GnRH-a预处理在冻融胚胎移植中的价值

目的探讨促性腺激素释放激素激动剂(gonadotrophin releasing hormone agonist,GnRH-a)预处理在冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)中的价值。方法回顾分析我科2012年6月至2013年10月因不孕接受FET治疗的507个冻融胚胎移植周期,根据是否接受GnRH-a预处理分为:GnRH-a组(A组)与非GnRH-a组(B组)。分析比较两组患者平均年龄、女性不孕病因、孕激素启动日子宫内膜厚度、移植胚胎数、临床妊娠率及多胎率等之间的差异。结果 A组(60个冻融胚胎移植周期)的临床妊娠率明显高于B组(447个冻融胚胎移植周期),分别为58.34%和43.40%,差异有统计学意义(P<0.05);继续妊娠的观察中,A组胚胎停育及异位妊娠发生率明显低于B组;两组患者平均年龄、移植日子宫内膜厚度、冷冻胚胎复苏率、移植胚胎数目以及优质胚胎率差异均无统计学意义。在盆腔输卵管性不孕人群中,GnRH-a预处理组的临床妊娠率明显高于常规人工周期组(P<0.05)。结论 GnRH-a预处理的方法可以改善子宫内膜容受性,有利于胚胎早期种植,尤其对于盆腔输卵管性不孕患者。

新生期去胸腺小鼠自身免疫性卵巢疾病外周血中Treg细胞的变化及意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)在小鼠自身免疫性卵巢疾病(autoimmune ovarian disease,AOD)发生与发展过程中的变化及意义。方法出生第3天乳鼠摘除胸腺(thymectomized on day 3,D3tx)建立D3tx组和假手术组,免疫组织化学观察小鼠卵巢改变,ELISA检测性激素变化,流式细胞学检测术后小鼠外周血中Treg及T细胞亚群比例的变化。结果胸腺切除后5周卵巢出现炎细胞浸润及卵泡闭锁,血清FSH升高,E2下降。小鼠外周Treg在术后1～3周达到高峰后快速下降,缓慢下降直至术后9周仍高于对照组(P<0.05);AOD发生后,CD3+T细胞明显减低(P<0.001),CD4+T减低(P<0.05),CD8+T无明显统计学差异(P>0.05),CD4+/CD8+T细胞比例有下降趋势(P>0.05),但无统计学意义。结论 Treg参与AOD的发病过程,推测可能在AOD发病初期具有潜在保护作用。

男性避孕纳米粒的制备与体外实验研究

目的构建聚乳酸-羟乙酸共聚物(polylactic acid-glycolic acid,PLGA)包载促卵泡生成素受体表位肽(FSHR32-44)的纳米粒,探讨PLGA材料作为避孕疫苗载体的可行性。方法使用PLGA为载体,制备出包载促卵泡生成素受体的B细胞表位(FSHR32-44)的纳米粒,透射电镜(TEM)观察表观形态,粒径仪检测粒径分布范围和Zeta电位,体外释放试验检测其理化特性。激光共聚焦显微镜观察小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)吞噬FSHR可溶性多肽和FSHR/PLGA NP的能力,流式细胞仪检测FSHR、PLGA NP和FSHR/PLGA NP促骨髓来源DCs成熟能力。结果单乳-溶剂挥发法制备的FSHR/PLGA NP大小粒径分布均匀、表面规整,粒径(296.3±3.5)nm,Zeta电位(-16.1±0.4)m V,FSHR包封率(62.71±2.83)%,并具有缓慢释放抗原的能力;体外细胞水平实验结果显示FSHR表位肽纳米粒易于被DCs摄取,有剂量和时间依赖性,能显著上调DCs表面CD40、CD86、CD83和MHC-Ⅱ功能分子的表达。结论 PLGA包载FSHR多肽有良好的包封率,易被DCs吞噬,并有强的促进DCs成熟作用,可以作为FSHR32-44避孕疫苗的载体。

人Eppin蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达

目的构建人类附睾蛋白酶抑制剂Eppin蛋白原核表达质粒,诱导、表达与纯化后获得到可溶重组蛋白,并检测其免疫学活性。方法将目的基因克隆到表达载体pMALc,转化大肠杆菌表达菌株Rossetta2-OrigamiB(DE3),用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析柱及Superdex 200分子筛层析进行纯化后,使用Thrombin酶切,并对目标蛋白进行质谱及Western印迹鉴定。结果成功构建pMALc-Eppin重组质粒,诱导后在上清中检测到Mr57 000大小的可溶MBP-Eppin融合蛋白。目标蛋白纯化与酶切后仍可溶,SDS-PAGE分析显示重组Eppin蛋白相对分子质量约15 000。肽指纹图谱分析证实目标蛋白的序列与人Eppin蛋白吻合,Western印迹显示其具有抗原性。结论经过优化,Eppin蛋白可在原核系统中以可溶形式表达,为以后研究该蛋白的生物活性、避孕免疫机制及制备避孕疫苗奠定坚实的基础。

