高效液相色谱法测定饮料中维生素B12的方法验证

目的对高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定饮料中维生素B_(12)含量方法的检测限、定量限、精密度和准确度进行验证。方法样品中的维生素B_(12)经维生素B_(12)免疫亲和柱吸附,再用甲醇洗脱,氮吹仪吹干溶剂后用0.05%磷酸溶液定容。以液相色谱法测定,外标法定量。选用色谱柱Agilent ZORBAX SB-C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),流动相以甲醇-0.05%磷酸溶液梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温30℃,进样体积100μL,于波长361nm处测定样品。结果维生素B_(12)在11.07ng/m~553.52ng/mL范围内线性关系良好,相关系数r为0.999990,加标平均回收率为72.9%(n=6),检出限为0.06ng/g,定量限为0.20ng/g。结论该方法操作简单、检测时间短、结果稳定,是检测饮料中维生素B_(12)简单有效的方法,解决了传统微生物法的操作复杂、检测时间长和重复性差的缺点。经验证该方法的检测限、定量限、精密度和准确度满足质量控制要求,对检测饮料中维生素B_(12)具有较好的参考作用。