农业防灾减灾与特色气象媒体服务研究应用

农业是国经济的重要组成部分,然而,自然灾害频发成为制约农业发展的一大难题。农业防灾减灾需要准确、及时的气象信息支持。特色气象媒体通过其独特的定位和专业的气象报道,能够更好地传递气象信息,助力农民科学决策,降低灾害损失。气象灾害如极端天气、洪涝、干旱等不仅直接危及农业生产,还对全球粮食安全和农村社区的可持续发展构成威胁。在这样的背景下,加强农业防灾减灾工作,提高农业的抗灾能力显得尤为迫切。特色气象媒体以其独特的传播形式和专业的气象服务为农业防灾减灾提供了新的途径和可能性。本文主要探讨农业防灾减灾与特色气象媒体服务研究应用。

小麦面筋蛋白可食膜的制备及其在调料包中的应用

以小麦面筋蛋白(WG)为成膜基料制备可食蛋白膜,以蛋白膜阻隔性能(氧气透过率)和机械性能(抗拉强度)为考核指标,采用响应面实验设计方法优化确定了最佳成膜工艺条件为:p H 11.4、蛋白添加量10.7%,、乙醇体积分数57%,.在此条件下,WG膜氧气透过率为20.74,meq/kg,抗拉强度为12.98,MPa.利用扫描电子显微镜(SEM)、原子力显微镜(AFM)、傅里叶红外光谱(FTIR)和热重分析仪(TG)对WG可食膜进行观察和表征.结果表明:WG可食膜表面较光滑、致密性好,可进一步应用于模拟方便面调料包实验.经保藏45,d,油包、粉包和蔬菜包均能保持完整外观,过氧化值和酸价均未超过国家标准要求,粉包、蔬菜包中水分含量均低于文献报道.

气象灾害对大豆的危害及预防措施

作为重要的粮食作物之一,大豆在全球范围内扮演着重要的经济和生态角色。然而,气象灾害的频繁发生给大豆的生长、产量和质量带来了巨大的挑战。极端气候事件、气温波动、洪涝和干旱等气象灾害不仅会对大豆的正常生长造成直接的影响,还会对农业生产系统产生深远的影响。随着全球气候变化的不断加剧,气象灾害对大豆产业的威胁日益严重。为此,分析了气象灾害对大豆的危害,提出气象灾害对大豆危害的预防措施,为农业生产提供科学、可持续的解决方案。

乙型肝炎病毒前S基因区缺失突变发生机制的探讨

检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者和患者外周血内HBV前S区基因缺失突变的分子结构特点,探讨其发生机理。用聚合酶链反应方法从慢性乙肝患者和携带者血清中扩增出前S区基因片段,克隆、测序,分析缺失发生的结构特点,从而推测这些前S区基因缺失突变的产生机制。从262例慢性乙肝患者和103例无症状HBV携带者体内扩增出前S区片段,共在30例患者和携带者中检测出多种前S区基因缺失突变,主要集中于前S1区的3′端和前S2区的5′端。其中有9例患者和携带者体内存在完全一样的nt3019～nt3201183bp的缺失突变,该缺失突变符合真核细胞mRNA剪接机制,在此位置上各基因型的序列高度保守。同时有另外两种缺失突变,即nt3019～nt3147129bp缺失、nt3019～nt310991bp缺失也符合该剪接机制。有23种缺失突变部分于重复序列之间,符合逆转录过程中的模板转换机制所导致的缺失。根据前基因组RNA预测出二级结构,仅部分缺失突变在RNA二级结构中对应于局部的结构。此结果表明:HBV在外界因素mRNA的剪接机制和内在因素聚合酶蛋白的功能特点的共同作用下,产生各种突变,不同的机制将导致不同类型的缺失突变。除真核细胞mRNA剪接机制外,逆转录过程中的模板转换是主要机制之一。

