生物素标记庆大霉素耐药基因探针

采用低熔点琼脂糖挖块法回收源自澳大利亚的pDG0103的2.0kb的BamHI-HindⅢ片段(携带2″-0-腺苷转移酶[ANT(2″)]基因)和自建的pBY102的4.9kb的PstI-EcoRI片段。以缺口平移法,用生物素-7-dATP进行标记,制备成探针。通过Southern印迹杂交和菌落原位杂交,证明澳源的Gm-DNA探针与美国的探针同源,而与作者构建的Gm-DNA探针不同源。再以菌落原位杂交法,用生物素标记的上述两种探针分别检测106株庆大霉素(Gm)耐药的细菌,结果表明这些菌株携带的Gm钝化酶基因的类型不止一种。

庆大霉素耐药基因的分子克隆

利用基因工程技术,从一株流行的致病性大肠杆菌的65Md的可传递的多重耐药质粒pEFM2出发,克隆获得一重组质粒pBY101,它仅表达庆大霉素和四环素抗性,其庆大霉素耐药基因在8.9kb的Pst Ⅰ片段上。再由EcoRⅠ酶解pBY101,亚克隆获得一重组质粒pBY 102,其庆大霉素耐药基因在4.9kb的Pst Ⅰ-EcoRⅠ片段上。经氨基糖苷类抗生素底物谱分析和用生物素标记的2″-O-腺苷转移酶[ANT(2″)]基因探针,以Southern印迹杂交法检测,证明庆大霉素耐药基因不是编码ANT(2″)的。

628株大肠杆菌R质粒的检测

本文检测来源于新生儿及健康猪的628株大肠杆菌的耐药谱及R质粒。这些菌株对四环素的耐药率最高,人源菌株对氨(?)青霉素和庆大霉素的耐药率高达67.82％和51.49％。R质粒的检出率在60％以上。多重耐药菌株中R质粒检出率特别高。三耐以上菌株的耐药谱型多以四环素、磺胺抗性为基础,对比过去的资料;耐药类型由四耐已发展到以五耐以上居优势;应引起医务界及社会上的重视。

庆大霉素耐药基因蔓延规律的研究进展

近年来庆大霉素耐药率日益增长,已引起临床医师和有关研究工作者的重视。本文就耐药的遗传学机制、生物化学机制和耐药基因的检测方法研究进展作一简要综述。

庆大霉素耐药基因探针的构建

本文从致痛性大肠杆菌的pEFM2质粒出发,克隆获得重组质粒pBY101,绘制了pBY101的PstⅠ、EcoRⅠ及PvuⅡ的限制性酶切物理图谱,确定Gm耐药基因在8.9kb的pstⅠ—1片段上。用EcoRⅠ酶解pBY101,再连接,次级克隆获得重组质粒pBY102。确证pBY102的4.9kb PstⅠ—EcoRⅠ片段含有编码Gm耐药基因。采用低熔点琉脂糖挖块法回收4.9kb片段,以生物素-7-dAT标记之,并作为探针,以菌落原位杂交珐检测106株Gm耐药性细菌,而且证明本研究构建的Gm—DNA探针与国外引进的ANT(2″)基因探针不同源。