具有T细胞口服免疫耐受作用的β-乳球蛋白水解物的制备及鉴定

以牛乳中主要过敏原β-乳球蛋白为研究对象,制备和鉴定具有T细胞表位和口服免疫耐受性的水解物,旨在为牛乳过敏患者口服免疫治疗方法提供理论依据。采用生物信息学方法预测β-乳球蛋白的T细胞表位,通过质谱分析6种蛋白酶水解β-乳球蛋白水解物的氨基酸序列,用T细胞增殖实验鉴定水解物中多肽免疫耐受作用,体内实验测定小鼠血清特异性抗体(IgE、IgG1、IgG2a)、Th1细胞因子(IFN-γ、IL-17)、Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)、组胺、几丁质酶-3样蛋白1的水平及小鼠脾脏细胞亚群的变化水平,验证β-乳球蛋白水解物的口服免疫治疗活性。研究结果表明:胰蛋白酶、复合蛋白酶和木瓜蛋白酶水解物具有口服耐受性,其中复合蛋白酶和木瓜蛋白酶水解物具有口服耐受性是创新性发现。中性蛋白酶水解物虽然含有T细胞表位,但是仍然具有致敏性。因此含有T细胞表位的水解物不一定具有口服免疫耐受性,需要体内实验验证。研究结论以期为新型抗过敏乳基料的开发和临床治疗牛乳过敏提供参考数据。

基于电子舌技术不同超声处理时间的奶酪滋味区分

为探讨奶酪智能化品质评价的可行性,研究了电子舌专一选择型传感器检测5种传统奶酪和2种进口奶酪过程中的响应信号的特征。采用不同的模式识别方法对奶酪进行分类鉴别,通过主成分分析(principal component analysis,PCA)法、偏最小二乘法将感官评定值与响应值做相关性分析,并探讨了超声处理奶酪对电子舌响应信号的影响。结果表明:应用PCA能够大体反映各类样品的分类信息,PCA降维后的数据能够很好地反映原始数据信息。奶酪的前处理时间不同电子舌传感器的响应值也不同,本实验超声处理条件下对PCA辨别结果影响不大,UMS、GPS和SPS三根传感器与苦、咸味,以PC1为轴呈显著负相关,SWS与甜味以PC2为轴呈正相关。

中国花生致敏蛋白的识别

我国对花生过敏方面的研究很少。本实验利用中国常用花生品种识别鉴定了中国主要的致敏蛋白,比较了国内外花生品种致敏蛋白相对含量的差异,期望找到中国花生过敏发病率较低的原因,为临床食物过敏患者的治疗和低过敏花生品种的培育提供理论依据。研究结果表明:Ara h1和三条Ara h3多肽是中国主要的致敏蛋白,并发现了Ara h1的亚基,分子量为58kD的多肽。Ara h1和Ara h3的相对含量各品种之间差异显著,并且低于国外花生品种。因此中国花生主要致敏蛋白相对含量低可能是导致中国花生过敏发病率较低的主要原因。

中耕方式对土壤理化特性及玉米生长发育影响研究——Ⅰ.中耕方式对玉米生长发育的影响

2002～2003年在0～3次中耕条件下研究了中耕方式对玉米生长发育和产量形成的影响。结果表明,多次中耕增大了玉米倒伏率,降低了玉米最大叶面积指数、株高及各时期叶片叶绿素含量,对花粒期玉米净光合速率、气孔导度、蒸腾速率也产生一定的负面影响。少中耕有增产的趋势,并且可以降低生产成本、增加经济效益。

加工方式和蛋白提取方法对花生蛋白致敏性的影响

加工方式影响花生蛋白的致敏性。本实验系统的研究了中国传统花生制品(水煮和油炸花生)和美国常食用的烘烤花生致敏性的差异,并比较了不同蛋白提取缓冲溶液对花生致敏蛋白提取效率的影响。结果表明:不同花生制品在不同的缓冲溶液中蛋白提取效率不同,水煮和油炸并没有较烘烤方式降低致敏蛋白的数量,而降低花生蛋白的致敏性。因此加工方式并不是导致中国花生过敏发病率低的主要原因。

牛乳α-乳白蛋白IgE线性表位的关键氨基酸识别

α-乳白蛋白是引起牛乳过敏的主要过敏原之一。识别α-乳白蛋白作用表位及影响致敏性的关键氨基酸,对于揭示α-乳白蛋白致敏机理及低致敏乳制品的开发具有重要的意义。本研究采用固相合成技术合成α-乳白蛋白系列多肽,以牛乳过敏患者血清为探针,通过酶联免疫吸附分析法识别α-乳白蛋白的作用表位和关键氨基酸。结果表明:免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig)E作用表位的氨基酸序列定位为aa1-15、aa6-20、aa46-60、aa71-85和aa101-115。α-乳白蛋白IgE作用表位关键氨基酸为第8位的缬氨酸、第9位的苯丙氨酸、第10位的精氨酸、第103位的酪氨酸、第105位的亮氨酸和第107位组氨酸。本研究可以为过敏原c DNA克隆以激活T细胞、降低IgE结合能力提供重要思路。