人工林刺槐木材物理力学性质研究

【目的】刺槐作为我国重要的速生用材树种,被广泛应用于北方人工林种植,深入研究刺槐木材的物理力学性质,为刺槐人工林建设经营以及木材的高效精细化利用提供科学依据。【方法】本文对采自于山东省东营市刺槐林场的4株不同树龄人工林刺槐沿树干等分成0.65 m长若干小段并顺序编号,测定和分析每段木材的物理性质(气干密度、全干密度、基本密度)、力学性质(顺纹抗压强度、横纹径向全部抗压强度、横纹弦向全部抗压强度、抗弯强度、抗弯弹性模量)以及化学组分(纤维素、半纤维素、木质素)含量,并通过SEM电镜扫描图对各段木材的微观构造进行对比分析。【结果】刺槐木材的气干密度、全干密度、基本密度、顺纹抗压强度、横纹全部抗压强度(径向、弦向)、抗弯强度、抗弯弹性模量均随树龄的增大而增加,随树干位置增高呈现先增大后减小的规律。将木材气干密度与顺纹抗压强度、横纹(径向、弦向)全部抗压强度、抗弯强度、抗弯弹性模量分别进行线性和幂函数拟合,两种模型均能很好地拟合试验结果,拟合度R2值为0.865~0.895。各段木材化学组分中纤维素含量随树龄及树干高度位置的变化规律与木材各项力学性质的变化规律相似。木材的微观构造中导管占比率随树龄增大而减少,随树干高度位置增加呈现出先减后增的变化规律。【结论】10年生、15年生、20年生、25年生刺槐木材的气干密度、顺纹抗压强度、抗弯强度、抗弯弹性模量均为中级以上,是良好的家具和建筑用材。在利用时应充分考虑不同树龄木材和树干不同位置的差别。密度作为影响木材力学性质的直接要素,可根据相关方程通过刺槐木材的密度值估算部分力学性质的数值。刺槐木材纤维素含量与木材各项宏观力学性质相关度很高,而木材导管占比率的差异则从微观构造上揭示了木材密度变化的内在机理。

大鼠肝脏再生过程中细胞标志物演变与骨髓细胞增生

目的:为研究大鼠在部分肝切除术后肝再生过程中是否存在骨髓细胞的增生与动员以支持肝脏再生过程,以及肝卵圆细胞(hepatic oval cells,HOC)在体内细胞标志物的演变过程. 方法:SD(Sprague-Dawley)大鼠81只,随机分为3组: 2/3部分肝切除组(partial hepatectomy,PHx)、2/3部分肝切除加2-乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene, 2AAF)预处理组(PHx+2AAF)及假手术组,每组分为9小组(n=3),分别于术后1,2,4,6,8,12,16, 20,24 d采集大鼠骨髓细胞及再生肝组织;采用percoll密度梯度液分离骨髓细胞中的单个核细胞,并用流式细胞分析技术检测单个核细胞中CD34+,CD45+细胞比例; 采用冰冻组织切片技术进行再生肝组织切片,并用免疫荧光组织化学染色检测再生组织中与CD34共表达的部分造血干细胞、肝卵圆细胞及肝细胞的细胞标志物Thy1.1,CD45,CK19,vimentin,AFP,Alb. 结果:在PHx模型中,流式细胞检测结果显示大鼠骨髓单个核细胞中CD34+及CD45+细胞在术后2,4, 6 d与对照组相比增高(分别为2.774±0.166 vs 1.903±0.044,P=0.016<0.05;3.164±0.056 vs 1.862±0.057, P=0.002<0.01;2.708±0.160 vs 1.897±0.149,P= 0.032<0.05),免疫荧光组织化学染色结果示在肝组织中第4 d发现少量CD34,CD45共表达细胞,但未检出其他共表达的细胞标志物.在PHx+2AAF模型中, 流式细胞仪检测结果示CD34+及CD45+细胞于术后2, 4 d与对照组相比增高(分别为2.472±0.141 vs 1.903±0.044,P=0.020<0.05;2.985±0.120 vs 1.862±0.057, P=o.008<0.01),荧光免疫组织化学染色显示其再生肝组织中与CD34共表达的抗原Thy1.1,CK19,Alb, AFP,vimentin等存在动态演变:在标志物出现过程中,Thy1.1最早出现,随后可检出AFP,vimentin, CK19,而Alb最后检出;在标志物的消失过程,则Thy1.1, Alb,CK19最早消失,随后AFP,vimentin未检出. 结论:大鼠在急性肝损时的肝再生过程中存在骨髓CD34+与CD45+的细胞增生现象,再生肝组织中与CD34共表达抗原的动态演变可能反映肝卵圆细胞在体内的产生与分化的演变过程.

