烟草及烟草制品总氮测定消化工艺参数研究

研究适用于烟草及烟草制品总氮测定的消化工艺参数,寻找最佳催化剂配方和最佳消化温度、时间。采用正交实验进行了催化剂配方优选,文献法进行了消化温度、时间的初筛,分析总结进行了复筛,研究了总氮消化工艺参数,并选取典型烟草及烟草制品进行验证。结果表明:催化剂对消化结果的影响为:硫酸钾>硫酸>硫酸铜。其中,硫酸钾与硫酸和硫酸铜的比例用量上应达到平衡,硫酸钾用量不宜超过3 g。以样品量0.1 g、硫酸钾2 g、硫酸铜0.2 g、硫酸5 mL的催化剂配方在200℃(30 min)+420℃(130 min)的消化温度、时间条件下样品总氮含量达到真实值,较常规消化工艺参数时间缩短约2.33 h,检测效率提升87.5%。研究得到的消化工艺参数,操作安全,绿色高效,适用于各种来源及生产工艺的烟草及烟草制品。

电感耦合等离子体质谱法分析海蟹中的砷元素分布特征

分别采用电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)法和高效液相色谱-ICP-MS测定4 种海蟹(青蟹、三疣梭子蟹、日本鲟和细点圆趾蟹)及其不同部位(胸肌肉、钳肉、肝胰腺、性腺(雌)和鳃)中总砷及砷形态分布特征。样品加酸、微波消解后采用ICP-MS法测定总砷;样品经稀硝酸溶液提取、正已烷脱脂净化后,采用Dionex IonPac AS19保护柱(50 mm×4 mm)及AS19阴离子交换柱(250 mm×4 mm,10 μm)作为分析柱、pH 9.5的50 mmol/L碳酸铵溶液作为流动相等度洗脱的液相分离条件和优化后的ICP-MS条件,测定砷甜菜碱(arsenobetaine,AsB)、一甲基砷、二甲基砷、三价砷(As(Ⅲ))、五价砷(As(Ⅴ))5 种砷形态含量。经方法优化后,5 种砷化合物的标准溶液在0~300 μg/L质量浓度范围内,呈现良好的线性关系(r^2>0.998),检出限为0.008~0.014 mg/kg,定量限为0.025~0.055 mg/kg;在样品中添加0.4、1.0 mg/kg和2.0 mg/kg的水平下,加标回收率为70.0%~105.0%,相对标准偏差低于5%;158 个海蟹类样品中总砷含量范围为0.37~35.81 mg/kg,整蟹及分部位的砷形态物测定数据表明海蟹体内均以毒性较低的AsB为主,AsB占其总砷含量的60.9%~99.4%,无机砷含量均值在0~0.12 mg/kg之间,无机砷含量均未超过国家标准限量值;总砷和AsB的含量基本都呈现出细点圆趾蟹<青蟹<三疣梭子蟹<日本鲟、同一品种下性腺(雌)>肝胰腺>蟹胸肌肉>蟹钳肉>蟹鳃的变化趋势,说明海蟹富集砷能力较强,性腺和肝胰腺是其砷富集的主要器官。

浙江沿海海产品无机砷污染调查及食用风险分析

采用电感耦合等离子体质谱技术对浙江沿海地区采集的38个品种共679个海产品样本中的总砷及砷形态污染情况进行了检测。在掌握浙江省主要海产品砷污染状况的基础上,结合居民水产品消费数据对因海产品或总膳食消费带来的无机砷摄入风险进行分析。结果表明:各类海产品中总砷平均含量为0.36~35.91 mg/kg,但主要以低毒或无毒的砷甜菜碱或砷糖等有机砷形态存在,有机砷占总砷含量的90%以上;66.4%的样品有无机砷检出,检出值范围为0.012~0.380 mg/kg,中位值为0.024 mg/kg,第95百分位数值为0.14 mg/kg,均低于GB 2762-2017中对水产品的无机砷限量值要求;风险分析结果显示浙江沿海居民食用一般海产品引起的无机砷安全风险较低,每周因水产品或总膳食消费引起的无机砷摄入值均低于JECFA推荐的人体无机砷每周可摄入值,但长期过多食用无机砷相对含量较高的海产品(如海藻、贝类)时,存在一定的健康风险。

