ROCK2在ARC中的表达及对晶状体上皮细胞的自噬及氧化损伤的影响

目的探讨Rho激酶2(ROCK2)在年龄相关性白内障(ARC)晶状体前囊膜中的表达及其对H_(2)O_(2)诱导的人晶状体上皮细胞自噬及氧化损伤的影响。方法收集2020年6月~2021年4月在我院行超声乳化白内障吸出术的ARC患者20例,获取晶状体前囊膜,并获取眼科标本库中无眼科疾病、眼球结构完整且晶状体透明的正常晶状体前囊膜。免疫组织化学染色和Western blot检测ROCK2蛋白表达;将人晶状体上皮细胞HLE-B3随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、sh-NC+H_(2)O_(2)组和sh-ROCK2+H_(2)O_(2)组,转染sh-NC或sh-ROCK2至对应组细胞,并用H_(2)O_(2)处理细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞转染效率,MTT法检测各处理组细胞增殖活性,透射电镜观察细胞内自噬现象,自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后观察自噬溶酶体和自噬体水平,Western blot检测细胞中自噬相关蛋白表达情况,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量。结果与正常组织比较,ARC中ROCK2表达增高(P<0.05);转染sh-ROCK2后成功下调了HLE-B3细胞中ROCK2表达水平(P<0.05);与对照组比较,H_(2)O_(2)处理细胞后,细胞增殖活性显著下降,自噬体明显增多,明显激活了自噬溶酶体和自噬体水平,Beclin-1蛋白相对表达量显著升高,LC3-II/LC3-Ⅰ比值显著上调,ROS水平显著上升,SOD和GSH-Px的活性均显著降低,MDA含量则显著升高(均P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,细胞转染sh-ROCK2后再用H_(2)O_(2)处理,细胞增殖活性显著提高,自噬体减少,自噬溶酶体和自噬体水平受到抑制,Beclin-1蛋白相对表达量显著降低,LC3-II/LC3-Ⅰ比值显著下调(均P<0.05),同时,细胞内ROS水平显著下降,SOD和GSH-Px的活性均显著升高,MDA含量显著降低(均P<0.05)。结论ROCK2在ARC晶状体前囊膜内高表达,下调其表达能够抑制H_(2)O_(2)诱导的人晶状体上皮细胞过度自噬,减少氧化损伤。

尿钙对含钙肾结石患者尿液MCP-1、TFF1及HMGB1生成的影响

目的观察尿钙水平对含钙肾结石患者尿液炎症细胞因子生成的影响,探讨尿钙和炎症细胞因子在结石形成过程中的作用。方法选取含钙肾结石患者81例,分为两组:24 h尿钙≥4 mg/(kg·d)纳入高钙尿结石组(H组,32例),24 h尿钙<4 mg/(kg·d)纳入低钙尿结石组(L组,49例),随机选取30例无泌尿系结石的健康者作为对照组(C组)。检测3组晨尿中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、三叶因子1(TFF1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)的水平,比较尿钙水平与各细胞因子之间以及各细胞因子之间的相关性。结果 MCP-1在H组、L组、C组分别为196.2(35.22,502.89)、217.60(66.62,766.87)和72.45(18.87,196.79)pg/mg;组间比较,H组和L组均高于C组(P<0.05),但H组与L组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TFF1在H组、L组、C组分别为15.24(9.68,29.88),30.04(12.12,43.39)和22.45(15.31,42.09)ng/mg;与其他两组对比,H组TFF1生成减少(P<0.05);TFF1在L组和C组间差异无统计学意义(P>0.05)。HMGB1在H组、L组、C组分别为(单位pg/mg):2 896.24(1 592.80,7 057.64),3 052.76(1 194.95,6 838.55)和1 717.32(733.69,2854.56);组间比较,H组和L组HMGB1均高于C组(P<0.05),但H组与L组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析:H组尿钙水平与尿液TFF1呈负相关(r=-0.384,P<0.05);与MCP-1水平呈正相关(r=0.353,P<0.05)。在总体111个样本中,尿液MCP-1与尿液TFF1呈负相关(r=-0.21,P<0.05)。结论含钙肾结石患者尿液MCP-1、HMGB1水平有明显升高。高钙尿可以促使含钙肾结石患者尿液TFF1下降,但尿钙水平对MCP-1、HMGB1无明显影响,结石患者尿液MCP-1和HMGB1升高可能是多种损伤因素共同作用的结果。炎症细胞因子之间存在相关关系。

谷胱甘肽过氧化物酶在肿瘤中作用的研究进展

谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)是生物体内重要的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)自由基清除剂。维持ROS在体内的动态平衡是机体维持正常生理功能的关键。GPX可通过调节ROS水平发挥重要的生物学作用。大量研究表明,ROS与肿瘤的发生和发展密切相关。近年来,随着对GPX研究的不断深入,发现GPX家族成员与多种肿瘤的发生和发展相关。本文着重阐述了谷胱甘肽过氧化物酶类在肿瘤中的作用及其可能的作用机制。