互补引物/模板评价毕加酵母表达的丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶

构建含有感染性克隆HCV非结构基因 5b区序列的酵母表达质粒 ,转化毕加酵母 ,获得持续、可溶性HCVRNA依赖的RNA聚合酶 (RdRp)的表达 ,纯化蛋白在SDS -PAGE及Westernblot中显示出特异性的 6 4 2kDHCVRdRp蛋白带 ,同聚引物 /模板测定显示RdRp的活性极低 ,延长反应时间 ,RNA聚合活性仅轻度升高。采用合成的杂聚互补引物 /模板 ,未发现核苷酸在毕加酵母表达的RdRp作用下掺入模板 ,随时间延长 ,杂聚互补引物 /模板降解。

用流式细胞仪富集大鼠骨髓干细胞

目的 建立大鼠骨髓干细胞富集的方法。方法 用常规方法从大鼠胫骨中获取骨髓细胞 ,采用红细胞裂解液去除红细胞 ,然后以PE标记的CD3、CD4 5RA抗体及FITC标记的Thy抗体标记细胞 ,最后通过流式细胞仪检测并分选Thy+CD3- CD4 5RA- 细胞。结果 ①大鼠骨髓细胞中CD3+ 、CD4 5RA+ 和Thy+ 细胞分别约占 14 .1%、4 .2 %和 2 0 .8% ;②流式细胞仪分选的Thy+ CD3- CD4 5RA- 细胞约占 2 .8%。结论 应用红细胞裂解液去除红细胞及通过流式细胞仪分离Thy+ CD3-CD4 5RA- 细胞是一种较有效的富集大鼠骨髓干细胞的方法。

CD4^+CD25^+调节性T细胞在慢性乙型肝炎患者免疫发病机制中的作用

目的:探探讨CD4^+CD25^+调节性T细胞(regulatory T Cell,Treg)在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者免疫发病机制中的作用以及其可能在治疗中的应用前景.方法:收集未经抗病毒治疗的CHB患者34例和健康对照18例外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)标本,以三色/四色流式分析法对PBMC中CD4^+CD25^+ Treg的频率及表面分子表达进行分析,并同时通过磁珠分选去除CHB患者PBMC中的CD4^+CD25^+Treg,分别以MHC-肽-五聚体法和酶联斑点计数法(enzyme-linked immunospot assay,Elispot)检测HBV core18-27抗原肽刺激的对HBV特异性的CTL(cytotoxic T lymphocyte)频率的升高以及IFN-γ的分泌.结果:CHB患者外周血中CD4^+CD25^+ CD45RO^+CTLA4^+T细胞群以及CD4^+CD127^(lo)CD25^(hi-int)T细胞群所占CD4^+T细胞群的比例与健康对照相比均明显上升(3.78%±1.87%.4.40%±2.11%vs 1.58%±0.76%,2.11%±1.26%;t=4.86,t=5.96;P<0.01)去除CHB患者中CD4^+CD25^+Treg后,特异性CTL的频率以及其分泌IFN-γ的频数与未去除组比出现显著上调(0.94%±0.38%,26±13 vs 0.20%±0.18%,119±30;t=5.25,t= 9.886;P<0.01).结论:CHB患者循环中增多的Treg可能参与抑制抗HBV的免疫应答抑制,去除Treg以及联合病毒抗原肽刺激的进一步研究可能为CHB的免疫治疗提供新的思路.