绵羊DRA基因外显子2酵母表面展示库的构建及鉴定

根据绵羊DRA基因序列和酿酒酵母表面展示载体pYD1上的多克隆位点设计特异性引物,从绵羊组织中提取总RNA并逆转录,利用PCR技术扩增得到DRA基因,克隆获得762bp目的片段,并提交GenBank,登录号:KR422362。将该基因通过双酶切连接到表面展示载体pYD1上,成功构建了酿酒酵母表面展示重组质粒pYD1-DRA。将DRA基因外显子2两端进行基因点突变,形成新的酶切位点,继而对外显子2设计特异性引物,对绵羊大样本进行DNA池化,并将外显子2扩增产物测序,分析其多态性获得多态位点。重组质粒双酶切得到246bp具有多态性的外显子2,将其连接到经同样酶双酶切的表面展示重组突变载体pYD1-DRA-TB上,成功构建了酿酒酵母表面展示库。将其转化用于表面展示的酿酒酵母EBY100感受态细胞中,得到酵母转化子,挑取酵母菌的单克隆通过PCR扩增及序列测定证实了DRA基因库已成功整合到酿酒酵母基因组中。经半乳糖诱导后,通过免疫荧光法在荧光显微镜下检测得到DRA基因库已成功展示在酵母细胞表面。

两种布鲁氏菌弱毒株侵染小鼠巨噬细胞过程的荧光表征及分析

通过对绿色荧光蛋白(GFP)布鲁氏菌弱菌株M5(GFP-M5)和S19(GFP-S19)侵染小鼠巨噬细胞(RAW264.7)及对其与胞内溶酶体、内质网、高尔基体初次结合所用时间进行测定,探讨分析两种布鲁氏菌弱毒株侵染小鼠巨噬细胞过程的荧光表征。将GFP-M5和GFP-S19分不同时间段分别侵染RAW264.7,利用激光共聚焦和流式细胞仪观察和检测。结果显示,GFP-M5和GFP-S19均构建成功。布鲁氏菌M5和S19及GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.7后胞内生存能力无明显差异。GFP-M5和GFP-S19侵染30min后均已进入小鼠巨噬细胞,2h分别到达溶酶体、内质网和高尔基体。而两种弱毒株在1、2、3、4h与各细胞器结合率相近。流式细胞仪检测结果显示,GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.7的GFP+细胞含量无显著差异(P>0.05)。结果提示,两种弱毒株在侵染进入宿主细胞的初期及侵袭能力并没有明显差异。

口虾蛄金属硫蛋白提取工艺的优化

为高效利用口虾蛄制备金属硫蛋白(metallothionein,MT),以口虾蛄MT提取量为指标,考察提取时间、提取温度、液浓度、液料比、提取液浓度和pH值5个因素对MT提取效果的影响,并用响应面法研究口虾蛄中MT的最佳提取工艺条件。结果表明,口虾蛄MT最佳提取工艺为:提取时间1h、提取温度51℃、液料比4∶1、提取液浓度0.02mol/L、提取液pH7.8;在此条件下MT的提取量为0.232mg/g,该结果与理论预测值基本相符。响应面法建立的优化模型能较好地预测口虾蛄MT的提取量,这为后续对口虾蛄MT进行分离、纯化研究提供基础,为海洋生物资源的开发和利用提供新的思路。

