贵阳市2016-2018年学校及托幼机构流感聚集性疫情流行病学特征性研究

目的了解贵阳市学校及托幼机构流感集中性暴发的主要特点,从而为更好地进行针对性防控提供相关的有效依据。方法采用描述流行病学方法分析贵阳市2016-2018年学校和托幼机构流感聚集性疫情。结果学校及托幼机构流感聚集性疫情累计38起,中小学疫情累计35起(92.10%);大学1起(2.63%),托幼机构2起(5.26%)集中在秋、冬两季(占76.32%),流感聚集性疫情病例累计530例,疫情波及人数45329人,罹患率分别是1.55%、1.05%、5.50%,2018年(5.50%)最高。三年均无危重病例、死亡病例。各年度间流感聚集性疫情病例罹患率差异有统计学意义(χ2=32.156,P<0.05)。结论学校及托幼机构是流感聚集性疫情高发场所,应加强校园日常管理。流感聚集性疫情要做到早发现、早报告、早处理,并通过宣传教育培养良好卫生习惯,接种流感疫苗来提升人群免疫水平。

不明原因肺炎病例中多种病原体混合感染情况分析

目的分析贵阳市不明原因肺炎多种病原体混合感染情况,为完善不明原因肺炎预防控制及临床诊疗提供依据。方法通过实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence PCR)对2020—2022年不明原因肺炎病例的咽拭子和痰液标本进行检测,在常规监测的人感染高致病性禽流感病毒和SARS冠状病毒的基础上,同时加入非常规监测的易引起肺炎症状的多种呼吸道病毒和细菌进行检测。结果457份标本中,病毒与细菌混合感染66份,感染率为14.4%;病毒与病毒混合感染9份,感染率为2.0%;细菌与细菌混合感染27份,感染率为5.9%。不同病原体混合感染的检出率差异有统计学意义(χ^(2)=53.955,P<0.001)。3种病原体混合感染标本14份,占3.1%,呼吸道合胞病毒和流感嗜血杆菌混合感染最多,共40份,占8.8%,流感嗜血杆菌和肺炎链球菌混合感染24份,占5.3%。结论贵阳市不明原因肺炎病例中存在多种病原体混合感染情况,以病毒与细菌混合感染为主。

氟化钠对人成骨细胞CyclinD1基因启动子区甲基化及其转录表达的影响

目的构建人原代成骨细胞氟中毒模型,检测不同剂量氟化钠对人成骨细胞中CyclinD1基因启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响,从细胞周期调控基因的表观遗传学角度探索氟中毒发生机制。方法在知情同意原则下,收集贵州航空工业集团贵阳医院骨科外伤手术健康人(车祸)髂骨或股骨松质骨。采用酶消化法分离人原代成骨细胞,以碱性磷酸酶及钙化结节染色进行细胞鉴定;以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化钠处理细胞72 h。以硫化测序PCR法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测CyclinD1基因启动子区甲基化状态;以实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测CyclinD1基因转录mRNA相对表达量;以免疫印迹法(Western-blotting)检测CyclinD1蛋白表达。结果分别以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化钠处理细胞72 h后,CyclinD1基因启动子区未检测到甲基化;CyclinD1基因mRNA转录相对表达量在0、125、250、500及1 000μmol/L Na F剂量组分别为0.414±0.093、0.742±0.089、0.796±0.122、1.114±0.260、1.140±0.171,NaF剂量组均高于对照组(F=18.89,P<0.05)。CyclinD1蛋白相对表达量分别为0.304±0.014、0.395±0.020、0.511±0.042、0.565±0.028、0.719±0.047,NaF剂量组均高于对照组(F=71.80,P<0.05)。CyclinD1基因转录mRNA及其蛋白表达随氟化钠剂量的升高均相应上升(P<0.05)。结论氟化钠上调人成骨细胞中CyclinD1基因转录与表达,是氟致人成骨细胞增殖能力及细胞周期时相分布发生改变的重要分子机制之一,但未观察到CyclinD1基因启动子区甲基化参与其表达上调过程。