干扰素刺激基因ISG20真核表达载体的构建及其抗丙型肝炎病毒复制作用的研究

目的研究IFN-α抗HCV的作用机理及了解ISG20是否参与介导IFN-α对HCV的抑制作用。方法用RT-PCR法及融合PCR法分别获得野生型及突变型ISG20cDNA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,转染含HCV复制子的Huh7细胞进行瞬时表达,通过Northernblot及Westernblot分别检测HCVRNA及NS5A蛋白水平,研究表达ISG20对HCV复制子的影响。结果构建的野生型及突变型ISG20真核表达载体在mRNA水平及蛋白水平的表达均得到证实,并且发现表达野生型ISG20对HCV复制子RNA有抑制作用。结论成功克隆及表达了ISG20,并对其抗病毒作用进行了初步研究,提示ISG20可能介导IFN-α对HCV的抑制作用。

NY-ESO-1和MAGE-A3抗原肽诱导肝癌患者的免疫应答研究

目的利用合成的HLA-A02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽,体外通过抗原递呈细胞诱导HCC患者外周血T淋巴细胞,从而成功诱导出特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。方法通过SSP方法筛选20例HLA-A*02的HCC患者的HLA亚型;通过逆转录多聚酶链反应和测序分析NY-ESO-1和MAGE-A3在肝癌组织中的表达以及多肽表位密集区的核苷酸变异状况;体外用细胞因子培养HCC患者外周血来源的树突状细胞(DC);人工合成HLA-A*02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279多肽,直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外同T淋巴细胞孵育16d后,利用Elispot、细胞内细胞因子染色和四聚体实验检测T细胞免疫应答。结果20例HLA-A*02患者中,NY-ESO-1mRNA阳性患者为11例,MAGE-A3mRNA阳性患者12例。中国HCC患者表达的NY-ESO-1和MAGE-A3序列高度保守。经多肽直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外活化外周血T淋巴细胞,4例(36.4%)NY-ESO-1阳性HCC患者以及4例(33.3%)MAGE-A3患者产生针对多肽特异性的CD8+T细胞免疫应答。不同HLA-A*02亚型HCC患者可产生针对NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽的免疫应答。结论NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽可以诱导出针对抗原肽的特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。提示HLA-A*02限制性的NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。

中国株丙型肝炎病毒(HCV)结构区蛋白在昆虫细胞中的表达及加工

利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了完整的中国河北株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构蛋白。免疫印迹实验结果显示，表达产物中有一系列分子量不同、可以与ＨＣＶ抗体阳性病人血清反应的蛋白，表明结构蛋白被宿主细胞蛋白酶切割与加工，相应分别为２０ｋＤ的核心蛋白、３２ｋＤ糖基化的Ｅ１蛋白、４０ｋＤ的未糖化的Ｅ２蛋白和７０ｋＤ糖基化的Ｅ２蛋白，另有８０ｋＤ及１００ｋＤ的两组前体蛋白。利用表达产物检测慢性ＨＣＶ感染者血清，发现Ｅ２抗体检出率很高，而其中一部分核心抗体为阴性。

双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的克隆表达及其对丙型肝炎病毒蛋白合成的抑制作用

α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子———双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性.而关于PKR是否在IFN-α抗HCV的机理中起抑制作用目前仍有争议.为研究PKR对HCV蛋白合成环节是否有抑制作用,通过构建野生型PKR真核表达载体(pPKRwt)及主要起负性调节作用的缺失突变PKR真核表达载体(pPKRΔ6),并将pPKRwt/pPKRΔ6与HCV复制子RNA同时转染Huh7细胞进行共表达,用Western印迹检测HCV IRES下游的NPTⅡ蛋白表达水平,与转染空载体的对照细胞及单用IFN-α处理的细胞相比较.结果显示:表达PKRwt的细胞中NPTⅡ蛋白水平低于转染空载体的对照细胞,但高于经IFN-α单独处理的细胞;表达PKRΔ6的细胞中NPTⅡ蛋白水平与对照细胞无明显差别,但PKRΔ能部分抵消IFN-α的抑制作用,说明在IFN-α抑制HCV IRES指导的蛋白合成中,PKR有一定的抑制作用,但可能还有其它的PKR非依赖机制参与.