人乳铁蛋白的沙漠小球藻表达系统的构建与鉴定

为获得人乳铁蛋白的沙漠小球藻(Chlorella sp.GTD8A1)的表达系统和稳定的小球藻GTD8A1-h LF工程藻种,将人乳铁蛋白基因导入小球藻细胞中进行表达鉴定。以人血c DNA为模板,RT-PCR扩增得到人乳铁蛋白基因(Gen Bank登录号NM-002343.4),经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后,连接到植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS中,获得重组质粒载体p CAMBIA2300-35S-h LF-OCS,将重组质粒电击转入GTD8A1中,通过菌落PCR鉴定后扩大培养,在DNA和RNA水平分析人乳铁蛋白基因的整合和转录,SDS-PAGE和Western Blot分析获得70 ku的目的蛋白;将转基因藻种(GTD8A1-h LF)在BBM培养基中进行培养周期优化。结果表明,重组人乳铁蛋白在沙漠小球藻细胞中表达成功;通过Elisa测其人乳铁蛋白表达量在20 d时达到最大,浓度为13.28 mg/L。

PEG6000对沙漠小球藻生长及油脂积累的影响

采用一次性培养的方式研究不同添加量PEG6000对小球藻(Chlorella sp.TLD6B)吸光度(OD680)、生物量、生长速率、可溶性蛋白含量、脂肪酶活性和总脂含量的影响。结果表明:不同添加量PEG6000对小球藻吸光度(OD680)、生物量、生长速率和可溶性蛋白含量的影响总体表现为抑制;随着培养时间的延长,同一PEG6000添加量下脂肪酶活性大体呈上升、下降再上升趋势,而对照组则呈先下降后上升趋势;对照组及5%、10%、20%、30%添加量的PEG6000胁迫下最终小球藻脂肪酶活性分别为300.87、320.67、342.43、360.21、287.76 U/g,总脂含量分别为29.64%、31.28%、33.45%、35.11%、25.26%。结果显示,不同添加量的PEG6000均抑制了小球藻的生长和可溶性蛋白合成;但适宜添加量的PEG6000提高了小球藻的脂肪酶活性及总脂含量。

NO/ADMA在布鲁菌侵染小鼠机体过程中的响应特征

本试验旨在研究布鲁菌侵染小鼠过程中一氧化氮(NO)的作用,以及NO和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)在此过程的相互作用关系。以布鲁菌标准疫苗株M5侵染小鼠,首先用小鼠的血清进行虎红平板凝集(RBPT)和试管凝集试验(SAT),再用Griess试剂法和ELISA法测定对照组和侵染组不同组织和血清中的NO和ADMA含量,对小鼠肝脏和脾脏的各个侵染时间段进行CFU计数观察。结果显示,用布鲁菌M5侵染小鼠后,RBPT和SAT在14d时检测到有阳性反应。侵染组和空白对照组NO总含量上变化不大,但侵染组血清中的NO含量随时间出现下降,而肝脾中NO含量随时间出现上升,其他各组织NO含量波动不明显。而ADMA的总趋势与NO相反。CFU计数结果显示,小鼠肝脾内布鲁菌的数量在14d时一直处于增长状态,28d时布鲁菌的数量下降,表明布鲁菌的分裂繁殖和机体NO的含量存在一定的关系。

沙漠小球藻的蛋白双向电泳分析

为建立适用于小球藻（Chlorellasp.TLD6B）蛋白质组分析的双向电泳体系,该研究比较了TCA/丙酮沉淀法和Trisol提取法对小球藻蛋白的提取效果,不同pH梯度IPG胶条（pH3~10和pH4~7）、不同蛋白质上样量、不同聚焦程序对小球藻蛋白的分离效果。结果表明：（1）采用Trisol提取法可获得较高纯度蛋白,当选择24cm pH 3~10的线性IPG胶条时,上样量为500μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达726个;当选择24cm pH 4~7的线性IPG胶条时,上样量为1 000μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达1 230个。（2）该实验随机挑选了10个胶内蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定分析表明,其中8个蛋白点鉴定成功,进一步说明Trisol提取法可适用于小球藻双向电泳分析。

