体外培养的成年兔眼色素上皮细胞屏障功能的研究

目的研究体外培养的成年兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的血-视网膜外屏障功能。方法对成年兔眼RPE细胞进行原代培养,免疫组织化学通过MNF116和S-100鉴定细胞纯度。将细胞接种于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上,分别于培养过程中不同时间点进行跨膜电阻测定,待电阻达到平台期后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况。结果成功原代培养了兔眼RPE细胞并且无其他细胞污染。接种于Transwell后,RPE细胞TER值3周达到最高值约88.14Ω·cm2,维持1周并开始下降。透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接。ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成。结论成年兔眼RPE细胞通过培养于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上可以成功建立细胞屏障功能模型。

CFDA-SE标记虹膜色素上皮细胞的自体移植

目的探讨兔眼自体虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelial cells,IPECs)羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记后,采用单通道内路移植方法将传代的IPECs移植于视网膜神经上皮层下的可行性。方法取兔眼自体虹膜细胞分离培养并传代,于第3代经CFDA-SE染色后移植到自体视网膜神经上皮层下。术后不同时间应用彩色眼底照相、激光扫描检眼镜、光学相干断层扫描进行活体观察,不同时间点对移植眼进行切片并常规染色及免疫组化,用光学显微镜对移植细胞进行观察和评价。实验数据采用两均数的等效检验,以0.5倍标准差作为等效界值观察移植前后ZO-1和Actin表达情况。结果移植术后观察显示移植区界限清晰;激光扫描检眼镜可观察到移植区内荧光;光学相干断层扫描和HE染色均显示移植区神经上皮层下有色素上皮细胞堆积,并随时间推移堆积逐渐变平。经免疫组化显示移植区ZO-1、Actin呈棕色点,有规律的间断分布在Bruch膜上,IPECs嵌插在原始的RPECs间,且形成完整的单层。结论CFDA-SE是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,在IPECs移植中可作为理想的标记物应用;我们首次使用的单通道内路移植方法具有手术快捷简单、安全、并发症少等优点。

miR-204对人晶状体上皮细胞移行的影响

目的探讨经体外转染携带有miR-204的重组腺病毒ADV-miR-204对人晶状体上皮细胞移行的影响。方法 ADV-miR-204在293细胞中扩增、分离纯化并滴定病毒滴度;ADV-miR-204体外转染人晶体上皮细胞HLE-B3,细胞划痕法测定ADV-miR-204对HLE-B3移行的影响。结果测定ADVmiR-204的病毒滴度为1.5×109pfu/m L;ADV-miR-204以MOI为10、50、100、200、500分别感染HLE-B372 h后,细胞移行愈合率随着ADV-miR-204的感染浓度增加而降低,MOI=100组与MOI=50组、MOI=10组相比差异显著(P<0.05)。而在MOI=100、MOI=200、MOI=500实验组组间差异不明显。同一感染浓度(MOI=100),不同时间点(0~72 h)下感染组细胞移行愈合率与正常细胞组比较均明显降低(P<0.05)。结论 ADV-miR-204可成功转染人晶体上皮细胞,并可减缓细胞的移行。

一种体外培养兔眼色素上皮细胞的新方法

目的建立一种体外培养的兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的新方法。方法采用Dispase对兔眼RPE细胞进行原代培养,免疫组化通过MNF116和s-100鉴定细胞纯度。将细胞接种于铺有laminin的Transwell滤膜上,观察到细胞融合后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况。结果成功培养了原代兔眼RPE细胞并且无其它细胞污染。透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接。ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成。结论兔眼RPE细胞能够用Dispase成功分离并培养。

脊柱侧弯椎旁肌病理变化的实验性研究

目的建立脊柱侧弯动物模型,研究脊柱侧弯椎旁肌的病理改变与侧弯发生发展的关系。方法 2.5~3.5个月龄健康幼犬24只,雌雄不限,采用随机数表法选取对照组8只,观察组16只。观察组通过离断部分凸侧肋骨,固定凹侧肋骨,棘突相连加压的手术方式建立脊柱侧弯动物模型。分别于术后当日、术后1个月和术后3个月行放射学X线检查测量Cobb's角,进行统计学分析,明确是否形成进展性脊柱侧弯;将建模成功后的观察犬采用随机数表法将其分为观察Ⅰ组和观察Ⅱ组各8只,对照组8只随机分为对照Ⅰ组和对照Ⅱ组各4只。观察Ⅰ组于术后3个月,观察Ⅱ组于术后5个月取椎旁肌行HE染色及神经镀银染色等病理学检查,对照组同期行病理学检查,对比观察脊柱侧弯椎旁肌肌梭及神经轴突终末支配比率等变化。结果建模过程中观察组2只幼犬术中死亡,1只术后死亡,1只术后钢丝断裂,共12只纳入统计,观察Ⅰ组和观察Ⅱ组各6只。观察组幼犬术后3个月Cobb's角较术后当日平均进展24.28o,与术后当日及术后1个月Cobb's角比较差异有统计学意义(P<0.05),脊柱侧弯动物模型建立成功;观察Ⅰ组和观察Ⅱ组椎旁肌HE染色可见凸侧肌纤维横径大部分变细、稀疏,凹侧增大或粗细不均,伴有多个肌梭的群聚,囊壁增厚及肉芽组织浸润。神经镀银染色结果可见观察Ⅱ组凸侧椎旁肌神经轴突终末支配比率(Tl R)值高于凹侧椎旁肌、对照Ⅰ组、对照Ⅱ组及观察Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脊柱侧弯椎旁肌肌梭及神经轴突终末支配率等病理变化是继发于脊柱侧弯的渐进发展的过程。

