16S rRNA测序探讨岭南湿证人群肠道菌群结构变化

目的:探讨岭南湿证人群的肠道菌群结构。方法:利用高通量基因测序手段,通过对11名湿证志愿者和11名正常志愿者的粪便样本进行肠道菌群16S rRNA扩增子测序,采用OTU聚类分析和比对注释,对样本物种丰度和样本间门、科、属、种等水平上的差异进行统计分析,找出湿证组与正常组的肠道微生态结构差异,并用PICRUSt软件预测差异功能通路。结果:湿证人群肠道菌群分布较健康对照组存在明显差异,主要体现为群落丰富度指数差异显著,梭杆菌门差异最大,丰度上湿证组减少86.5%,有3个科、6个属、9个种水平上均表现出显著差异,另外湿证组与正常组在9个功能通路上存在显著不同,分别是:半胱氨酸和甲硫氨酸代谢、能量代谢、叶酸生物合成、半乳糖代谢、甘油磷脂代谢、脂多糖生物合成蛋白、氮代谢、氧化磷酸化作用、五磷酸途径。结论:湿证症状的产生可能与肠道菌群结构改变有关。

疏肝理脾类方调控色氨酸代谢的抗抑郁作用机制及共性药效物质

探究疏肝理脾类方通过调控色氨酸代谢的抗抑郁作用机制,并找出其共性的药效物质。运用超高效液相色谱飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术建立疏肝理脾类方的指纹图谱,鉴定出其中124种成分;三联一复合应激法复制抑郁小鼠模型,分组给药柴胡疏肝散、四逆散、逍遥散。与模型组相比,各给药组体质量、糖水偏好和自主活动行为方面均有改善作用,其中柴胡疏肝散作用优于四逆散和逍遥散;三重四极杆液质联用法测定血、肝、脑和结肠组织等中5-羟色胺(5-HT)、犬尿氨酸(KYN)、色氨酸(TRP)的含量和肝中色氨酸-2,3-双加氧酶(TDO)活性,采用Western blot和RT-PCR法分别检测TDO酶蛋白和基因表达,发现3种方药不同程度升高5-HT/KYN比例,减小KYN/TRP的比例,降低肝脏中TDO酶表达和酶活性,对色氨酸代谢调节作用的大小顺序为柴胡疏肝散>四逆散>逍遥散;通过灰色关联度分析疏肝理脾类方指纹图谱中色谱峰与色氨酸代谢药效指标的相关性,找到其中与色氨酸代谢关联度最高的化学成分主要来自白芍、陈皮、枳实、枳壳;利用UPLC-Q-TOFMS对这些成分在血浆内的移行情况进行研究,共鉴定出其中18种原型成分和36种代谢产物。表明柴胡疏肝散、四逆散、逍遥散可通过降低肝中TDO酶表达、调控色氨酸代谢起到抗抑郁作用,方中白芍以及芸香科柑橘属的陈皮、枳实、枳壳所含成分为其共性药效物质,对调节色氨酸代谢有重要作用。

HPLC-ELSD指纹图谱分析提取与炮制对柴胡中化学成分的影响

目的：建立柴胡HPLC-ELSD指纹图谱，分析柴胡主要成分在提取和炮制过程中的变化规律。方法：色谱条件为PhenomenexKinetexC18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（0-60min，25％～58％A），柱温30℃，流速1．0mL·min｜^-1，进样量10μL，检测器为蒸发光检测器，氮气流速3．0mL·min^-1；以此色谱条件分别对4种样品（柴胡水提液、柴胡醇提液、醋柴胡水提液、醋柴胡醇提液）进行指纹图谱研究，并测定柴胡皂苷a，d，b，，b：的含量。结果：得到4种柴胡样品指纹图谱，共指认23个色谱峰，各样品的指纹图谱共有模式图不尽相同，成分色谱峰存在较大差异。柴胡经水提加热回流或醋炙后会使原生皂苷向次生皂苷转化，其中醋柴胡水提液中的原生皂苷含量最少，次生皂苷含量最多，柴胡醇提液中次生皂苷含量最少。结论：所建立的HPLC-ELSD指纹图谱可作为柴胡化学成分分析测定的方法；柴胡经水提或醋炙后化学成分变化较大，含柴胡制剂的临床使用及质量评价应充分考虑到柴胡皂苷类成分的转变情况。