绵羊MHC-DQB2 exon3单倍型的构建及其与布鲁氏菌病易感性相关性

为探究绵羊MHC-DQB2基因exon3单核苷酸多态性及其单倍型与布鲁氏菌病易感性的相关性,对145只哈萨克绵羊进行了布鲁氏菌虎红平板检测(RBPT),并通过PCR-SSCP试验选取不同基因型个体进行扩增测序,对测序结果进行统计分析。结果发现,在exon3 282 bp内共有22个单核苷酸多态性位点,其中140A/C/T/G位点、155T/C位点在病例和正常组间存在显著差异(P<0.05);在22个单核苷酸多态位点中,有18个符合Hardy-Weinberg平衡定律,最终构建得到21个单倍型,其中有2个单倍型(Hap6、Hap9)在病例和正常组间存在显著差异(P<0.05),一个单倍型(Hap4)存在极显著差异(P<0.01)。由此表明,绵羊MHC-DQB2 exon3单核苷酸多态性与布鲁氏菌病存在显著相关性。

新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量及影响因素分析

目的:探究新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量的影响因素。方法:本研究优化了新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量测定的前处理方法和色谱条件,样品经匀浆、87%乙醇混匀、超声提取、离心、氮吹结合水浴浓缩,过0.45μm滤膜后,在220 nm波长下,采用C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)、以乙腈-0.05%磷酸水溶液(3∶97,V/V)为流动相进行等度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),柱温25℃,通过高效液相色谱法(HPLC)对遵义市汇川区采集的不同等级大小、不同产地以及不同栽培方式的72份新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量进行分析测定。结果:方法学验证结果表明,在3个加标浓度下,天麻素、对羟基苯甲醇2种成分在相应范围内线性关系良好,R^(2)>0.9999,回收率在81.20%~107.30%之间,RSD<5%,得到所测72份样品中天麻素与对羟基苯甲醇总含量范围为0.262%~1.150%。本研究使用的鲜天麻前处理制样方法简便、快速且提取效果良好,分析检测方法具有良好的精密度、重现性和分离效果,适用于新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量的研究分析。通过进一步分析不同等级大小、不同产地以及不同栽培方式对新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量影响,结果表明鲜天麻的质量等级越大,天麻素与对羟基苯甲醇总含量越高;由于各天麻种植基地所在的海拔高低、环境植被种类、地理位置、光照等存在差异,且每个种植基地林下种植天麻的发展时间有所不同,因此,不同产地的鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量也存在显著差异;而对不同栽培方式的鲜天麻进行比较分析,发现有性繁殖优于无性繁殖。结论:汇川区不同产地、不同栽培方式及不同等级大小的新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量的影响具有一定的差异性。

水产品中有机锡化合物分析方法的研究进展

有机锡为含金属化合物,其形态种类较多,理化和毒理性质多样,是人体摄入重金属锡元素的主要来源。水生物易富集各类环境中的有机锡污染物,大量摄入含锡的水产品将对人体健康造成危害。因此,选择合适的前处理及检测分析技术对准确识别并科学研究水产品中有机锡分布特征和监管水产品质量安全具有重要意义。本文概述近年来国内外有关水产品中有机锡化合物分析方法的研究现状,包括样品前处理技术和仪器测定方法,旨在为水产品中有机锡污染水平的监测提供技术参考。

大麦根磷脂酶的提取及性质研究

大麦根中含有较高活力的磷脂酶 提取磷脂酶的条件是:10倍大麦根重量的水浸提20h、浸提温度为20℃、pH6.5.Ca^(2+)对磷脂酶有激活作用,当Ca^(2+)浓度为0.005mol/L,反应温度为40℃时,酶活力达最大值,当反应温度达65℃以上时。