体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化

目的：观察在体外培养条件下,使用成骨诱导培养液或不同浓度钙离子诱导人肾间质成纤维细胞发生成骨分化的效果,初步探讨肾脏Randall斑形成可能的细胞机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞,实验分为5组：成骨诱导组（加成骨诱导液）、CaⅠ组（加0.5 mmol/L Ca2＋液）、CaⅡ组（加1.5 mmol/L Ca2＋液）、CaⅢ组（加2.5 mmol/L Ca2＋液）和对照组（加PBS）。各组细胞分别培养至第1、3、6、9天时,采用MTT法检测细胞活力;诱导至第9天时,用细胞钙茜素红染色液和钙钴法磷酸酶染色液对各组细胞进行染色,观察钙结节形成和碱性磷酸酶的表达情况。另外,分别采用real-time PCR和Western blot检测各组细胞不同时间点Runt相关转录因子2（Runx2）的mRNA和蛋白表达水平。结果：在1.5 mmol/L和2.5 mmol/L Ca2＋浓度条件下细胞的活力明显受抑制。细胞染色结果证实成骨诱导液组和钙离子组均可以见到典型的红色钙结节和黑色块状的硫化钴沉淀物。成骨诱导组细胞Runx2的mRNA和蛋白相对表达量（0~9 d）逐渐升高（P〈0.05）;诱导至第9天时,3个钙离子组细胞Runx2的mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性升高（P〈0.05）。结论：在体外培养环境下,人肾成纤维细胞可以在成骨诱导培养液的刺激作用下发生成骨分化;另外,在高钙离子环境,人肾成纤维细胞也发生了类似的成骨分化。肾乳头组织中的成纤维细胞在高钙离子等因素的作用下发生成骨分化,这可能是肾脏Randall斑形成的细胞学基础。

^(125)I粒子植入的靶区勾画对一线治疗后局部进展的非小细胞肺癌治疗效果影响

目的:探讨一线放化疗后局部进展非小细胞肺癌(NSCLC)^(125)I粒子植入术中靶区勾画方式对肿瘤治疗效果的影响。方法:选取2017年10月—2019年12月一线治疗后局部进展NSCLC患者70例,分为两组,每组35例,对照组沿胸部CT肺窗肿瘤边缘直接划定靶区,观察组以胸部CT肺窗肿瘤外边缘7 mm为靶区。比较两组植入前和植入后6个月的胸部CT表现,并在1年随访中比较两组术后不良反应发生率、客观缓解率、原位肿瘤复发率和无进展生存期。结果:两组患者均顺利完成植入,不良反应发生率比较差异无统计学意义(20.0%vs.17.1%,P=0.759),客观缓解率比较差异无统计学意义(91.43%vs.85.71%,P=0.710),观察组原位复发率低于对照组(5.71%vs.25.71%,P=0.022)。随访1年,中位无进展生存期高于对照组(12.58个月vs.11.36个月,P=0.037)。结论:胸部CT肺窗肿瘤外缘7 mm勾画靶区,行^(125)I粒子植入可减少肿瘤原位复发,延长生存期。

肺癌合并肺纤维化患者在肺癌根治术中手术风险的评估

目的:分析肺癌合并肺纤维化患者肺癌根治术的预后,并探讨此类患者手术风险的评估。方法:回顾性分析373例肺癌患者行肺切除术的病理组织,以是否有肺纤维化分为两组(I组和Ⅱ组),对二者术后并发症、临床转归、生存率等相关指标进行比较,并按照不同手术切除方式进行亚组分析。结果:在所有373个标本中,有21例确诊为肺纤维化,两组在年龄[(65±12)岁vs(64±9)岁]、吸烟史(76%vs 63%)、1秒钟用力呼气容积[(2.41±1.25)L·min^(-1) vs(2.49±1.38)L·min^(-1)]、用力肺活量[(3.08±1.53)Lvs(3.44±1.42)L]没有显著差异,但肺纤维化患者男性更多(71%vs 51%,P<0.05)。肺纤维化患者的手术死亡率高于对照组(14%vs 4%,P<0.01),亚组分析显示肺纤维化患者全肺切除术(20%vs 9%,P<0.01)和肺叶切除术(13%vs 4%,P<0.01)死亡率较对照组高。肺纤维化患者术后肺损伤发生率较高(42%vs 5%,P<0.01),住院时间较长[(15.70±4.11)d vs(9.28±3.03)d,P<0.05]。在肺纤维化患者中,5例患者出现术后急性呼吸窘迫综合征,其中3例死亡。术后急性呼吸窘迫综合征的发生与术前低DLCO[(4.01±1.40)mmol·min^(-1)·k Pa^(-1)·L^(-1),(4.5±1.65)mmol·min^(-1)·k Pa^(-1)·L^(-1),P<0.05]和KCO[(0.92±0.33)mmol·min^(-1)·k Pa^(-1)·L^(-1),(1.01±0.46)mmol·min^(-1)·k Pa^(-1)·L^(-1),P<0.05]以及高术前CPI(45.68±7.41,32.22±17.21,P<0.01)有关。结论:肺纤维化患者行肺癌根治术术后发病率和死亡率增加,与术前低气体弥散指标和高CPI有关。术前仔细评估其肺功能受损程度以选择合适的病人,对其行肺癌切除术的生存获益是十分必要的。