用细胞内细胞因子染色方法检测HLA-A~*02个体CD8^+T细胞的免疫应答

目的 :用细胞内细胞因子染色方法 (ICCS)检测不同HLA A 0 2个体的CD8+ T细胞对流感病毒多肽的免疫应答状况。方法 :采用SSP法确定HLA A 0 2亚型 ;分离HLA A 0 2个体的外周血单个核细胞 (PBMC) ,与流感病毒特异的HLA A 0 2 0 1限制性CTL表位多肽 (IMP5 8 6 6 ,GILGFVFTL)孵育 ,ICCS检测CD8+ T细胞分泌细胞因子IFN γ、IL 2和TNF α。结果 :发现HLA A 0 2不同亚型的人PBMC对流感病毒多肽均具有记忆性免疫应答。结论 :①ICCS方法可特异性定量检测T细胞活化状态 ;②HLA A 0 2人群中普遍存在对IMP5 8 6 6多肽的记忆性免疫应答 ;③对于HLA A 0 2 0 1限制性多肽 ,与其它不同HLA A 0 2亚型间存在交叉反应性。

基因扩增产物的固相杂交-酶联显色方法的建立

建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法．将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的病毒基因产物，与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色，读取光密度值．应用本方法对血清中乙型、丙型肝炎病毒核酸定量检测，灵敏度分别可达１－５拷贝／反应．此方法简便、快速、特异性好、敏感性高、半定量指标客观，可广泛应用于肝炎病毒感染的临床诊断和疗效评价．

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞亚群相对数量特点的分析

目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血树突状细胞亚群(DC1和DC2)相对数量特点。方法采集健康人和慢性乙型肝炎患者外周静脉抗凝全血,利用荧光抗体标记和流式细胞仪检测外周血树突状细胞亚群,DC1的特异性标记为Lineage-HLA-DR+CD11c+,DC2的特异性标记为Lineage-HLA-DR+CD123+;电化学发光检测血清乙型肝炎病毒标志。结果慢性乙型肝炎患者外周血DC2相对数量高于健康人近两倍,但缺少统计学意义,DC1相对数量在两者间没有差别;血清HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者外周血DC2相对数量显著增高(P=0.002),差异存在于与HBeAg阳性患者和健康人比较中(分别D1,2=129,P<0.01;D2,3=108,P<0.05),而在上述3组中DC1相对数量无差异(P=0.183)。结论慢性乙型肝炎患者外周血DC2增加与HBeAg血清转换有关,提示DC2可能有抑制病毒的作用。

中国丁型肝炎病毒四川株的抗原表达及其某些特征的研究

利用人工合成的丁型肝炎病毒(HDV)特异引物和PCR法,从本实验室克隆的含我国四川株HDV-cDNA抗原编码区的重组质粒(PGEM/HDC707和PGEM/HDC274)中,获得2个长度分别为653bp(位于1610-957)和220bp(位于1610-1390)的片段,经Klenow DNA聚合酶补平后,平端插入表达载体pBV220的P_RP_L.串连启动子下游的SmaⅠ位点,转化大肠杆菌DH5α。通过原位杂交和快提抗原,分别筛选到表达不同长度抗原的阳性克隆。由核苷酸推导,它们分别由214和74个氨基酸组成。SDS-PAGE和Western blot表明,大抗原的主要分子量为为29kD,另有24kD和17kD的小肽;小抗原是分子量为10kD的单一条带。RNA结合能力试验证明,大抗原具有结合RNA的特性,而小抗原没有这种特性。此外,大抗原还有结合Neo-RNA的活性,其结合机理及其与病毒复制的关系有待进一步研究。本研究证明,保留HDV抗原编码区近N端的57个氨基酸就具有抗原性。这种基因工程表达的丁肝病毒抗原具有很好的免疫原性,用它免疫豚鼠可产生抗HD抗体。中国株丁肝抗原的表达成功和抗体的制备对于发展我国丁肝诊断试剂,研究我国丁肝病毒特征均具有重要意义。

