MMP-2与TIMP-2以及TIMP-1与TIMP-2之间的表达均显著性相关。[结论]骨肉瘤组织中MMP-9表达升高、TIMP-1表达降低,二者协同促进肿瘤细胞的生长和局部的侵袭破坏。骨肉瘤?

骨肉瘤中Rb、p16、CDK_4、cyclinD_1蛋白的表达及其意义

目的：探讨骨肉瘤中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ_４、ｃｙｃｌｉｎＤ_１的蛋白表达、相互关系及其意义。方法：应用免疫组化方法对４０例骨肉瘤组织中ＲＢ、ｐ１６、ＣＤＫ_４、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达状况进行检测。结果：４０例骨肉瘤Ｒｂ、ｐ１６蛋白表达缺失分别为７２.５％（２９／４０）和２２.５％（９／４０）；１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤中８例ｐ１６阴性，２９例ｐＲｂ阴性的骨肉瘤中２８例ｐｌ６阳性；５２.５％（２１／４０）的骨肉瘤中存在ＣＤＫ_４的过表达，１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤８例ＣＤＫ_４蛋白呈过表达，３削弱阳性 ；３例 ｐＲｂ、ｐ１６均阳性的骨肉瘤 ＣＤＫ４导过表达；骨肉瘤中 ｐＲｂ， ｐ１６， ＣＤＫ_４的总异常率达１００％；４０例骨肉瘤中未检出ｃｙｃｌｉｎＤ_１蛋白的过表达。结论：（１）Ｒｂ蛋白的缺失。ＣＤＫ_４蛋白的过表达是骨肉瘤中的常见事件（２）骨肉瘤中ｐ１６与ｐＲｂ的表达呈负相关；（３）Ｒｂ蛋白阳性的骨肉瘤，ｐ１６蛋白的缺失及／或ＣＤＫ４蛋白的过表达，可能在ｐＲｂ的过度磷酸化而失活以致骨肉瘤失控地增生中起着重要作用；（４）ｐ１６－ＣＤＫ_４－ｐＲｂ通路的异常与骨肉瘤的发生密切相关。

84例骨肉瘤生存分析

目的:分析骨肉瘤预后的相关因素,评价骨肉瘤和多药耐药基因的关系。方法:检测骨肉瘤中MDR1/P-gp的表达,多因素统计生存分析。结果:84例骨肉瘤平均随访21.3个月,28.6%(24/84)1年内发生肺转移;3年生存率为42.9%;P-gp表达阳性率55.1%,等级相关分析显示P-gp表达与1年内肺转移率成等级正相关;COX模型分析显示:P-gp表达及扁骨部位骨肉瘤是无瘤生存期及生存时间的危险因素,年龄和病程是无瘤生存期及生存时间的保护因素。结论:骨肉瘤患者预后的高危因素是MDR1的表达及扁骨部位的骨肉瘤,保护因素是年龄和病程,大剂量新辅助化疗是改善骨肉瘤预后的关键。

脂肪肉瘤c-myc和p53基因蛋白的表达及意义

背景与目的:原癌基因c-myc和抑癌基因p53与脂肪肉瘤的关系的研究较少,脂肪肉瘤中是否存在p53基因突变文献报道不一,本文拟探讨脂肪肉瘤中c-myc、p53基因蛋白表达的水平及意义,以期为本组肿瘤发生发展及病理诊断、鉴别诊断提供一定的分子生物学资料。方法:采用链菌素抗生物素-生物素(labelledstreptavidin-biotin,LSAB)免疫组化法、聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Singlestrandconformationpolymorphismanalysisofpolymerasechainreactionproducts,PCR-SSCP)及DNA序列分析方法。结果:c-myc和p53蛋白在脂肪肉瘤表达阳性率分别为38.09%(16/42)和48.08%(25/52)。不同类型脂肪肉瘤,分化良好者阳性率均明显低于分化较差者。脂肪肉瘤中c-myc和p53蛋白表达呈正相关。c-myc和p53蛋白表达在原发者和复发者之间的差异均无统计学意义。p53第6、7、8外显子PCR-SSCP分析,2例多形性脂肪肉瘤出现异常泳动带。DNA序列分析证实1例第8外显子第268位编码区出现错义突变(AAC→ATC),另1例第6外显子第221位编码区出现可疑杂合性同义突变(GAG→GAA)。结论:c-myc和p53蛋白与脂肪肉瘤的形成及分化和恶性程度有关,它们可作为判断脂肪肉瘤分化程度及恶性程度参考指标之一,但与肿瘤复发无关。在脂肪肉瘤发生发展中两者可能起协同作?

成骨细胞培养及冻存复苏后生物学特性比较

目的 :了解冻存复苏过程对保持成骨细胞生物学特性的影响。方法 :通过细胞组化、免疫组化以及图像分析等方法对冻存和非冻存 (新鲜制备 )的细胞在其形态及功能方面进行了比较。结果 :两组ALP染色、茜素红S法、V G法、免疫组化法的结果均差异无显著性 (P >0 0 5 )。但细胞存活率与冻存时间密切相关 ;随冻存时间延长 ,其存活率下降。结论 :两组细胞保持了某些相似的生物学行为 ,如细胞形态、生长过程、基质分泌等。冻存时间对保存的成骨细胞存活率有影响。