燃煤污染型氟中毒人群DNA甲基转移酶1mRNA转录及蛋白表达

[目的]了解燃煤污染型氟中毒人群外周血中DNA甲基化转移酶1(DNA methylation transferase 1,DNMT1)m RNA转录及蛋白表达情况,探讨其在氟中毒致病机制中的作用。[方法]在知情同意原则下,采集贵州省燃煤污染型氟中毒病区某县的调查对象尿液样本,采用氟离子电极法测定尿氟含量并依据尿氟含量将调查对象(380例)分为正常尿氟(尿氟<1.96 mg/g Cr)组(140例)、低氟(1.96 mg/g Cr≤尿氟<3.92 mg/g Cr)组(93例)、中氟(3.92 mg/g Cr≤尿氟<7.84 mg/g Cr)组(82例)、高氟(尿氟≥7.84 mg/g Cr组(65例);采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测外周血中DNMT1 m RNA转录;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血中DNMT1蛋白表达。[结果]调查对象外周血中DNMT1 m RNA转录,各组间差异具有统计学意义(F=3.125,P<0.05);进一步两两比较分析发现,低、中氟组DNMT1 m RNA转录高于正常尿氟组(P<0.05),且低氟组DNMT1 m RNA转录高于中、高氟组(P均<0.05)。调查对象外周血中DNMT1蛋白表达,各组间差异有统计学意义(F=3.113,P<0.05);进一步两两比较分析发现,低氟组DNMT1蛋白水平高于正常尿氟组(P<0.05),且低氟组DNMT1蛋白水平高于高氟组(P<0.05)。[结论]DNMT1参与氟中毒的发生发展过程,其转录及蛋白表达增强可能是氟骨症发生的早期分子事件。

2015—2018年贵阳市水产品中致泻性弧菌监测

目的分析2015-2018年贵州省贵阳市水产品中致泻性弧菌污染情况,为贵阳市制定针对性的公共卫生防控措施提供依据。方法随机采集贵阳市水产品市场和餐馆的水产品检测致泻性弧菌,分析致泻性弧菌在贵阳市的污染和流行状况。结果2015-2018年共采集960份样品,检出致泻性弧菌17株,各年检出率分别为2.50%,0.42%,2.92%和1.25%,差异无统计学意义(χ^2=5.450,P>0.05);不同种类水产品阳性检出率两两比较,甲鱼与贝类之间(χ^2=11.301)和甲鱼与鱼类之间(χ^2=6.490)阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05),其他几种水产品之间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论贵阳市水产品中存在致泻性弧菌污染,检出率低于其他地区;建议有关部门加强对水产品批发和销售市场环境的消毒及监测。

燃煤污染型氟中毒人群尿氟与骨代谢损伤指标相关关系及其基准剂量分析

目的将基准剂量法应用于燃煤氟暴露人群,探讨燃煤氟污染致暴露人群骨代谢损伤的生物暴露限值,为燃煤氟致骨损伤的防治提供参考依据。方法以贵州省燃煤污染型氟中毒病区295例氟暴露者为氟暴露组,非氟污染区85例居民为对照组。在知情同意原则下,采集调查对象尿液和血液样本,采用氟离子电极法测定尿氟含量,以酶联免疫吸附试验测定血清骨钙素含量,以微量酶标法检测碱性磷酸酶活力。分析尿氟与骨代谢损伤指标之间关系,并应用BMDS 2.6.0.1软件计算基准剂量(BMD)、95%的可信限下限值(BMDL)。结果按尿氟分组后,随着尿氟浓度的升高,血清骨钙素和碱性磷酸酶水平逐渐升高,存在剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05)。骨钙素与碱性磷酸酶的尿氟BMD与BMDL分别为0.581、0.412 mg/g Cr和2.374、1.362 mg/g Cr。结论建议燃煤氟暴露引起人群骨代谢损伤的尿氟生物暴露限值为0.412 mg/g Cr;骨钙素可作为氟暴露早期效应指标和氟接触高危人群的敏感筛选指标。