沙漠小球藻转人乳铁蛋白的电转优化

对沙漠小球藻建立高效的遗传转化方法,对电击转化的条件和相关参数进行优化。作者以人乳铁蛋白基因作为电转条件优化的参考基因,采用单因素实验确定转染效率的电转化条件,然后进行电转化正交实验,得到最优的电转化组合。结果表明:最优的电转化组合是电压1 400 V、培养周期8 d、渗透剂浓度0.2 mol/L、渗透时间为0 h、质粒质量浓度为6 ug/mL、电击缓冲液浓度为0.4 mol/L,其细胞致死率为51.30%、荧光百分率为52.54%、PCR阳性平均百分率为42.30%。

酸枣仁绿豆汤可镇静安神

高考即将来临，推荐一个缓解考试紧张的方子：酸枣仁、绿豆各50克，煮成粥1次吃完，1日2次。在考试前2天开始服，至考试结束，有镇静安神之效。

哈萨克羊DRB1基因外显子3多态性及生物信息学分析

试验旨在研究白细胞表面抗原DRB1基因外显子3多态性与哈萨克羊布鲁氏菌病易感性的相关性。运用混合DNA池结合PCR产物直接测序方法,对哈萨克羊DRB1基因外显子3进行多态性分析,经卡方检验分析每个SNP位点的等位基因频率、基因型频率及其多态性与布鲁氏菌病易感性的相关性,利用生物信息学分析软件对PCR扩增所获序列进行RNA二级结构及蛋白质的二级结构和抗原表位分析。结果表明,在282bp的外显子3序列中共检测到7个SNPs,分别为:T10C、C119T(Trp→Arg)、G215C(Gln→Glu)、A238G、T245G(Ser→Ala)、G256A、C259T,这些位点在病例组和对照组之间的等位基因频率及各基因型间不存在显著性差异(P>0.05);进一步分析发现,各突变位点均引起RNA二级结构和最小自由能的改变,各错义突变位点均未引起蛋白质二级结构和抗原表位的改变。由此得出,DRB1基因外显子3的7个SNPs位点(T10C、C119T、G215C、A238G、T245G、G256A和C259T)与哈萨克羊布鲁氏菌病易感性无相关性。

哈萨克羊DQB2基因外显子2多态性及遗传变异分析

试验旨在研究DQB2基因外显子2多态性与哈萨克羊布鲁氏菌病易感性的相关性。通过PCR-SSCP技术对146只布鲁氏菌阴性哈萨克羊血液样本和28只布鲁氏菌阳性哈萨克羊血液样本中的白细胞表面抗原DQB2基因外显子2的多态性进行研究,挑取不同的等位基因进行克隆测序,经卡方检验分析每个SNP位点的基因频率、基因型频率及其多态性与布鲁氏菌病易感性的相关性,应用生物信息学软件分析与哈萨克羊布鲁氏菌病易感性相关的不同等位基因的mRNA二级结构及蛋白质的二级结构、三级结构和抗原表位。结果发现,在270bp的外显子2序列中共检测到33个SNPs,其中C9G、A180G位点的基因频率在病例组和对照组中的分布具有极显著性差异(P<0.01),其基因型频率在病例组和对照组中存在显著差异(P<0.05);A13T、C133G位点的基因频率在病例组和对照组中存在显著差异(P<0.05);进一步分析发现,A180G突变位点的最小自由能最低,其mRNA二级结构最稳定;A13T和C133G2个突变位点均引起mRNA二级结构及蛋白质二级结构、三级结构和抗原表位的改变。本试验结果表明DQB2基因外显子2多态性与哈萨克羊布鲁氏菌病易感性呈显著相关。

国产水果为何难卖好价

果农种水果,盼的就是能卖个好价钱。可如今市场上的国产水果与国外的洋水果相比,虽然品质不相上下,可却难卖一个好价钱。广东省是我国水果进出口的主要口岸。据有关资料显示,1998年经过广东口岸进口的水果为17.3万吨,价值5196万美元,比1996年上升了60%;

供水系统在线浊度仪异常数据分析

总结了供水系统中在线浊度仪的异常数据波动,并逐一进行了分析。对浊度异常情况提出了处置建议,从而降低供水系统水质波动带来的风险,以便在浊度变化初始尽快采取应对措施。