花生致敏蛋白的研究进展

食物过敏已成为重要的食品安全问题。而花生蛋白是重要的食物过敏原,因此研究花生蛋白致敏的机制,探索脱敏方法,保证花生制品的安全性是亟待解决的课题。本文综述了花生过敏临床症状、花生致敏蛋白的识别及已建立的脱敏方法。并提出了探索合适的蛋白改性方法。

基于电子舌技术区分酸奶的滋味

为探索应用电子舌区分酸奶滋味的可行性,以原味酸奶和风味酸奶为研究对象,应用电子舌交叉选择型传感器进行检测,获得酸奶响应信号值,采用主成分分析(PCA)、判别因子分析(DFA)对酸奶响应信号值进行分类辨别,并通过PCA、偏最小二乘法(PLSR)将感官评定值与响应值做相关性分析。结果表明:基于PCA、DFA方法分析响应信号值,电子舌技术能很好地辨别不同的酸奶。PLSR模型可以较好的预测酸奶的滋味品质,HA传感器与甜和鲜味具有相关性,以PC1为轴,它们呈显著负相关(p<0.05),苦味与BB和JB两根传感器以PC1轴呈显著正相关(p<0.05)。

响应面法优化草鱼内脏蛋白质酶解工艺

为实现草鱼内脏蛋白质的高值化利用,本研究在单因素试验基础上应用响应面试验优化了木瓜蛋白酶水解脱脂草鱼内脏蛋白质的条件,响应面法分析得出4个影响因素的最佳组合为加酶量33 015 U/g、酶解温度62.35℃、酶解时间5.37 h、酶解p H 7.9,此时水解度为44.48%,肽得率为19.68%,水解液鲜味较明显。

中耕方式对土壤理化特性及玉米生长发育影响研究——Ⅱ.中耕方式对土壤理化特性的影响

在0～3次中耕条件下研究了中耕方式对土壤理化特性和玉米产量形成的影响。结果表明,多次中耕降低了0～20cm耕层土壤水分含量,玉米生育后期0～10cm土层土壤容重差异不显著,免中耕处理平均值高于其它处理;收获期10～20cm土壤容重处理间差异显著,在子粒形成期、乳熟期土壤容重差异不显著,其中各时期免中耕土壤容重最大。中耕对土壤孔隙度数量、比例有一定的调节作用。中耕降低了脲酶、中性磷酸酶、过氧化氢酶及转化酶的活性。少中耕有增产的趋势,并且可以降低生产成本、增加经济效益。

牛乳αS1-酪蛋白与大豆蛋白交叉过敏原的识别鉴定

为识别牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原,鉴定其致敏特性,揭示交叉过敏机理,首先以牛乳过敏患者血清、αS1-酪蛋白小鼠单克隆抗体为探针,通过免疫印迹方法识别大豆蛋白交叉过敏原,然后通过生物信息学工具比对了交叉过敏原与αS1-酪蛋白的氨基酸序列相似性,进而通过体外消化实验和加热实验探究交叉过敏原的稳定性。结果表明:牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原为β-伴大豆球蛋白α亚基(Gly m Bd 60K),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明Gly m Bd 60K在2 min消化完全,并且加热对过敏原的交叉反应性没有影响。

草鱼内脏蛋白酶解产物美拉德反应制备调味基料

将草鱼内脏蛋白酶解液与葡萄糖进行美拉德反应后制备出了风味良好的调味基料,最佳反应基本条件为羰氨物质的量比1∶2、反应温度110℃、反应时间30 min、反应p H 8。感官评价表明肉香味和鱼香味较强烈。利用气相色谱-嗅闻-质谱联用仪对美拉德反应前后香气化合物成分进行分析,发现经过美拉德反应之后,香气活性化合物明显增多,检测到19种香气活性化合物,其中包括酮类3种、醛类3种、酯类1种、呋喃类4种、吡嗪类1种、噻唑类1种、萜类2种、烯类2种、醚类1种、酸类1种。

Vc、大蒜粉和柠檬酸对草鱼内脏调味基料风味的改善

以氨态氮、多肽的含量及感官评定值为指标,结合风味物质分析,分别研究了添加大蒜粉、VC和柠檬酸对草鱼内脏蛋白质调味基料风味的影响。结果表明,VC、大蒜粉和柠檬酸均能促进风味化合物的形成,大蒜粉最适添加量为0.1%,检测到22种香味活性化合物;VC最适添加量为0.2%,检测到25种香味活性化合物;柠檬酸最适添加量为1.5%,检测到23种香味活性化合物。