氟化钠对人成骨细胞细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4基因组蛋白乙酰化水平的影响

目的构建人原代成骨细胞体外氟中毒模型，观察不同剂量氟化钠（NaF）对人成骨细胞细胞周期蛋白D1（CyelinD1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）基因组蛋白乙酰化水平的影响，探讨氟骨症发生发展的分子机制。方法收集骨科外伤手术健康人（车祸）骨组织，通过酶消化法分离人原代成骨细胞，经鉴定后作为实验对象。以0、125、250、500及1000μmol／L NaF处理细胞72h。定量染色质免疫共沉淀技术检测CyelinD1、CD1（4基因转录调控区CHIP1区域及编码区CHIP2区域（对照区）组蛋白H3K9、H3K14、H4K12、H4K16乙酰化水平。结果①分别以0、125、250、500及1000μmol／L NaF处理细胞72h后，CyclinD1基因转录调控区CHIP1区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1．152±0．104、1．174±0．187、1．090±0．176、1．170±0．197、1．147±0．097，组间比较差异无统计学意义（F=0．524，P〉0．05）；H3K14乙酰化水平分别为1．495±0．117、1．4654-0．069、1．470±0．187、1．760±1．089、1．341±0．443，组间比较差异无统计学意义（F=0．841，P〉0．05）；H4K12乙酰化水平分别为1．239±0．286、0．702±0．063、0．765±0．370、1．011±0．321、1．319±0．026，组间比较差异无统计学意义（F=2．329，P〉0．05）：H4K16乙酰化水平分别为1．452±0．217、1．621±0．165、1．462±0．090、1．510±0．146、1．564±0．154，组间比较差异无统计学意义（F=0．123，P〉0．05）。②CDK4基因转录调控区CHIPl区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1．472±0．163、1．580±0．161、1．585±0．132、1．451±0．136、1．560±0．039，组间比较差异无统计学意义（F=0．461，P〉0．05）；H3K14乙酰化水平分别为0．919±0．149、0．900±0．059、0．911±0．162、0．663±0．049、0．841±0．122，组间比较差异无统计学意义（F=0．974，P〉0．05）；H4K12乙酰化水平分别为0．456±0．142、0．911±0．126、0．969±0．185，1．110±0．146、0．931±0，141，组间比较差异无统计学意义（F=5．459，P〉0．05）：H4K16乙酰化水平分别为1．315±0．083、1．374±0．153、1．423±0．055、1．300±0．132、1．385±0．696，组间比较差异无统计学意义（F=1．663，P〉0．05）。（3）CyclinD1、CDK4基因编码区CHIP2区域组蛋白H3K9、H3K14、H4K12、H4K16乙酰化水平，各NaF处理组间比较差异均无统计学意义（F=0．392、0．823、0．999、0．397，0．705、0．049、1．065、0．196，P均〉0．05）。结论在氟处理的人原代成骨细胞中，未观察到细胞周期调控基因CyelinD1、CDK4转录调控区组蛋白乙酰化参与其表达调控。

新复苏MDCK细胞培养甲型H3N2流感病毒方法的优化

目的优化甲型H3N2流感病毒在新复苏的犬肾细胞(MDCK)上的培养条件,提高该病毒在新复苏细胞上培养的分离效果。方法选取6例复核鉴定过的甲型H3N2病毒株,以吸附法分别接种于新复苏的MDCK细胞上培养,检测收获病毒液HA滴度,通过比较不同的细胞胞龄、细胞代次、病毒接种吸附时间对甲型H3N2流感病毒易感性的影响,确定最佳培养条件。结果不同胞龄MDCK细胞接种H3N2病毒后,胞龄为3 d、4 d的细胞所收获的病毒液HA滴度均明显高于其他组,差异有统计学意义(F=1. 279,P=0. 027);对复苏后第2代、第3代、第4代细胞进行接种后,H3N2病毒HA均明显高于第一代细胞,差异有统计学意义(F=0. 765,P=0. 008);病毒接种吸附时间(1～2 h)对甲型H3N2病毒HA滴度没有明显影响,差异无统计学意义(F=2. 743,P=0. 178)。结论甲型H3N2病毒接种于新复苏MDCK细胞最佳培养条件为:选用复苏后传代培养至第二代及以后、胞龄3～4 d的MDCK细胞进行接种,接种吸附时间1～2 h之内,可获得HA滴度较高的甲型H3N2流感病毒液。

