DNase Ⅰ预处理和样本储存时间对血浆中性粒细胞胞外诱捕网相关指标检测结果的影响

目的 分析DNase Ⅰ预处理和样本储存时间对血浆样本中性粒细胞胞外诱捕网(NET)检测结果的影响。方法 随机筛选无基础疾病且无吸烟史的4名体检健康者,采集其外周血,提取血浆,检测NET的4个代表性指标[双链DNA(dsDNA)、瓜氨酸化组蛋白3(citH3)、核小体、髓过氧化物酶(MPO)-DNA复合物]。分析DNase Ⅰ预处理血浆对MPO-DNA复合物检测结果的影响。将样本采集2.5 h的检测结果作为基线值,比较样本于4℃低温冰箱放置12、24、48 h后,4项指标检测结果的差异。结果 经DNase Ⅰ预处理和未经DNase Ⅰ预处理血浆MPO-DNA复合物检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。血浆样本于4℃低温冰箱放置12、24、48h,dsDNA、MPO-DNA复合物含量稳定,各时间点检测结果差异无统计学意义(P>0.05);citH3在样本放置24 h时有所升高,核小体在样本放置12 h时有所降低,但各时间点检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 DNase Ⅰ预处理血浆对MPO-DNA复合物的检测结果无影响。血浆样本在4℃低温冰箱放置48 h NET的4个代表性指标均相对稳定,但建议在样本采集12 h内尽快冻存血浆样本。

肝素及小肝素分子对培养平滑肌细胞的双重调节作用

为研究肝素及小肝素分子对培养的平滑肌细胞生长的作用 ,以探讨其是否可以作为一种抗血管平滑肌细胞增殖的药物 ,采用3H -胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法观察肝素及小肝素分子对培养的人主动脉平滑肌细胞合成DNA的影响。肝素及小肝素分子的量以糖醛酸表示 ,以其浓度计算 (18、35和 70mg/L)。结果发现 ,肝素及小肝素分子对生长良好的平滑肌细胞有抑制作用 ,不同浓度肝素的抑制率分别为 6 6 %、6 9%和 6 9% ,而不同浓度小肝素分子抑制率分别为 6 0 %、6 8%和 6 7%。肝素及小肝素分子对生长不良的平滑肌细胞有促增殖作用 ,肝素促增殖率为149%、140 %和 180 % ,小肝素分子为 2 0 7%、2 46 %和 30 9%。结果提示肝素及小肝素分子对培养不同状态的平滑肌细胞有抑制或促进增殖的双重调节作用。

人脐静脉内皮细胞条件培养液对离体平滑肌细胞增殖的影响

为了探讨多年培养汇合后的人脐静脉内皮细胞条件培养液对培养的人胎儿主动脉平滑肌细胞增殖的影响，在收集人脐静脉内皮细胞条件培养液后，用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换柱和不同浓度的ＮａＣｌ溶液梯度洗脱，分为Ａ液（含硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、硫酸皮肤素蛋白聚糖和硫酸软骨素－硫酸皮肤素蛋白糖）、Ｂ液（只含较高浓度的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖）和Ｃ液（含硫酸皮肤素蛋白聚糖和硫酸软骨素－硫酸皮肤素蛋白聚糖）三种成分，用３Ｈ－ｄＲ掺入法及细胞计数法分别观察上述三种培养液对培养的人胎儿主动脉平滑肌细胞增殖的影响。发现三种培养液对培养的人胎儿主动脉平滑肌细胞的增殖均有抑制作用，抑制程度依次为Ｂ液＞Ａ液＞Ｃ液。结果提示，在人脐静脉内皮细胞条件培养液抑制人胎儿主动脉平滑肌细胞增殖中，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖起主要作用。

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长的影响

为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用，用解聚提取及离子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ，用倒置显微镜、细胞计数、及￣３Ｎ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＦＣ）生长的影响。结果发现：（１）倒置显微镜下观察，加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）．（２）随着培养时间增加（２４，４８及７２ｈ）．根据细胞计数计算出同一剂量的ＨＳＰＧ（１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）对ｈＵＶＥＣ的促增殖％增高（分别为１４％，３０％及３７％）。（３）随着加入ＨＳＰＧ浓度的升高（４．３，８．５及１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ．培养７２ｈ）．根据￣３Ｈ－ＴｄＲ参入计算出ＨＳＰＧ对ｈＵＶＥＣ的促增殖％亦增高（分别为４９％，７１％及９８％）。故人主动脉ＨＳＰＧ对培养的人脐静脉内皮细胞有促增殖作用。