单孔胸腔镜手术与传统胸腔镜手术治疗重症肌无力的临床对照分析

探讨单孔胸腔镜手术 (SPVATS) 与传统电视胸腔镜手术 (VATS) 治疗重症肌无力的疗效。 方法: 回顾分析 2012-2013 年有随访资料的 80 例采用胸腔镜手术治疗重症肌无力患者的临床资料。比较分析 SPVATS 组(n=38)与 VATS 组(n=42)的手 术时间、手术出血量、术后胸引量、拔管时间、呼吸机辅助时间、术后平均住院时间、术后疼痛、术后并发症等临床指标。 结果:VATS 组手术时间(107.30±13.26)min 显著短于 SPVATS 组(120.00±12.35)min(P<0.01) 。SPVATS 组手术出血量 (70.90±13.70)ml 显著少于 VATS 组(87.10±14.40)ml(P<0.01) ,术后疼痛程度也显著轻于 VATS 组(P<0.01) 。两组的 术后胸引量、引流时间、呼吸机辅助时间、术后平均住院时间、术后肺感染及肌无力发生率、术后缓解率等指标比较差异无 统计学意义(P>0.05) 。结论:SPVATS 治疗重症肌无力与 VATS 手术相比同样安全有效,且更能有效减少手术创伤、减轻疼痛, 近期疗效满意,远期疗效有待进一步随访观察。

上尿路结石二次经皮肾镜取石术操作的原因探讨

目的:总结上尿路结石行二次(或二次以上)经皮肾镜取石术(PCNL)操作的原因,提高PCNL技能。方法:回顾性分析我院行PCNL治疗的1 041例上尿路结石患者的资料,对其中进行二次(或二次以上)PCNL操作的病例,根据其行二次PCNL操作的原因进行总结和分析。结果:1 041例上尿路结石患者(共1 203侧上尿路)中进行二次(或二次以上)PCNL操作的病例共252侧(20.9%),行二次PCNL操作的理由包括:结石负荷大、分布广182侧(72.2%);通道或肾集合系统黏膜出血29侧(11.5%);脓肾(感染)22侧(8.7%);孤立肾或肾功能不全7例(2.8%);集合系统穿孔3侧(1.2%);未发现或未能进入残留结石所在肾盏的盏颈口4侧(1.6%);通道建立失败以及不合理3侧(1.2%);麻醉意外等2例(0.79%)。二次PCNL操作时行局部麻醉204侧(81.0%),全麻48侧(19.0%);俯卧位221侧(87.7%),侧卧位31侧(12.3%)。1 203侧上尿路行一次PCNL操作的清石率为74.1%;行二次PCNL操作后的清石率为91.0%;252侧行二次PCNL操作的患者清石率为80.9%。1 203侧上尿路仅行一次PCNL操作的951侧上尿路患者的平均住院时间是10.8d,行二次PCNL操作的252侧上尿路患者的平均住院时间是13.4d。结论:结石负荷大、分布广,脓肾(感染)以及出血是上尿路结石行二次PCNL操作的主要原因。二次PCNL操作对于减轻第一次PCNL出血和感染的风险,提高清石率有很好的作用。但其增加患者的痛苦和住院时间。

125 I粒子植入联合盐酸安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效观察

目的探讨125 I粒子植入联合盐酸安罗替尼在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的临床疗效。方法纳入61例NSCLC患者,其中30例(观察组)接受125 I粒子植入联合安罗替尼治疗,31例(对照组)只接受125 I粒子植入治疗。评价所有患者的疗效和不良反应,同时测定两组患者治疗前及治疗第1、3月后,外周血中癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋19片段(CYFRA21-1)、神经内分泌烯醇酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC)以及疗效情况。结果观察组治疗后1月和3月的有效率分别为90.00%、93.33%;对照组治疗后1月和3月的有效率分别为67.74%、74.19%,两组间的差异有统计学意义(χ^(2)=4.504,P=0.034;χ^(2)=4.075,P=0.044)。治疗后两组患者的不良反应发生率差异无统计学意义(P=0.785)。治疗后1月和3月,两组患者外周血中CEA、CYFRA21-1、NSE和SCC水平均低于治疗前(均P<0.05)。结论125 I粒子植入联合盐酸安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌是安全的,具有推广价值。