氟化钠对人原代成骨细胞p21基因组蛋白乙酰化及表达的影响

[目的]观察氟化钠对人原代成骨细胞p21基因组蛋白乙酰化水平、m RNA转录及蛋白表达的影响,为阐释氟骨症发生分子机制提供依据。[方法]以0、125、250、500、1 000μmol/L氟化钠处理人原代成骨细胞72 h,定量染色质免疫共沉淀技术检测p21基因转录调控区Ch IP1区域及编码区Ch IP2区域组蛋白乙酰化水平,实时荧光定量PCR法检测p21基因m RNA转录水平,免疫印迹法检测P21蛋白表达。[结果]氟化钠处理的0、125、250、500、1 000μmol/L浓度组中,p21基因转录调控区Ch IP1区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1.998±0.085、1.644±0.162、1.381±0.069、1.280±0.129、1.040±0.270,差异有统计学意义(F=15.757,P<0.05);组蛋白H3K14乙酰化水平分别为1.344±0.068、1.248±0.070、1.140±0.090、1.040±0.116、0.770±0.059,差异有统计学意义(F=21.284,P<0.05);组蛋白H4K16乙酰化水平分别为1.330±0.084、1.251±0.085、1.087±0.044、0.854±0.070、0.788±0.051,差异有统计学意义(F=36.429,P<0.05)。不同浓度染氟组中,编码区Ch IP2区域组蛋白H3K9、H3K14、H4K16乙酰化水平差异均无统计学意义(F=0.084、0.206、0.500,均P>0.05)。p21基因m RNA转录水平分别为2.65±0.35、1.93±0.48、0.88±0.17、0.82±0.09、0.67±0.16,差异有统计学意义(F=3.90,P<0.05);P21蛋白表达水平分别为1.62±0.06、1.02±0.08、0.84±0.07、0.26±0.05、0.07±0.03,差异亦有统计学意义(F=281.58,P<0.05)。[结论]氟可致人原代成骨细胞p21基因转录调控区组蛋白乙酰化水平降低,抑制p21基因m RNA转录及蛋白表达,可能是氟致人成骨细胞增殖活跃的重要分子机制之一。

贵阳市2015～2017年土壤蛔虫卵污染监测结果分析

目的了解2015-2017年贵阳市土壤中蛔虫卵污染情况,评估当地居民感染蛔虫卵的风险。方法采用分层随机抽样方法选取贵阳市3个区县,2015～2017年共采集农田土壤180份,检测蛔虫卵及蛔虫活卵数,采用χ~2检验比较不同年份、地区土壤蛔虫卵检出率的差异。结果 2015-2017年共监测土壤180份,蛔虫卵检出率分别为36.7%、30.0%、28.3%;活卵检出率分别为33.3%、30.0%、25.0%。三年之间的土壤人蛔虫卵检出率有降低趋势,差异无统计学意义(X^2=1.016,P=0.602)。以乌当区蛔虫卵检出率最高,为35.0%;3个区县蛔虫卵检出率差异无统计学意义(X^2=0.049,P=0.976),不同地区活虫卵检出率差异无统计学意义(X^2=1.658,P=0.436)。结论贵阳市土壤蛔虫卵和活卵检出率较高,农村环境整治和粪便无害化处理工作需进一步加强。

HDAC1在燃煤污染型氟暴露人群及染氟人原代成骨细胞中的转录及表达

目的本研究以燃煤污染型氟人群和原代人成骨细胞为研究对象,检测氟暴露对组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)m RNA转录及蛋白的表达的影响,从人群和细胞两个体系探讨HDAC1基因在地方性氟中毒发生发展中的作用。方法选择贵州省燃煤污染型地方性氟中毒病区295例氟暴露人群及非氟暴露区85例村民作为调查对象,在知情同意的原则下,采集调查对象的尿液及外周血。依据尿氟(UF)含量将调查对象分为正常尿氟组(UF<1.96 mg/g Cr,140例)、低氟组(1.96 mg/g Cr≤UF<3.92 mg/g Cr,93例)、中氟组(3.92 mg/g Cr≤UF<7.84 mg/g Cr,82例)和高氟组(UF≥7.84 mg/g Cr,65例)。同时以0、125、250、500、1 000μmol/L氟化钠处理人原代成骨细胞72 h。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测氟暴露人群外周血及染氟人原代成骨细胞HDAC1 m RNA水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(Western-blot)分别检测外周血、成骨细胞HDAC1蛋白表达。结果调查对象外周血HDAC1 m RNA转录水平各组间比较差异有统计学意义(F=16.502,P<0.05),低、中、高尿氟组HDAC1 m RNA水平均低于正常尿氟组(P<0.05);外周血HDAC1蛋白表达,各组间比较差异有统计学意义(F=4.885,P<0.05),低、中、高尿氟组HDAC1蛋白含量均高于正常尿氟组(P<0.05)。氟化钠处理人成骨细胞72 h后,HDAC1 m RNA水平,组间比较差异有统计学意义(F=226.81,P<0.05),随着染氟浓度的升高,HDAC1 m RNA转录水平逐渐升高(P<0.05);HDAC1蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=20.60,P<0.05);随着染氟浓度的升高,HDAC1蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05)。结论 HDAC1参与氟中毒的发生发展过程,其蛋白表达增强可能是氟骨症发生的早期分子事件。