一种定量评价离体海马脑片缺糖/缺氧损伤的新方法

目的 :建立一种定量评价离体脑片缺糖 /缺氧损伤的简便、快速、灵敏的方法。方法 :离体海马脑片缺糖 /缺氧不同时间后以 2 % 2 ,3,5 -三苯基氯化四氮唑 (TTC)染色 ,用乙醇∶二甲亚砜 (5 0∶ 5 0 )抽提 TTC红色结晶产物 ,分光光度法测定 OD490 值 ,并与 LDH释放率进行比较。结果 :随着缺糖 /缺氧时间的延长 ,TTC染色 (OD490 值 )逐渐下降 ,而 LDH释放率逐渐上升 ,两结果呈负相关 (r=- 0 .933,P<0 .0 1) ,提示脑片缺血性损伤。尼莫地平、地塞米松和氯胺酮可减轻脑片缺血性损伤 ,但 ONO- 10 78无效。结论 :TTC染色法简单易行 ,且客观灵敏 ,可用于离体脑片损伤的评价及药物初筛。

人细胞色素P4502A6cDNA克隆及其在哺乳类细胞中的表达

应用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术和DNA重组技术从人肝组织中克隆细胞色素 P4502 A6( CYP2 A6) c DNA片段至克隆载体 p Blue-script SK( M1 3- )中 ,经限制性酶切图谱分析确证克隆的片段为 CYP2 A6c DNA,然后将该片段亚克隆入真核细胞表达载体 p REP9,用改良磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠肺 CHL细胞系 ,建立 CHL- 2 A6转基因细胞系 ,并对 CYP 2 A6特征表达酶香豆素 - 7-羟化酶 ( COH)活性进行了测定 ,结果显示 CHL-2 A6S9组分的 COH比活性是 ( 2 .58± 0 .68) nmol· min-1· g-1蛋白 ,而对照细胞 CHL测不到 COH活性 ,表明所转 CYP2 A6c DNA表达的蛋白质具有功能 .CHL - 2 A6的建立为药物代谢研究和毒理学研究提供了强有力的工具 .

氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元缺糖/缺氧和N-甲基-D-天冬氨酸损伤的保护作用

目的 观察氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片和原代神经元的缺糖 缺氧 (OGD)和N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)损伤的潜在保护作用及其机制。方法 海马脑片OGD以无葡萄糖的人工脑脊液中通 95 %N2 +5 %CO2 诱导。通过测定TTC染色后形成的红色产物来分析脑片活性。结果 氟哌啶醇 (1和 10 μmol·L- 1 )抑制OGD损伤 ,抑制率分别为 17 7%和 2 5 %,而D2 多巴胺受体拮抗剂多潘立酮无此作用。NMDA也能显著降低海马脑片及原代神经元的活性 ,而氟哌啶醇可抑制这一损伤作用。结论 氟哌啶醇对大鼠离体海马脑片OGD和原代神经元NMDA损伤有保护作用。

氟哌啶醇对N-甲基-D-门冬氨酸诱导的大鼠海马神经细胞损伤的保护作用

用原代培养大鼠海马神经细胞的方法 ,观察氟哌啶醇对 N-甲基 - D-门冬氨酸 (NMDA)诱导的大鼠海马神经细胞损伤的保护作用 .结果表明 ,氟哌啶醇能剂量依赖地抑制 NMDA诱导的大鼠海马神经细胞内乳酸脱氢酶 (L DH)的释放 ,并改善受损细胞形态 ,四唑盐比色法 (MTT)显示存活率增高 .提示氟哌啶醇对