DMSO促进HepG2细胞感染乙型肝炎病毒后核心蛋白入核

目的:探讨DMSO诱导处理的HepG2细胞被HBV感染的作用机制.方法:将HepG2分为DMSO处理组和对照组,分别用添加或不添加2%DMSO的DMEM培养基培养4 d.将HBV病毒颗粒(1000拷贝/细胞)加入培养基中于37℃感染12h.以蛋白免疫印迹,免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察HBcAg在细胞内的定位.选择性PCR检测HBV cccDNA,流式细胞分析仪检测细胞周期.结果:对照组HepG2细胞在感染HBV阳性血清后,HBcAg在细胞质内分布,核内呈阴性,至感染后2 d细胞内核心蛋白消失,未检出明显的cccDNA信号.2%DMSO处理后的HepG2细胞感染后12 h细胞质内HBcAg水平明显高于对照组,感染后24 h HBcAg在核周浓集.在感染后24 h和48 h核内HBcAg明显增高,且cccDNA结果阳性.流式分析结果显示DMSO处理后处于G_1/G_0和G_2/M期的HepG2比例升高,处于有丝分裂期的HepG2细胞内HBcAg弥散分布于全细胞.结论:HepG2细胞感染HBV后核心颗粒不能穿过核孔携带HBV DNA进入细胞核可能是其抵制HBV感染的重要原因.DMSO可促进HBV核心颗粒进入细胞核而有助于感染.

中国人丁型肝炎病毒抗原编码区基因的cDNA克隆和序列分析

从我国四川一丁型肝炎病毒抗原(HDAg)、HDV RNA双阳性的HBsAg携带者血清中提取RNA,采用人工合成的引物进行4次逆转录和聚合酶链反应(PCR),获得了长度分别为707bp、414bp、876bp和274bp的4个HDV cDNA片段,并对其进行了克隆和序列分析。其抗原编码区核苷酸序列与美国(Makino)、意大利(Wang)、英国(Saldanha)和我国台湾株(Chao)等株比较同源性,分别为99.4％、92.1％、94.3％和91.4％,由它推导的氨基酸序列的同源性分别为99.1％、87.9％、88.2％和89.3％,并发现了4个集中保守的区域。

阳离子脂质材料和聚乙二醇对脂质体细胞转染率及膜流动性的影响

目的 制备包封荧光素钠 (FS)的脂质体 ,考察阳离子脂质材料 (DC chol)和聚乙二醇 (PEG)对脂质体包封率、细胞转染率及膜流动性的影响。方法 以FS作为模型物质 ,制备并分离脂质体 ,测定脂质体包封率 ;通过观察荧光光谱的变化考察FS与脂质体膜之间的相互作用 ;以HepG2 2 .2 .15为细胞模型观察脂质体对FS细胞转染率的影响 ;通过荧光偏振技术考察阳离子脂质材料和PEG对脂质体膜流动性的影响。结果 阳离子脂质材料和PEG能提高脂质体包封率 ( 0 6 4 %～ 86 5 7% )、细胞转染率 ( 2 18%～ 4 8 4 6 % )及脂质体膜流动性 ,PEG分子质量的增大有利于包封率、转染率的提高 ,并增加脂质体膜的流动性。结论 在脂质体处方中加入阳离子脂质材料和高分子量的PEG有利于提高包封率。