人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌NCI-H1975细胞的作用研究

目的探讨人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对人肺腺癌细胞的体外作用,以期为非小细胞肺癌治疗研究提供理论依据。方法体外培养人肺腺癌NCI-H1975细胞,CCK-8法检测不同浓度人参皂苷和吉非替尼作用后的细胞活力,计算半抑制浓度(IC_(50)),然后用同样的方法检测人参皂苷Rh2与吉非替尼联用对细胞活力的影响;分别用PI染色法、Annexin V-FITC/PI双染法和JC-1法检测人参皂苷Rh2、吉非替尼单药和联合用药对细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。结果人参皂苷Rh2和吉非替尼单药对NCI-H1975细胞的作用呈剂量依赖性和时间依赖性,作用24、48、72 h的IC_(50),Rh2分别为57.90、41.38、32.62μg·mL^(-1),吉非替尼分别为56.50、22.80、13.19μmol·L^(-1);两药以IC_(50)剂量联用作用72 h后,与各单药组比较,联合用药组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞周期无明显阻滞,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rh2和吉非替尼联用可显著抑制NCI-H1975细胞活力和诱导细胞凋亡,其作用优于单独用药。

人参皂苷Rh3对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rh3对人结肠癌细胞SW480增殖与凋亡的影响。方法体外培养的人结肠癌细胞SW480分别用无血清培养液稀释的终浓度为15、30、60、120和240μg/ml的人参皂苷Rh3作用24、48及72h,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖;采用终浓度为15μg/ml的人参皂甙Rh3作用于SW480细胞24及72h,应用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,采用终浓度为15、20μg/ml的人参皂甙Rh3作用于SW480细胞24及72h;应用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法计算细胞凋亡率和坏死率。结果 15μg/ml人参皂苷Rh3作用48h即可明显抑制SW480细胞增殖,其作用随剂量增加和作用时间延长而增强,30μg/ml人参皂苷Rh3作用72h抑制率超过80%;15μg/ml人参皂苷Rh3作用24h部分细胞凋亡,胞浆呈棕色,作用72h凋亡细胞增多;15μg/ml人参皂苷Rh3作用24h细胞凋亡率为25.5%,20μg/ml人参皂苷Rh3作用24h细胞凋亡率为31%,未见细胞坏死,15μg/ml人参皂苷Rh3作用72h细胞凋亡率为55%、坏死率为7%,20μg/ml人参皂苷Rh3作用72h细胞凋亡率为67.5%、坏死率为7%。结论人参皂苷Rh3能抑制人结肠癌细胞SW480增殖,诱导其凋亡,作用呈剂量依赖性和时间依赖性。

新型CpG ODN增强乙肝疫苗诱导IgG2a类抗体产生的实验研究

目的寻找能增强乙肝疫苗刺激IgG2a类抗体产生,使机体处于Th1样免疫环境的新型乙肝疫苗佐剂。方法选用自行设计的A、B、C型CpGODN,并以发表的A、B型CpGODN作为阳性对照,与重组乙肝疫苗混合后于第0、4周免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠血清中HBsAb水平及种类。结果各型CpGODN都能增强乙肝疫苗刺激HBsAb的产生水平,CpGODN+乙肝疫苗免疫的小鼠血清中HBsAb类型为IgG2a>>IgG1,而单独应用商品化重组乙型肝炎疫苗的小鼠血清中HBsAb类型为IgG1>>IgG2a。结论各型CpGODN对重组乙型肝炎疫苗[含Al(OH)3佐剂]均具有增效作用,而且可以诱导机体产生倾向于Th1途径的免疫应答反应。

禽流感病毒H5N1病毒颗粒中鸡胚宿主蛋白的质谱分析

在A型流感病毒等许多包膜病毒的病毒颗粒中,除包含病毒基因组编码的结构蛋白外,还包含来源于宿主细胞的多种蛋白。然而,在鸡胚内增殖的病毒颗粒所包含的宿主蛋白的种类尚不清楚。本研究采用20%～60%(w/w)蔗糖密度梯度离心法分离纯化了繁殖于鸡胚的流感病毒,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结合质谱法对纯化的流感病毒颗粒进行了全面的蛋白质组学分析。结果表明,在病毒颗粒中,除包含9种病毒编码蛋白外,还发现了12种来源于鸡胚的蛋白,如膜联蛋白A2、肽酰脯氨酰顺反异构酶B、过氧化物酶1、磷酸甘油酸激酶、丙酮酸激酶肌组织异构酶等,以及2种细胞骨架蛋白(微管蛋白b-3和肌动蛋白)。

结直肠癌缺失基因功能区诱导结肠癌细胞凋亡

目的检测结直肠癌缺失(DCC)基因功能区转染表达后对结肠癌细胞SW1116凋亡的诱导作用。方法通过脂质体法将含有DCC基因胞内区功能域(3 727～3 792 bp)的重组表达载体pIRES2-EGFP-DCC转染到结肠癌细胞SW1116,MTT比色法检测细胞增殖情况,TUNEL、AO/EB染色法检测细胞凋亡情况。结果转染SW1116细胞36 h后,MTT比色法检测结果表明实验组细胞数目低于对照组,并且具有显著性差异;AO/EB染色及TUNEL法检测结果表明实验组有大量凋亡细胞,对照组未见凋亡细胞。结论 DCC基因的胞内功能域(3 727～3 792 bp)具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用。

可靠性验证试验费用优化模型研究

分析了可靠性验证试验的费用优化问题,并以指数寿命型序贯试验方案为例,给出了费用优化的建模及计算方法。给出了模型计算关键参数的取值表,使得计算过程简单实用。所举算例表明了这一点。

重组人抗乙型肝炎表面抗体表达的研究

目的应用毕赤酵母表达体系,表达、制备人抗乙型肝炎表面抗原全分子抗体。方法以抗-HBs抗体阳性个体为对象构建抗体表达文库,筛选抗-HBs抗体轻链和重链可变区序列,并将其重组至同一表达载体pPICZαIgG,转化X33酵母菌,甲醇诱导表达后进行ELISA筛选鉴定及免疫印迹分析。结果Western印迹检测在分子量约140kD处出现特异性染色条带,ELISA结果表明所获得抗体分子具有良好的乙型肝炎表面抗原结合活性。结论在毕赤酵母菌中可经甲醇诱导产生具抗原结合活性的完整分泌型抗-HBs抗体。