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人脐静脉内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

以[35S」-Na2SO4为示踪物，观察人正常主动脉中的硫酸乙酸肝素蛋白聚糖（HSPG）对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（hUVEC）合成蛋白聚糖（PG）的影响．用解聚提取法及离子交换柱层析分离人主动脉HSPG．35S-PGs的混合物用离子交换及凝胶过滤柱层析法分离35S-HSPG，35S-硫酸软骨素-硫酸皮肤素PG（35S-CSDSPG）及35S-硫酸皮肤素PG（35S-DSPG）．结果发现实验组（加HSPG）与对照组（未加HSPG）相比，hU-VEC的35S-PGs总量（培养液+细胞层）无差别，但实验组培养液中35S-PGs总量升高、35S-DSPG、35S-CSDSPG及其相对百分含量均升高，而35S-HSPG及其百分含量降低．细胞层的35S-PGs，35S-HSPG及其相对百分含量降低，35S-DSPG及其相对百分含量升高，而CSDSPG未见差别．

人动脉壁蛋白聚糖与血清脂蛋白形成的不溶性复合物

本文报道了人主动脉壁中正常及异常(脂纹,FS)区的三种蛋白聚糖(PG)即:硫酸软骨素PG(CSPG)、硫酸皮肤素—硫酸软骨素PG(DSCSPG)及硫酸乙酰肝素PG(HSPG)与血清极低密度脂蛋白(VLDL)及低密度脂蛋白(LDL)所形成的不溶性复合物。在30mmol/L Ca^(2+)对,三种PG都能与这两种脂蛋白形成不溶性复合物,随放置时间的增加,形成的复合物都发生解离,但其复合物形成的曲线及解离程度明显不同。DSCSPG与CSPG比较,前者与两种脂蛋白更易形成不溶性复合物且不易解离。HSPG与两种脂蛋白形成不溶性复合物所需时间远大于CSPG及DSCSPG。FS区及正常区三种PG形成复合物曲线类型相似,异常区CSPG、DSCSPG与VLDL形成的复合物量低于正常区的相应PG,而与VLDL则高于正常区的相应PG。异常区的HSPG与两种脂蛋白形成不溶性复合物的量均高于正常区。

红细胞分布宽度和高敏C反应蛋白对老年心衰患者住院死亡的预测价值

目的探讨老年心衰患者红细胞体积分布宽度(red cell volume distribution width,RDW)和高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactiveprotein,hs-CRP)与住院死亡风险的相关性,比较二者对住院死亡率的预测价值。方法 453例心衰病房住院患者,按住院期间是否死亡分为死亡组和存活组,比较两组RDW、hs-CRP差异。按入院时NYHA心功能分级分组,比较各组RDW、hs-CRP差异,分析两者与心功能分级的相关性。ROC曲线分析RDW和hs-CRP预测患者住院死亡的价值。结果住院死亡组RDW、hs-CRP(14.8%,9.53 mg/L)明显高于存活组(13.5%,3.66 mg/L),差异有统计学意义(P<0.01)。RDW随心功能分级的增加逐渐升高(13.0%、13.3%、13.7%、14.5%),hs-CRP在心功能Ⅱ级到Ⅳ级呈升高趋势(1.94、3.42、4.66 mg/L),各组差异有统计学意义(均P<0.01)。RDW、hs-CRP与心功能分级之间显著相关,相关系数分别为0.334、0.227(均P<0.01)。RDW预测患者住院死亡的AUC为0.629(P=0.049),hs-CRP为0.628(P=0.051),NT-proBNP为0.796(P<0.001)。RDW高于切点者的住院死亡率(3.39%)约为低于切点者(1.15%)的3倍,hs-CRP约为4倍(死亡率:3.79%,1.05%),而NT-proBNP约为8倍(8.97%,1.04%)。当RDW>13.55%且NT-proBNP>3 542.9 fmol/ml时,患者的住院死亡率(10.7%)约为两者都低(0.9%)的12倍。hs-CRP>4.89 mg/L且NT-proBNP>3 542.9 fmol/ml时,住院死亡率(12.9%)约为两者都低(1.14%)的11倍。结论心衰患者入院时RDW、hs-CRP升高与住院死亡率高有关系,二者判断住院死亡的准确性较低,但与NT-proBNP一起可以提高NT-proBNP判断的准确性。