骨肉瘤动脉内化疗栓塞术的临床研究

目的：探讨骨肉瘤动脉内化疗栓塞术的临床疗效和病理改变。材料与方法：对３２例病理确诊的骨肉瘤做动脉内化疗栓塞术，然后行手术切除，对以上病例作术前后的临床症状、体征、实验室检查和病理的对比观察，并与１１例作全身化疗的对照组比较。结果：较之全身化疗组、动脉内化疗栓塞组的病例其临床症状和体征均明显改善，肿瘤组织坏死度明显增高。结论：用动脉内化疗栓塞治疗骨肉瘤疗效明显高于全身化疗，是手术治疗前应选择的治疗方法。

成骨细胞移植促进老龄鼠骨质疏松性骨折愈合过程中VEGF的动态变化

目的 动态观察在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中 ,VEGF在不同时相的表达及其生物学意义。方法 通过建立老龄骨质疏松SD大鼠骨折的动物模型 ,并将体外培养的SD雄性乳鼠成骨细胞移植到SD雌性鼠老年骨质疏松性骨缺损部位 ,利用免疫组化及原位杂交检测骨折愈合过程中不同时相的移植标本VEGF、VEGFmRNA的表达 ,并作图像分析、绘出其动态变化图。结果 实验组VEGF、VEGFmRNA均在 7d左右可见有阳性表达的细胞 ,14d有分泌高峰 ,其中以软骨细胞中阳性最强 ,2 1d分泌量开始下降 ,5 6d后基本消失。而对照组未见明显分泌高峰。结论 成骨细胞移植促进老龄鼠骨质疏松性骨折愈合 ,其机制可能是通过促进VEGF的转录和表达 ,从而促进骨折部位建立良好的血液循环 。

全反式维甲酸对骨肉瘤细胞OS732生长的影响

目的观察全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)对骨肉瘤细胞OS732生长的影响,并探讨其作用的分子机制。方法用10-5MATRA作用骨肉瘤细胞OS732,6d后,进行细胞形态学观察、活细胞计数、流式细胞仪分析细胞周期、半定量RT-PCR检测细胞周期调控蛋白CyclinD(D1、D2、D3)、CDK4、P21WAF1mRNA表达的改变。结果ATRA作用后,OS732细胞胞浆展开,细胞核变小,核浆比例变小;瘤细胞生长减慢,细胞计数为正常对照组的39.5%;G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,细胞阻滞于G0/G1期;CyclinD1、CyclinD2、CDK4mRNA表达均下降,尤以CyclinD2、CDK4下降最明显,CyclinD3、P21WAF1mRNA未见明显改变。结论10-5M全反式维甲酸可明显抑制骨肉瘤细胞OS732的增殖,并使细胞周期出现G1/G0期阻滞,该作用可能与维甲酸处理后OS732细胞中CyclinD2、CDK4表达的下调以致低磷酸化pRb积累有关。

Y染色体追踪成骨细胞移植促进骨质疏松骨折愈合及VEGF动态表达的实验研究

目的 观察移植细胞在骨折愈合不同时相的存活及转归 ,及血管内皮生长因子 (VEGF)动态表达的生物学意义。方法 建立 SD大鼠老龄骨质疏松骨折的动物模型 ,将 SD雄性乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到 SD雌性鼠骨质疏松性骨折部位 ,用原位杂交及免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本 :(1 ) Y染色体阳性表达特点 ;(2 ) VEGF、VEGF m RNA的动态表达。结果 实验组成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存 ,生长繁殖 ,促进骨质疏松性骨折愈合 ,并于移植 84d后仍存活。实验组 VEGF、VEGF m RNA均在 7d左右可见有阳性表达的细胞 ,1 4 d有分泌高峰 ,其中以软骨细胞中阳性最强 ,2 8d分泌量开始下降 ,56 d后基本消失。对照组未见明显分泌高峰。结论 同种异体成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位 ,参与骨折修复的各个环节 ,可至少存活 84d。 VEGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义。

细胞因子HGF体外增强骨肉瘤细胞株的增殖和黏附性

【目的】研究肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)及其受体蛋白c-Met在骨肉瘤细胞株MG-63和HOS中的表达及对瘤细胞生物学行为的影响,探讨HGF/c-Met系统在骨肉瘤细胞生长侵袭过程中的作用。【方法】用流式细胞术检测HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达;外源性HGF刺激此2株细胞株后,用MTT法、黏附性检测方法研究细胞增殖速率和黏附性的变化。【结果】HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的阳性表达率均低于3%。HGF浓度达50ng/mL以上时,MG-63和HOS的增殖速率显著增高,P<0.01。当外源性HGF的浓度分别达5ng/mL和10ng/mL时,MG-63和HOS的黏附性指标即显著升高,P<0.01。外源性HGF刺激后HGF-!、HGF-"、c-Met在2株骨肉瘤细胞株中的表达略有变化,但差异无统计学意义,P>0.05。【结论】HGF可以促进骨肉瘤细胞株MG-63和HOS的体外增殖和黏附能力。

BMP促进去神经后废用性骨质疏松骨折愈合的实验研究

为了观察ＢＭＰ对去神经后废用性骨质疏松性骨折愈合的作用，作考选用６月龄健康标准大鼠，严格配对分组，切除双侧坐骨神经后３周证实有明显骨质疏松。然后在腔骨人工骨折骨缺损处分别植入酸解胶状鼠尾胶原（对照）及ＢＭＰ与胶原混和物（实验组）。通过血清钙浓度、碱性磷酸酶活性及骨组织形态计量学多项参数的观察，显示ＢＭＰ对去神经后废用性骨质疏松骨折愈合有明显促进作用（Ｐ＜０．０５～０．０１）