卵巢早衰的免疫学研究进展

卵巢早衰(POF)因病因复杂、机制不明,成为一个临床上难治的疾病。大部分卵巢早衰的发病机制不明,已知POF的病因包括医源性因素(如化疗、放疗及外科手术)、自身免疫性因素、遗传因素、感染因素、酶学障碍等。目前越来越多的研究表明,自身免疫是POF的一个重要致病因素,证据表明约20%的POF与自身免疫失调有关,包括HLA-DR抗原的异常表达、抗卵巢抗体等自身抗体等。认为血清抑制素水平、自身抗体可作为POF的预测指标,及时对其行糖皮质激素和雄激素、调节性T细胞的免疫治疗,可以延缓甚至逆转POF。

不孕症患者子宫内膜息肉切除术后不同内膜准备方案的妊娠结局分析

目的探讨不同内膜准备方案对不孕症伴子宫内膜息肉(Endometrial Polyp,EP)切除患者冻融胚胎移植(FET)结局的影响。方法回顾性分析2017年9月至2019年6月在我院EP切除后第1次行FET助孕的677例患者的临床资料,根据内膜准备方案不同分为3组:自然周期组(A组,n=136)、激素替代周期组(B组,n=355)、降调激素替代组(C组,n=186)。比较3组患者的基本资料、移植情况及妊娠结局情况。结果3组患者的基本资料比较均无显著差异(P>0.05);3组间移植优等级胚胎个数、移植胚胎类别比较均无显著差异(P>0.05);3组患者间临床妊娠率、早期流产率和异位妊娠率比较均无显著差异(P>0.05);C组患者既往胚胎移植失败次数显著高于A组和B组(P<0.05);Logisitic分析显示,纠正混杂因素后3组患者间FET妊娠结局比较无显著差异(P>0.05)。结论自然周期、激素替代周期、降调激素替代周期内膜准备方案应用于不孕症伴EP切除术后FET患者能获得相似的妊娠结局。

胸腺切除小鼠自身免疫性卵巢疾病发生发展的时相性变化

目的通过建立小鼠自身免疫性卵巢疾病(autoimmune ovarian disease,AOD)模型,探索AOD中Treg、B淋巴细胞亚群的时相性变化,寻找干预疾病的窗口期,为人类AOD的早诊早治提供线索。方法建立出生第3天胸腺摘除Balb/c模型鼠(thymectomize on day3,D3tx),术后连续动态观察小鼠血清性激素(E2、FSH、LH)、炎症细胞因子(TGF-β、IL-4、IFN-γ、IL-21)、脾脏和盆腔淋巴结中Treg、B淋巴细胞亚群及卵巢组织学改变。结果 D3tx鼠术后第5周血清FSH、LH升高,伴E2下降;卵巢组织中出现较明显的炎细胞浸润及卵泡闭锁。从术后5周开始血清中炎症细胞因子TGF-β和IL-4降低,而IFN-γ和IL-21升高,持续到10周;D3tx组小鼠脾脏和腹股沟淋巴结,腹主动脉旁淋巴结中的Treg细胞在术后1~3周轻微升高,随后逐渐下降,5周后细胞数明显低于对照组(P<0.05);活化B细胞(CD138^-IgD^+)自术后1周起升高,并维持到10周(P<0.05);浆细胞(CD138^+CD19^-IgD^-)则从术后5周起升高,维持到10周(P<0.05)。结论机体免疫功能的时相性改变与AOD的发生发展密切相关,从免疫功能损害发生到卵巢组织学改变存在较明确的窗口期(即术后的1~4周),提示在早期干预和改善免疫功能状况可能改善自身免疫性卵巢疾病的转归。

卵巢早衰患者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞的变化及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(即CD4+CD25+Treg细胞)在卵巢早衰发病机制中的作用。方法:流式细胞仪定量检测卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)患者、卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)患者及健康对照组外周血CD4+T、CD8+T细胞及CD4+CD25+Treg细胞数量,应用3H-thymidine掺入法测定POF患者及对照组外周血CD4+CD25+Treg细胞对效应性T细胞的增殖抑制功能。结果:与对照组相比,POF患者及DOR患者CD4+CD25+Treg细胞比例降低(P<0.01)、POF患者CD4+T/CD8+T细胞比值增高(P<0.05),DOR患者CD4+T/CD8+T细胞比值无明显变化(P>0.05);POF患者免疫抑制功能无明显降低(P>0.05)。结论:CD4+CD25+Treg细胞比例降低与T细胞亚群失衡可能是POF的发病机制。