心血管疾病生物标志物——脂蛋白相关磷脂酶A2的临床应用价值

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)是血管特异的炎性因子,在动脉粥样硬化过程中发挥着重要作用。Lp-PLA2作为近年来热门的心血管疾病危险因子得到了大量的组织病理学、临床试验及流行病学研究的证实。但目前对于Lp-PLA2的心血管疾病风险预测价值仍存有一定的争议,如新近研究指出对于正常、低危人群以及服用降脂药物的人群,Lp-PLA2不具有风险预测价值。此外Lp-PLA2活性的特异性抑制剂Darapladib业已在人群中完成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验。本文将就目前有关Lp-PLA2在心血管疾病的价值、争议以及特异性抑制剂的研究进展做一综述。

化学发光免疫法检测醛固酮和肾素浓度及对原发性醛固酮增多症的诊断价值的评价

目的：对化学发光免疫法（CLIA）检测醛固酮和肾素浓度进行方法学评价,并通过和放射免疫法（RIA）比较评价其对原发性醛固酮增多症（原醛）的诊断价值。方法：依据美国临床实验室标准化协会的相关方案,对CLIA检测醛固酮和肾素浓度的精密度、准确性、线性范围及参考值范围进行评价和验证,同时对40例高血压原因待查患者分别用RIA和CLIA检测肾素活性或肾素浓度及醛固酮浓度,以临床诊断为金标准,比较两种方法测得的醛固酮浓度/肾素活性或浓度的比值（ARR或ADRR）用于原醛诊断的特异性和敏感性。结果：CLIA检测醛固酮和肾素浓度的批内和批间精密度分别小于5%和10%;回收率分别为102%和95%;醛固酮浓度在3~74 ng/dl范围内、肾素浓度在0.99~330.00μIU/ml范围内,线性关系良好;20例健康受试者除2例肾素浓度超过参考值范围,20例醛固酮浓度和ADRR均在厂商提供的正常人参考范围内。高血压原因待查患者的筛查试验结果显示CLIA和RIA的检测敏感性相同,为85.7%,特异性则分别为97.0%和94.0%。结论：CLIA具有操作简单、重复性好、无放射性污染等优点,CLIA的检测结果符合临床要求,厂商提供的正常参考值范围可用于临床,本研究推荐用CLIA替代RIA。

溶血磷脂酸对心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及机制

目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)对心肌细胞缺氧/复氧诱导损伤的保护作用及机制。方法:建立H9c2心肌细胞和原代乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型。实验分组:对照组:不做任何处理;缺氧/复氧组(H/R组):无血清培养的细胞在缺氧罐中缺氧24 h后,换含10%胎牛血清的DMEM培养液在常氧条件下培养3 h;LPA预处理组(H/R+LPA组)和LPA3受体特异激动剂(OMPT)预处理组(H/R+OMPT组):细胞分别用LPA(1,10,25μM)和OMPT(1,5,10μM)处理1 h后,进行缺氧/复氧,复氧时不加LPA和OMPT。台盼蓝染色和细胞活性试剂盒检测细胞活力。流式细胞术检测凋亡细胞,Caspase-3/7活性检测试剂盒分析Caspase-3/7活性,免疫印迹检测凋亡相关蛋白包括裂解的Caspase-3,Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与对照组相比,H/R组的H9c2心肌细胞的活细胞数和细胞存活率均降低(P均<0.05);早期凋亡细胞数增加(P<0.05)。与H/R组相比,H/R+LPA组的心肌细胞活细胞数和细胞存活率增加(P均<0.05),其中以10μM浓度的LPA作用最为明显。10μM LPA也提高了原代乳鼠心肌细胞存活率(P<0.05)。H/R+LPA组两个浓度(LPA 1,10μM)H9c2心肌细胞的Caspase-3/7活性较H/R组显著降低(P<0.05)。同时,H/R+OMPT组三个浓度较H/R组都减少线粒体促凋亡Bax蛋白表达,增加了线粒体抗凋亡Bcl-2蛋白表达(P<0.05或0.01)。结论:LPA可能通过激活LPA3受体,抑制线粒体依赖的细胞凋亡途径,保护缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤,为心肌缺血再灌注损伤的防治提供了新的理论依据。