β-乳球蛋白IgE抗原决定簇的识别

以β-乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β-乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β-乳球蛋白IgE抗原决定簇,分析影响致敏性的关键氨基酸,探讨牛乳过敏机理。结果表明:β-乳球蛋白IgE抗原决定簇有4条,氨基酸序列分别为17～31、72～86、92～106、152～166,并且苏氨酸(AA20)、蛋氨酸(AA23)、天冬氨酸(AA27)是影响β-乳球蛋白致敏性的关键氨基酸。说明特异性水解抗原决定簇或定点修饰氨基酸可以实现过敏原脱敏的目的。

牛奶替代品致敏性的识别

为找到牛奶替代资源,以牛奶过敏患者血清为探针,识别牛奶及其制品过敏原,并鉴别山羊奶、水牛奶、驴奶蛋白与牛奶过敏患者血清交叉反应性。结果表明,β-乳球蛋白和a-酪蛋白为牛奶主要过敏原,山羊奶、驴奶总蛋白IgE结合能力低于牛奶,二者可以作为牛奶替代资源。

α_(s1)-酪蛋白IgE抗原决定簇的识别

以αs1-酪蛋白氨基酸序列为模板,错位合成αs1-酪蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定αs1-酪蛋白IgE抗原决定簇,分析影响致敏性的关键氨基酸,探讨牛乳过敏机理。结果表明:αs1-酪蛋白IgE抗原决定簇有5条,它们在αs1-酪蛋白的定位分别为aa21～35、aa26～40、aa91～105、aa141～155、aa186～200。影响αs1-酪蛋白致敏性的关键氨基酸为组氨酸、谷氨酸、脯氨酸。说明特异性水解抗原决定簇或定点修饰过敏原氨基酸实现脱敏的方法是可行的。

基于BALB/C小鼠模型评价牛乳αs1-酪蛋白的致敏特性

目的:评价过敏原的过敏症机理。方法:首先通过口腔灌胃的致敏方式建立αs1-酪蛋白致敏的BALB/C小鼠模型,通过测定小鼠特异性IgE抗体水平进行模型鉴定。评价αs1-酪蛋白对小鼠肥大细胞蛋白酶、组胺、细胞因子水平的影响,并进行临床和病理切片观察。结果:第42天用αs1-酪蛋白大剂量灌胃小鼠后,各组小鼠特异性IgE抗体水平显著升高,都产生不同程度的过敏症状,且中、高剂量组小鼠过敏反应强于低剂量组;以阴性小鼠为对照,致敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ细胞因子含量均显著升高,且随着致敏剂量的增加而增加;组织病理切片结果显示:αs1-酪蛋白中剂量和高剂量组小鼠产生了明显的炎症反应,局部肺泡隔塌陷或增厚,脾脏和胸腺中有淋巴结病灶产生,且小肠黏膜间质有炎细胞浸润。结论:基于BALB/C小鼠模型进一步揭示了αs1-酪蛋白的致敏机理。

降低烘烤花生致敏性的蛋白酶筛选

花生经过烘烤后致敏性增强,水解是降低过敏原致敏性最有效的方法,研究的目的在于筛选有效降低烘烤花生致敏性的蛋白酶.结果表明:Alcalase蛋白酶脱敏效果最好,胃蛋白酶作用效果最不明显.水解效率高的Alcalase、Flavorzyme、Protamex和Protease M蛋白酶两两组合水解花生蛋白,较之单酶水解情况,水解度提高显著,但是花生致敏性降低并不明显,因此研究中Alcalase碱性蛋白酶是降低烘烤花生致敏性的最佳用酶.

人嗜碱性粒细胞肿瘤细胞系KU812F检测牛乳及其替代品致敏性方法的建立

比较牛乳及其替代品释放组胺的能力,以建立体外细胞检测牛乳及替代品疑似过敏原组分致敏性的检测方法。以嗜碱性粒细胞KU812F为研究对象,通过牛乳过敏患者血清的孵育,使细胞处于致敏状态,再以牛乳及其替代品过敏原作为激发物,使细胞脱颗粒释放组胺。结果表明:利用嗜碱性粒细胞KU812F检测牛乳及替代制品组胺释放量的方法具有较高的可靠性及重现性,细胞释放组胺的量与过敏原的剂量相关,在一定的剂量范围内,组胺的释放率与过敏原的剂量呈正比,组胺释放率达到最大之后,组胺释放率与剂量呈负相关。

β-乳球蛋白IgG抗原决定簇的识别

以β-乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β-乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β-乳球蛋白IgG抗原决定簇,探讨牛乳过敏机理.结果表明,β-乳球蛋白IgG抗原决定簇有2条,它们在β-乳球蛋白中的氨基酸序列定位分别为aa22-36和aa127-141.结果表明通过特异性水解抗原决定簇实现牛奶脱敏的方法是可行的.