ATAD2表达水平与滑膜肉瘤临床预后的关系

目的探讨ATAD2表达水平与滑膜肉瘤临床预后的关系。方法选取2017年1月至2019年12月该院收治的40例滑膜肉瘤患者为研究对象。使用免疫组织化学方法检测在滑膜肉瘤组织及其癌旁正常组织中ATAD2的表达水平,并结合资料通过统计学分析其表达水平与病理因素和预后之间的相关性。结果ATAD2表达在癌旁正常组织和肿瘤组织的细胞核,滑膜肉瘤组织ATAD2蛋白表达水平高于癌旁组织(60.0%vs.7.5%),差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、病理分型、淋巴结侵犯、ATAD2表达情况患者的OS、DFS比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在滑膜肉瘤患者中,ATAD2的表达水平升高明显影响患者OS和DFS(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,ATAD2表达程度对于滑膜肉瘤患者的OS(HR=2.135,95%CI:1.235~4.056)和DFS(HR=2.613,95%CI:1.243~4.293)是独立的预后标志物。结论高ATAD2表达的滑膜肉瘤患者预后较差。

胚胎发育中神经视网膜对血视网膜外屏障结构形成的作用

目的 研究胚胎发育中神经视网膜对血视网膜外屏障结构形成的作用。 方法 将孵化 7、10、14 d的鸡胚眼各 15 0、12 0和 90只 ,分批分别剥离视网膜神经上皮层 (RNE)和色素上皮层 (RPE)。 RNE用来制备不同条件的培养液 (7drc SF3、 10 drc SF3和 14 drc SF3) ,将 7d和 14 d的 RPE细胞分别培养到12 mm Transwell滤膜上 ,其顶房分别用 SF3或上述条件培养液 ,底房均用 SF2培养液。形成单层 RPE细胞后 ,测定此上皮层的电阻 (TER)。最后固定细胞 ,用细胞免疫组织化学方法和透射电子显微镜检测 RPE细胞间紧密连接形成的情况。 结果 不同培养液 (SF3/ SF2 ,7drc SF3/ SF2 ,10 drc SF3/ SF2 ,14 drc SF3/ SF2 )培养 7d和 14 d鸡胚眼的 RPE细胞 TER之间的差异有非常显著性的意义 (P<0 .0 1)。电子显微镜结果显示神经视网膜条件培养液可以使 RPE细胞产生细胞极性 ,有效地促使紧密连接条带形成连续的网状结构。 结论 神经视网膜对血视网膜外屏障结构的形成起积极的促进作用。

活体染料羧基荧光素乙酰乙酸对兔眼虹膜色素上皮细胞体外染色的研究

目的探讨活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记兔眼虹膜色素上皮（IPE）细胞的可行性。方法使用酶消化加机械分离的方法分离培养兔眼IPE细胞，将传3～4代的IPE细胞用2．5、5、10、20、40μmol／L浓度的CFSE分别作用1、5、10min进行染色，通过观察染色后的细胞荧光强度和细胞贴壁率筛选出最理想的标记条件。采用流式细胞术追踪检测标记的IPE细胞的荧光强度变化。用免疫荧光抗体标记法检测此染色剂有无渗漏以及是否对周围细胞着染。结果浓度为20μmol／L的CFSE 37℃下水浴作用1min为IPE细胞染色、观测、研究的最适条件。流式细胞仪和荧光显微镜观察结果显示，CFSE对IPE细胞染色可持续4周以上，未发生染料渗漏或转染其它细胞，且此浓度的CFSE不影响细胞的性状。结论活体染料CFSE是一种染色率高，追踪时间长，应用简便安全可靠的标记兔IPE细胞的新方法。

青光眼患者生存质量量表的研究进展

青光眼是当今世界不可逆性致盲眼病的主要病因,同时也是导致视力丧失的第二主要病因。青光眼的症状、以及治疗方式、不良反应使患者的日常生活、心理、工作、社会活动等均受到不同程度的影响。随着医学模式的转变,单纯观察视功能的变化已不能够全面反映疾病对患者的影响,生存质量作为一种较全面的体现新的健康观和医学模式的评价体系已被引入眼科领域,是对传统视功能评价方法的有益补充。本文就国内外与青光眼相关的生存质量量表的研究进展作一综述。

角膜内皮损伤的相关因素分析

角膜保持透明性的重要条件是内皮细胞的生理功能正常和解剖完整,内皮损伤的影响因素取决于年龄,外伤,遗传,代谢遗传,可在相关术后被破坏其组织结构,眼病相关及全身疾病都会影响角膜内皮的生理特性,成人内皮损伤后不能再生,只能靠邻近细胞迁移及扩展,近年来专家和学者对角膜内皮相关研究越发关注,本文就引起角膜内皮损伤的个性因素及相关原理作一综述。

青光眼滤过手术中抗瘢痕治疗的研究进展

青光眼滤过手术是降低青光眼眼内压的主要手术方法,其目的是为了建立一个可替代的房水流出通道来降低眼内压,避免术后瘢痕形成是通道建立的关键。免疫抑制剂如丝裂霉素C、5-氟尿嘧啶用来对抗滤过术后瘢痕形成由来已久。虽然这些药物提高手术的成功率,但不良反应、并发症一直困扰着临床医生。近年来,不断有新型抗瘢痕药物被发现,本文就最近几年用于青光眼滤过术的抗瘢痕药物作一综述。