溶血磷脂酸抗缺氧无血清诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡作用

在体外缺氧无血清条件下模拟心肌缺血微环境,研究溶血磷脂酸(LPA)对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的抗凋亡作用。应用Hoechst33342染色和膜联蛋白V/PI双染流式细胞术观察细胞凋亡,并利用Western印迹方法检测ERK1/2和Akt的磷酸化水平变化。结果表明缺氧无血清条件引起明显的细胞凋亡,LPA处理6h和1+6h组细胞凋亡率较缺氧无血清组显著降低(P<0.05),而1h组细胞凋亡率与缺氧无血清组无显著性差异。LPA处理组(1h,6h,1+6h组)ERK1/2磷酸化水平较缺氧无血清组降低,Akt磷酸化水平较缺氧无血清组增高。在缺氧无血清环境中,LPA有利于增强BMMSCs的抗凋亡能力,提高BMMSCs存活率,为临床提高BMMSCs治疗缺血性心肌病的疗效提供理论依据。

红细胞体积分布宽度与心衰患者血浆N末端脑钠肽关系的研究

目的观察心衰患者(HF)红细胞体积分布宽度(RDW)与N末端脑钠肽(NT-proBNP)的关系,从而探讨RDW作为maker评价心衰的价值。方法选择2008年10月至2010年3月我院心力衰竭病房明确诊断心衰的患者464例,男312例,女152例。平均年龄60±12岁。用自动化全血细胞分析仪测患者RDW,用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定NT-proBNP浓度,并进行对比分析。结果 464例心衰患者中有218例RDW值>15.0%,异常率为47.0%(218/464);RDW按四分位数分四组,比较各组间NT-proBNP浓度差异,结果显示NT-proBNP浓度在各组段之间均有显著差异(P<0.001),其中高于P75组段的NT-proBNP浓度(3455fmol/ml)是P25组段NT-proBNP浓度(646 fmol/ml)的五倍以上。RDW第3四分位数P75的NT-proBNP浓度(1902 fmol/ml)是第2四分位数P50的NT-proBNP浓度(985 fmol/ml)的两倍;采用统计学Spearman相关分析,RDW与NT-proBNP高度相关(r=0.637,P<0.001)。结论心衰患者RDW水平升高与体内NT-proBNP浓度升高呈正相关,提示RDW可作为诊断心衰及判断预后的maker,是NT-proBNP的有力补充。

心血管疾病患者梅毒血清学检测阳性结果分析

目的分析梅毒血清学检测阳性患者在心血管疾病患者中的分布特点,为心血管疾病的诊断、外科手术治疗和内科介入治疗中需采取的生物安全措施提供实验依据。方法采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)和快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)两种方法对2008年1月至2009年5月入住我院的255例心血管疾病患者标本进行梅毒血清学检测,首先用TPPA初检,初检阳性者采用RPR复检。随机收集同时期TPPA阴性200例作为对照组。分析阳性患者的性别、年龄构成及与心血管疾病的关系。结果在255例TPPA试验阳性患者中,RPR试验复检阳性84例(32.9%),阴性171例(67.1%),其中男性RPR阳性率显著高于女性(X2=5.762,P<0.05),不同年龄组人群阳性率无显著性差异(X2=6.854,P>0.05),但65岁以上患者RPR复检阳性率显著升高(X2=8.607,P<0.01)。TPPA阳性患者中,主动脉相关疾病患病率显著高于对照组(X2=8.392,P<0.01),其中主动脉夹层与主动脉瓣疾病患病率均显著高于对照组(X2=4.435,P<0.05,X2=5.162,P<0.05)。此外,TPPA阳性患者的心力衰竭患病率也显著高于对照组(X2=4.004,P<0.05)。而各类疾病RPR阳性与RPR阴性比较均无统计学差异。结论我院住院患者梅毒血清学检测阳性率男性高于女性,且多为中老年患者。65岁以上患者RPR复检阳性率显著升高。而TPPA阳性患者中,主动脉疾病及心力衰竭患病率显著升高,提示有可能为梅毒所致。临床医生在做有创诊疗时,应作好生物安全防护。

蛋白聚糖和溶血磷脂酸对不同细胞周期心脏成纤维细胞生长的影响

本文研究了蛋白聚糖（pG和）和溶血磷酸（LGA）对培养的处于不同细胞周期的SD乳鼠心脏成纤维细胞生长的影响及PG对LPA生物学活性的调节食用。采用流式细胞术测定细胞所处的周期；3H-TdR参人法测定细胞的DNA合成。研究结果表明：（1）培养至次融汇状态的乳鼠心脏成纤维细胞经低血清（0.4%FBS）饥饿培养48小时，G0/G1期细胞占88.5%；G0/G1期细胞经2%FBS刺激24小时，G2期细胞占91。7%。（2）PGs对G0/G1期和G2期的心脏成纤维细胞的DNA合成均有摄制作用。2.94-47.04μg/ml PGs对G0/G1期细胞DNA合成的摄制率为80%-93%对G2期的抑制率为13%-94%.(3)1-80μmol/L范围内,LPA以浓度依赖方式促进不同细胞周期的心脏成纤维细胞DNA合成增加,50μmol/L LPA诱导G0/G1期和G2期细胞DNA合成的增加分别为78%±和122%±21%。（4）10μmol/L LPA存在下,2.94%-47.04μg/ml PGs使G0/G1期细胞和G2期细胞的DNA合成分别下降为对照的36%±11%-15%±10%和91%±13%-3%±1%,说明PGs可以抑制LPA诱导的心脏成纤维细胞DNA合成.上述研究结果提示:PGs和LPA对乳鼠心脏成纤维细胞G1期至S期的转换有重要的调节作用,并可能通过调节心脏成纤维细胞的生长影响心肌肥厚的形成和发展.

CD40-CD40配体相互作用对内皮细胞促凝活性的影响

目的 :探讨CD40 -CD40配体 (CD40L)相互作用对内皮细胞促凝活性的影响。方法 :建立内皮细胞与巨噬细胞膜共孵育体系 (细胞比例 1∶1 ) ,观察内皮细胞促凝活性、组织因子 (TF)及其抑制物 (TFPI)表达的变化 ,以及阻断CD40 -CD40L相互作用对上述效应的影响。结果 :与巨噬细胞膜共孵育 6h后 ,内皮细胞促凝活性增强 1 0 9倍(P <0 0 1 ) ,TF蛋白的表达亦显著增强。共孵育 3h后 ,TFmRNA表达升高 7 5倍 ,而TFPImRNA仅升高 0 99倍。抗CD40L抗体可分别抑制促凝活性和TFmRNA表达变化的 66 6 %和 51 0 % (P <0 0 1 )。结论 :巨噬细胞通过CD40 -CD40L相互作用增强内皮细胞促凝活性及TF表达 。

两种方法检测清蛋白结果的偏差分析

目的 分析溴甲酚紫法（BCP）和溴甲酚绿法（BCG）检测清蛋白结果之间的偏差,并进行矫正.方法 分别用两种方法检测患者样本222例和质控品25例中的清蛋白含量,统计偏差及两法检测结果的低值率,建立两法检测结果的关系式.结果 ①BCG法检测结果高于BCP法,其低值率则低于BCP法;②两种方法检测质控品中值的结果无显著性差异,而低值差异有统计学显著性意义（t=-7.186,P＜0.01）;③两种方法检测的血清结果均略高于血浆,两者差异有统计学显著性意义（BCG：t=-2.280,P＜0.05;BCP：t=-3.524,P＜0.01）;④建立BCG检测值的校正公式：BCG校正值=1.149×BCG检测值-9.514 9.用50份标本验证此公式,r2=0.951 6,组间比较t=0.745,P=0.459 9.结论 BCG与BCP两种检测方法的不同是造成清蛋白检测结果偏差的主要原因,通过建立BCG法检测结果的矫正公式,可减少两种检测方法的结果偏差.

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响。方法原代培养hUVEC,通过Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态改变,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段,流式细胞术检测AnnexinV/PI联合标记的细胞凋亡率,Westernblot检测P53、Bax的表达及比色法测定caspase3活性。结果同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC出现明显的凋亡形态学改变。琼脂糖凝胶电泳检测可见明显的“DNAladder”图谱。Hcy诱导凋亡细胞数明显增加。同时促进Bax、P53的表达,使caspase3活性显著增强。结论同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC凋亡。

冠心病合并阻塞性睡眠呼吸暂停患者的血液生化指标分析

目的探讨冠心病合并阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea,OSA)患者的多项血液生化指标的变化,旨在为合并有OSA的冠心病患者的治疗提供依据。方法 178例冠心病患者经多导睡眠监测(polysomnogra-phy,PSG),依据呼吸暂停低通气指数(apnea-hypopnea index,AHI),分为四组:OSA阴性组、轻度OSA组、中度OSA组、重度OSA组;检测各组患者的空腹血糖(FG)、糖化血红蛋白(HBA1c)、高敏C-反应蛋白(hsCRP)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标,并将检测结果在各组间做比较。结果 FG在重度OSA组高于OSA阴性组、轻度OSA组和中度OSA组,差异有统计意义(P值分别为0.006、0.000、0.002),且随着OSA的加重而逐步增高;HBA1c在重度OSA组也高于其他三组,差异有统计意义(P值分别为0.004、0.001、0.023),且随着OSA的加重而逐步增高;hsCRP在OSA重度组高于OSA阴性组,差异有统计意义(P=0.040);NT-proBNP、TG、TCHO、HDL-C、LDL-C等各项目组间比较差异均无统计意义(P>0.05)。结论冠心病合并OSA的患者糖代谢紊乱突出;冠心病合并重度OSA的患者存在慢性系统性炎症。对合并有OSA的冠心病患者除常规冠心病、OSA治疗外,应早期筛查糖耐量,采取积极的降糖、抗炎症措施可能对其有益。

别嘌呤醇对同型半胱氨酸和低密度脂蛋白协同损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨别嘌呤醇(Allo)对同型半胱氨酸(Hcy)和低密度脂蛋白(LDL)协同损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用。方法:①将人脐静脉血管内皮细胞与一定浓度的Hcy、LDL及Allo共同培养24小时,分为Hcy(H)组、Hcy+Allo(H+A)组、LDL(L)组、Allo(A)组、LDL+Allo(L+A)组、Hcy+LDL(H+L)组、Hcy+LDL+Allo(H+L+A组,其中Allo在MTT试验中的浓度分别为0.1、0.2、0.3mmol/l)及正常对照组(各n=6孔),应用MTT试验观察Allo是否对其有保护作用。②测定细胞培养上清液乳酸脱氢酶、丙二醛和一氧化氮含量,分别观察内皮细胞损伤、脂质过氧化程度及血管舒张因子产生情况(H+L+A组中Allo为0.2mmol/L)。③同时,利用半定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测内皮型一氧化氮合酶转录水平,以观察Allo是否影响其的转录。结果:H+L组、H+A组、H组、H+L+A组(Allo0.1～0.3mmol/L)细胞与正常对照组相比,吸光度减小,分泌一氧化氮减少,乳酸脱氢酶和丙二醛增加,有显著性差异(P<0.05)。除H+L+A组(Allo0.1mmol/L)外,其余各组细胞吸光度较H+L组均明显升高,有显著性差异(P<0.05)。H+L+A组(Allo0.1～0.3mmol/L)细胞吸光度随着Allo浓度增加而增加。除H组外,余各组与H+L组比较一氧化氮生成量均增加,有显著性差异(P<0.05)。与H+L组比较,其余各组细胞损伤、脂质过氧化程度均减轻,有显著性差异(P<0.05)。内皮型一氧化氮合酶的半定量逆转录聚合酶链式反应结果显示各组间的产物电泳带无显著差异。结论:Allo对Hcy和LDL协同损伤人脐静脉血管内皮细胞有保护作用,提示其抗动脉粥样硬化的作用。

糖皮质激素抗缺氧无血清诱导的大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡作用

目的在体外缺氧无血清条件下模拟心肌缺氧微环境,研究糖皮质激素(氢化可的松)对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的抗凋亡作用。方法分离培养BMMSCs,用氢化可的松预处理30 min后,缺氧无血清同时氢化可的松处理6 h,应用膜联蛋白V/PI双染流式细胞术观察细胞凋亡,并利用Western印迹方法检测caspase-3、ERK1/2和Akt的磷酸化水平变化。结果缺氧无血清条件引起明显的细胞凋亡,氢化可的松处理组细胞凋亡率较缺氧无血清组显著降低(P<0.05)。氢化可的松处理组ERK1/2和Akt磷酸化水平较缺氧无血清升高。结论在缺氧无血清环境中,氢化可的松有利于增强BMMSCs的抗凋亡能力,提高BMMSCs存活率,为临床提高BMMSCs的治疗缺血性心肌病的疗效提供理论依据。